響應(yīng)面法設(shè)計(jì)降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑的研究

1、門文卉，陳晗，林連兵，鄧先余*（昆明理工大學(xué)，生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南省昆明市 郵編650500） 摘要：對(duì)澤瀉、決明子、絞股藍(lán)超微粉碎物用量進(jìn)行優(yōu)化組合，探索降低雞蛋膽固醇的中草藥復(fù)方添加劑配比，依據(jù)響應(yīng)面法原理使用Box-Behnken設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)學(xué)模型并評(píng)估最優(yōu)配比下中草藥復(fù)方添加劑的效果。結(jié)果表明，中草藥復(fù)方最佳配比為：澤瀉超微粉碎物用量695.49mg，決明子超微粉碎物用量893.14mg，絞股藍(lán)超微粉碎物用量334.13mg，該條件下檢測(cè)雞蛋膽固醇含量為2.48mmol/L，與空白對(duì)照相比，試驗(yàn)組的料蛋比降低了33.64%，產(chǎn)蛋率提高了11.73%，有顯著性差異(p<0.05)

2、；顯著降低了蛋黃中的膽固醇含量69.90%和甘油三酯含量41.78%(p<0.05)，顯著提高蛋雞免疫能力(p<0.05)。響應(yīng)面法能夠用于中草藥復(fù)方添加劑處方配比優(yōu)化，此配方能很好的降低雞蛋膽固醇，為實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：響應(yīng)面；雞蛋；膽固醇；中草藥復(fù)方 中圖分類號(hào)：S831.5 The study of compound Chinese herb additives optimization for reduction of egg cholesterol content by response surface methodMENG Wen-hui, CHEN Han,

3、 LIN Lian-bin, DENG Xian-yu*（College of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Yunnan650500, China）Abstract: The quantity of superfine comminution of Alisma orientale, semen cassia and Gynostemma pentaphyllum were optimized according to the mathematic model built

4、by Box-Behnken Design on the rationale of response surface methodology and evaluate the effect of Chinese herb additives. The result was that: the best Chinese Herb Additives composition contained 695.49mg of superfine comminution of Alisma orientale, 893.14mg of superfine comminution of semen cassi

5、a, 334.13mg of superfine comminution of Gynostemma pentaphyllum. Under these conditions, the egg cholesterol concentrations was 2.48mmol/L. Compared with control group, the feed-egg rate was obviously dropped by 33.64%, the egg-laying rate increased obviously by 5.35%(p<0.05), significantly reduc

6、e egg yolk cholesterol and triglyceride levels by 69.90%, 41.78%(p<0.05), significantly increase the immune index(p<0.05). Response surface methodology could be adopted for the optimize the ratio of Chinese herb additive formulation, which can lower cholesterol eggs well, provide a theoretical

7、 basis for the actual production.Key worsds: response surface methodology; egg; cholesterol content; Chinese herb additives 隨著生活水平的不斷提高，人們?cè)絹?lái)越重視飲食結(jié)構(gòu)均衡、來(lái)源安全可靠。雞蛋營(yíng)養(yǎng)均衡，價(jià)格便宜深受人們喜愛，蛋黃粉、全蛋粉等產(chǎn)品的銷量也逐年增加，但其膽固醇含量較高，長(zhǎng)期大量食用對(duì)人類健康造成一定威脅。有研究指出從機(jī)體外攝入大量膽固醇會(huì)導(dǎo)致血液中的膽固醇隨之升高，可能誘發(fā)腦血栓、冠狀動(dòng)脈硬化等心血管疾病。為避免人體從蛋中攝取過(guò)多的膽固醇并提高雞蛋營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，

8、降低雞蛋膽固醇的研究十分必要。近年來(lái)有研究在飼料中加入他汀類化學(xué)合成藥物1、益生素2、微量元素3等添加物，或是用生物工程4的方法來(lái)降低雞蛋膽固醇，但存在化學(xué)殘留、效果不顯著或是難度大，短期難以達(dá)到效果等缺點(diǎn)。我國(guó)中草藥資源豐富，且中草藥毒副作用小，殘留性小，合理選擇不同的中草藥并合理配比能使效果更好。澤瀉為多年沼生澤瀉科植物澤瀉的干燥塊莖，含有三萜、二萜、倍半萜等成分，具有治療脂肪肝、降血糖、降血壓以及減肥等多種作用5。決明子為豆科植物決明的干燥成熟種子，含有蒽醌類、脂肪酸類、吡咯酮類等成分，具有降血脂、降血壓等作用6。絞股藍(lán)屬草質(zhì)攀援植物，含有絞股藍(lán)皂苷、黃酮等成分，具有清熱解毒、增強(qiáng)機(jī)體免

9、疫力等作用7。本研究采用澤瀉、決明子、絞股藍(lán)三種中草藥復(fù)合，制成中草藥復(fù)方添加劑，通過(guò)采用響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)來(lái)研究其降低雞蛋膽固醇最佳效果的復(fù)合配比。1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料 澤瀉超微粉碎物、決明子超微粉碎物、絞股藍(lán)超微粉碎物（由四川同泰植物化工有限公司提供，超微粉碎物可以過(guò)300目篩），羅氏比色扇，分析天平（上海光正醫(yī)療儀器有限公司），游標(biāo)卡尺（上海匯一尺業(yè)有限公司）、總膽固醇（CHO酶法）測(cè)試盒、甘油三酯試劑盒（酶法）、高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒（試劑盒均購(gòu)買于南京建成生物工程研究所）。1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼喂 本實(shí)驗(yàn)選用190日齡健康、體重和產(chǎn)蛋率相近的綠

10、殼蛋雞255羽。采用隨機(jī)分組原則，將其分為17組，每組15羽。預(yù)飼期14天，各組統(tǒng)一飼喂基礎(chǔ)日糧，預(yù)飼期結(jié)束時(shí)統(tǒng)計(jì)各組雞蛋膽固醇含量，經(jīng)分析無(wú)顯著差異才開始進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，正式實(shí)驗(yàn)4周。每組飼喂基礎(chǔ)日糧外，按照響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加中草藥復(fù)方添加劑。1.3 飼養(yǎng)管理及基礎(chǔ)日糧組成蛋雞養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在綠色循環(huán)農(nóng)業(yè)實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。采用三層立體籠飼養(yǎng)，每日喂干粉料2次，每次每羽雞飼喂50克，自由采食和飲水。保持良好的通風(fēng)，適宜的溫度和濕度。按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行防疫和雞舍消毒?；A(chǔ)日糧參照中華人民共和國(guó)專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 33-2004，結(jié)合綠殼蛋雞生長(zhǎng)情況，自行設(shè)計(jì)日糧配方，如表1所示。表1 雞日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平T

11、able1 The composition and nutrient levelof hens daily diet 原料組成含量%營(yíng)養(yǎng)水平含量%玉米粉61代謝能MJ/KG11.42豆粕22粗蛋白18.17麩皮2鈣3.73魚粉4.5總磷0.64石粉9蛋氨酸0.31食鹽0.2胱氨酸0.27硫化鈣3賴氨酸0.97預(yù)混料0.3注：1. 每千克添加維生素A 9000IU，維生素D 2500IU，維生素E 20IU，維生素12 12g，維生素K 2.4mg。2.每千克飼料添加微量元素Mn 100mg，Zn 60mg，F(xiàn)e 25mg，Cu 5mg，Co 0.1mg。1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用響應(yīng)面分析法（Re

12、sponse Surface Methodology，RSM）尋求最優(yōu)參數(shù)。在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取澤瀉超微粉碎物用量（1001000mg）、決明子超微粉碎物用量（1501500mg）、絞股藍(lán)超微粉碎物用量（60600mg）三個(gè)因素為自變量，以雞蛋蛋黃中的膽固醇含量作為響應(yīng)值，表觀中草藥復(fù)方添加劑降低雞蛋膽固醇的效果。根據(jù)響應(yīng)面法中的Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，運(yùn)用Design Expert 8.0設(shè)計(jì)3因素、3水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)因素與水平見表2，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表3，每邊中心點(diǎn)為5，共17組實(shí)驗(yàn)）。表2 響應(yīng)面試驗(yàn)因素、水平表Table2 Factors and leve1s of r

13、esponse surface因素編碼編碼水平-101澤瀉超微粉碎物用量A1005501000決明子超微粉碎物用量B1508251500絞股藍(lán)超微粉碎物用量C60330600表3 響應(yīng)面設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果Table3 Experimental design and results of response surface編號(hào)因素水平蛋黃膽固醇含量(mmol/L)澤瀉超微粉碎物用量（mg）決明子超微粉碎物用量（mg）絞股藍(lán)超微粉碎物用量（mg）實(shí)測(cè)值預(yù)測(cè)值1-1-105.024.9521-103.923.863-1104.304.3641103.583.655-10-15.185.17610-14.3

14、24.317-1014.924.9481013.994.0090-1-14.965.041001-14.354.30110-114.374.42120114.444.36130002.752.52140002.532.52150002.342.52160002.472.52170002.532.521.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 在1.2的255羽雞外另選取30羽雞，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和空白組兩組，每組15羽。實(shí)驗(yàn)組日糧中（除基礎(chǔ)日糧外還要）添加按照最優(yōu)配方比配制的降膽固醇中草藥復(fù)方添加劑，空白對(duì)照則只飼喂基礎(chǔ)日糧，飼喂方法和管理均同1.3。預(yù)飼期2周結(jié)束后，進(jìn)行4周正式試驗(yàn)，收集第28天的雞蛋，進(jìn)行蛋黃膽固醇

15、含量測(cè)定。把實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)值和預(yù)測(cè)值相對(duì)比，進(jìn)行模型驗(yàn)證。1.6 中草藥復(fù)方添加劑效果評(píng)估與(評(píng)估)方法1.6.1 生產(chǎn)性能指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)期間每日以組為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重，每七天末稱重一周余料量，統(tǒng)計(jì)日均產(chǎn)蛋率、日均采食量和料蛋比等指標(biāo)。日均產(chǎn)蛋率%=總蛋數(shù)/（天數(shù)*雞的數(shù)量）*100%日均采食量（g）=（每周飼喂量-每周余料量）/（天數(shù)*雞的數(shù)量）料蛋比=總采食量（g）/總蛋重（g）1.6.2 蛋的品質(zhì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)第28天，隨機(jī)抽取兩組雞蛋各5枚，測(cè)定抽樣雞蛋的蛋品質(zhì)指標(biāo)。用分析天平測(cè)定蛋重、蛋黃重、蛋殼重，用游標(biāo)卡尺測(cè)定蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋殼厚度，用羅氏比色扇測(cè)定蛋黃顏色。1.6.3 蛋黃膽固醇

16、含量、甘油三酯含量的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)第28天，隨機(jī)抽取兩組雞蛋各5枚，分離蛋黃后攪勻。稱取1.00g蛋黃液，0.9%生理鹽水溶解，20ml容量瓶定容待測(cè)。利用試劑盒，采用膽固醇氧化酶法測(cè)定總膽固醇含量；采用酶法測(cè)定甘油三酯含量、高密度脂蛋白膽固醇含量和低密度脂蛋白膽固醇含量。1.6.4 血清生化指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁水禁食24小時(shí)，每組抽樣5羽雞，進(jìn)行翅靜脈采血35mL，4靜置12小時(shí)，離心10分鐘（4000r/min），抽取上清液待測(cè)。利用試劑盒，采用膽固醇氧化酶法測(cè)定血清中總膽固醇含量，采用酶法測(cè)定甘油三酯含量、采用直接法測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇含量和低密度脂蛋白膽固醇含量。根據(jù)Friedewald公

17、式，極低密度脂蛋白=甘油三脂含量/F，其中甘油三酯含量單位為“mmol/L”，F(xiàn)=2.2，由此可以計(jì)算出極低密度脂蛋白的含量。1.6.5 免疫指數(shù)的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁水禁食24小時(shí)。每組隨機(jī)抽取3羽雞進(jìn)行屠宰實(shí)驗(yàn)，摘取雞胸腺、脾臟和法氏囊，濾紙吸取表面血液，并剝離表面脂肪和結(jié)締組織，最后稱重。免疫器官指數(shù)=免疫器官重（g）/活體重（kg）1.6.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss19.0軟件 ONE-WAY ANOVA進(jìn)行方差分析，采用Duncans法進(jìn)行均值的多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P0.05作為顯著性差異的判斷標(biāo)準(zhǔn)。2 結(jié)果與分析2.1模型的建立及顯著性檢

18、驗(yàn) 利用Design Expert 8.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到雞蛋膽固醇（Y）對(duì)澤瀉超微粉碎物用量（A）、決明子超微粉碎物用量（B）、絞股藍(lán)超微粉碎物用量（C）的回歸方程為:Y=2.52-0.45*A-0.20*B-0.14*C+0.095*A*B-0.017*A*C+0.17*B*C+0.88*A2+0.80*B2+1.2*C2 回歸方程中，各變量對(duì)響應(yīng)值影響的顯著性用F檢驗(yàn)法判定，概率p值越小，則顯著性程度越高：p0.01為極顯著，p0.05為顯著。對(duì)該模型進(jìn)行方差分析和擬合度檢驗(yàn)，結(jié)果見表4和5。由表4可知，模型的F值為99.05，p0.0001，說(shuō)明該模型方程極為顯著

19、;模型不失擬（p=0.530.05），這說(shuō)明該方程在被研究的回歸區(qū)域擬合較好；對(duì)回歸模型顯著性分析可知因素C的p值0.0227，小于0.05，說(shuō)明對(duì)降低膽固醇效果的影響顯著；A、B的p值分別為< 0.0001、0.0037，小于0.01，說(shuō)明對(duì)結(jié)果影響極顯著；BC的p值為0.0372，表明因素B和C對(duì)結(jié)果的交互性影響顯著，而其他因素兩兩交互效應(yīng)不顯著。A2、B2、C2的p值均小于0.0001，說(shuō)明對(duì)結(jié)果的影響極為顯著。由表5可知決定系數(shù)為0.99，校正決定系數(shù)為0.98，均接近1，模型的變異系數(shù)較低3.41，說(shuō)明該模型相關(guān)性較好，試驗(yàn)誤差小，可以用此模型對(duì)中草藥復(fù)方添加劑配比進(jìn)行分析和預(yù)

20、測(cè)。2.2 各因素及其交互作用對(duì)膽固醇含量的影響如圖1所示，雞蛋膽固醇含量隨決明子超微粉碎物、澤瀉超微粉碎物、絞股藍(lán)超微粉碎物用量的增加而下降。當(dāng)這三種中草藥的用量到達(dá)中心值后，雞蛋膽固醇含量又隨這三種中草藥用量的上升而上升。等高線形狀可以反映各因素交互作用的強(qiáng)弱。由圖1可知決明子超微粉碎物（B）、絞股藍(lán)超微粉碎物（C）用量?jī)梢蛩氐雀呔€為橢圓形，交互作用明顯。當(dāng)決明子超微粉碎物用量為825mg，絞股藍(lán)超微粉碎物用量為330mg時(shí),膽固醇含量最低。AB兩因素、AC兩因素等高線呈近似圓形，交互作用不明顯。表4 響應(yīng)面方差分析Table4 Analysis of variance of respon

21、se surface變異來(lái)源Source平方和Sum of Squares自由度df均方Mean SquareF值F ValueP值P Valure模型 Model15.6491.7499.05< 0.0001A1.6311.6392.83< 0.0001B0.3210.3218.230.0037C0.1510.158.460.0227AB0.03610.0362.060.1946AC0.00110.0010.0700.7992BC0.1210.126.590.0372A23.2413.24184.43< 0.0001B22.7212.72155.19< 0.0001C

22、26.0816.08346.50< 0.0001殘差 Residual0.1270.018失擬項(xiàng) Lack of Fit0.03530.0120.530.6857純誤差 Pure Error0.08840.022總變異 Cor Total15.7716表5 擬合度檢驗(yàn)Table5 Goodness of fit test均值Mean3.88誤差Deviation（standard deviation）0.13決定系數(shù)Coefficient of determination（R-Squared）0.99信噪比Signal to noise ratio（Adequate precision）

23、26.07校正決定系數(shù)Adjuested Coefficient of determination（R-Squared）0.98預(yù)測(cè)決定系數(shù)Predicted Coefficient of determination（R-Squared）0.96變異系數(shù)C.V%（coefficient of variation）3.41圖1 各因素及其交互作用對(duì)膽固醇含量的影響Fig1 Effect of variables and their interactions on cholesterol content2.3 模型驗(yàn)證經(jīng)Design Expert 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面分析，可以得到中草藥復(fù)方最佳配

24、方為澤瀉超微粉碎物用量為695.49mg，決明子超微粉碎物用量為893.14mg，絞股藍(lán)超微粉碎物用量為334.13mg，膽固醇含量最低2.46mmol/L。在此配方下飼喂蛋雞28天，檢測(cè)雞蛋膽固醇含量，結(jié)果如表6示。實(shí)驗(yàn)響應(yīng)值2.48mol/L與預(yù)測(cè)響應(yīng)值接近，表明所選模型可以較好地預(yù)測(cè)降低雞蛋膽固醇的中草藥復(fù)方添加劑參數(shù)。表6 最優(yōu)條件下響應(yīng)值的預(yù)測(cè)值和實(shí)驗(yàn)值Table6 Predicted and experimental response value at optimum conditions因素水平膽固醇含量mmol/L澤瀉超微粉碎物用量決明子超微粉碎物用量絞股藍(lán)超微粉碎物用量預(yù)測(cè)響

25、應(yīng)值實(shí)驗(yàn)響應(yīng)值695.49mg893.14mg334.13mg2.462.48±0.362.4 中草藥復(fù)方添加劑效果評(píng)估2.4.1 生產(chǎn)性能檢測(cè)如表7所示，實(shí)驗(yàn)組與空白組相比，(實(shí)驗(yàn)組的)產(chǎn)蛋率由53.43%提高到65.16%，提高了11.73%；日均采食量由77.57g增加到89.45g，增加了13.28%；料蛋比由2.86下降到2.14，下降了33.64%，三個(gè)指標(biāo)均具有顯著性差異（p0.05）。表7 中草藥復(fù)方添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響Table7 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on la

26、ying hens producing performance檢測(cè)項(xiàng)目組別產(chǎn)蛋率%Laying rate日均采食量（g） Average daily feed intake料蛋比Feed-egg ratio實(shí)驗(yàn)組65.16±0.35a89.45±0.51b2.14±0.43b空白組53.43±0.20b77.57±0.49a 2.86±0.15a注：同列數(shù)據(jù)旁標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著，P0.05；相同或不標(biāo)字母表示差異不顯著 P0.05；下同。2.4.2 雞蛋品質(zhì)檢測(cè) 如表8所示，實(shí)驗(yàn)組和空白組對(duì)比，（實(shí)驗(yàn)組的）蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼

27、厚度、蛋殼相對(duì)重差異不顯著（p0.05），蛋黃顏色上升兩個(gè)色度，蛋黃相對(duì)重比對(duì)照組提高2.41%，具有顯著性差異（P0.05）。表8 中草藥復(fù)方添加劑對(duì)蛋品質(zhì)的影響Table8 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on egg quality組別項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)組空白組組別項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)組空白組蛋殼厚度（mm）Eggshell thickness0.41±0.070.44±0.06蛋重（g）Egg weight53.65±6.3350.44±3.88蛋形指數(shù)Egg shape inde

28、x1.32±0.321.19±0.12蛋黃顏色Yolk color12.29±0.75a9.64±0.58b蛋黃相對(duì)重（%）Yolk relative weight29.55±1.44a27.14±1.26b哈氏單位Haugh unit87.59±1.7286.07±1.55蛋殼相對(duì)重（%）Eggshell relative weight7.32±0.27b7.59±0.39a2.4.3 免疫指數(shù)的檢測(cè) 免疫器官指數(shù)是指中草藥復(fù)方添加劑對(duì)蛋雞免疫能力的作用效果，免疫器官指數(shù)=免疫器官重（g）/活

29、體重（kg）。由表9可知，中草藥復(fù)方添加劑使仔雞的各種免疫器官指數(shù)均有增加。實(shí)驗(yàn)組胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)分別為3.16、2.79、1.99，分別比空白組提高了0.23、0.67、0.23，均具有顯著差異(P0.05)。 表9 中草藥復(fù)方添加劑對(duì)免疫器官指數(shù)的影響Table 9 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on indices of immune organs in hens項(xiàng)目組別胸腺指數(shù)Thymus index法氏囊指數(shù)Bursa of Fabricius index脾臟指數(shù)Spleen in

30、dex實(shí)驗(yàn)組3.16±0.13a2.79±0.19a1.99±0.14a空白組2.93±0.19b2.12±0.19b1.76±0.13b2.4.4 蛋黃膽固醇含量、甘油三酯含量的檢測(cè)如表10所示，實(shí)驗(yàn)組與空白組相比，蛋黃膽固醇含量由8.24 mmol/L下降到2.48 mmol/L，下降了5.76 mmol/L；甘油三酯含量由14.29 mmol/L下降到8.32 mmol/L，下降了5.97 mmol/L。兩個(gè)指標(biāo)均具有顯著性差異（P0.05）。表10 中草藥復(fù)方添加劑對(duì)蛋黃甘油三酯和膽固醇含量的影響Table10 Effects

31、 of the additive of Chinese herbal medicine compound on triglycerides and cholesterols concentration in egg yolk 項(xiàng)目組別膽固醇(mmol/L)TC甘油三酯(mmol/L)TG實(shí)驗(yàn)組2.48±0.36a8.32±0.25a空白組8.24±0.67b14.29±0.57b2.4.5 血清生化指標(biāo)的檢測(cè) 如表11所示，實(shí)驗(yàn)組與空白組相比，膽固醇下降52.90%、甘油三酯下降55.23%、低密度脂蛋白膽固醇下降51.85%、極低密度脂蛋白膽固醇含量下

32、降32.62%，高密度脂蛋白膽固醇含量上升75.6%，均具有顯著性差異（p0.05）。表11 中草藥復(fù)方添加劑對(duì)血清生化指標(biāo)的影響Table11 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on serum biochemical indices項(xiàng)目組別膽固醇(mmol/L)TC甘油三酯(mmol/L)TG低密度脂蛋白膽固醇(mmol/L)LDL-CH高密度脂蛋白膽固醇(mmol/L)HDL-CH極低密度脂蛋白膽固醇(mmol/L)VLDL-CH實(shí)驗(yàn)組2.03±0.26a6.94±1.32a0.13

33、±0.03a0.82±0.16a4.75±0.71b空白組4.31±1.16b15.50±1.46a0.27±0.02b0.20±0.03b7.05±0.66a3 討論現(xiàn)已有文獻(xiàn)報(bào)道中草藥可以提高蛋雞生產(chǎn)性能，通過(guò)改變飼料成分能改善雞蛋品質(zhì)8，如蛋黃顏色和蛋殼厚度。朱寧等7報(bào)道以黃芪、山楂、麥芽、黨參等12味中藥組成的1%復(fù)方添加劑能提高仔雞的平均體重、平均日增重提高6.3%，料蛋比下降3.5%。本實(shí)驗(yàn)使用優(yōu)化后的中草藥復(fù)方添加劑連續(xù)飼喂蛋雞28天后，與空白對(duì)照組相比能顯著提高產(chǎn)蛋率、日均采食量、料蛋比,提高蛋黃比

34、重，加深蛋黃顏色，提高雞蛋品質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能是因?yàn)橹胁菟幪赜械那逑隳艽龠M(jìn)雞群的進(jìn)食，加快消化，增加采食量，同時(shí)中草藥可以影響雞卵子的質(zhì)量和數(shù)量，改善蛋黃顏色和增加蛋黃比重，促進(jìn)產(chǎn)蛋率的提高。胸腺為細(xì)胞免疫器官，脾臟為外周免疫器官，法氏囊是體液免疫器官。免疫器官指數(shù)能直觀反映蛋雞的免疫水平。有研究表明中草藥能在一定程度上提高機(jī)體免疫水平。Wu等9報(bào)道貫葉連翹提取物可以提高小雞體內(nèi)抗體而調(diào)節(jié)免疫水平，達(dá)到治療禽流感的目的。10Hueza等人報(bào)道在肉雞日糧中加入0.75%的決明子，飼喂42天發(fā)現(xiàn)其可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的活性，增加雞體內(nèi)過(guò)氧化氫含量。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，和空白對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組能夠顯著提高胸腺

35、指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。蛋雞約2月齡時(shí)法氏囊最發(fā)達(dá)，以后隨著性器官發(fā)育日漸成熟而逐步萎縮。大量試驗(yàn)顯示，雞體內(nèi)的免疫細(xì)胞B細(xì)胞主要來(lái)源于法氏囊。本復(fù)方能提高免疫能力的原因可能是其能促進(jìn)免疫器官的良好生長(zhǎng)發(fā)育，并且延緩了免疫器官的萎縮，可以直接加強(qiáng)機(jī)體的體液免疫功能和器官免疫功能。高密度脂蛋白為血清蛋白之一，可輸出膽固醇促進(jìn)膽固醇的代謝，所以現(xiàn)在作為動(dòng)脈硬化預(yù)防因子而受到重視。高密度脂蛋白運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過(guò)膽汁從腸道排出。所以高密度脂蛋白是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子，俗稱“血管清道夫”。低密度脂蛋白是一種運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞的脂蛋白

36、顆粒，然后膽固醇可被氧化成氧化低密度脂蛋白，當(dāng)?shù)兔芏戎鞍?，尤其是氧化修飾的低密度脂蛋白過(guò)量時(shí)，它攜帶的膽固醇便積存在動(dòng)脈壁上，久了容易引起動(dòng)脈硬化。因此低密度脂蛋白被稱為“壞的膽固醇”。本實(shí)驗(yàn)配制的中草藥復(fù)方添加劑能顯著降低蛋黃和血清中膽固醇和甘油三酯含量，顯著降低血清中低密度脂蛋白膽固醇的含量，升高血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量。中醫(yī)臨床辯證一般認(rèn)為高脂血癥主要是氣滯血瘀、肝腎虧虛、脾虛痰濕等證引起，在治療時(shí)辨證施治，多用補(bǔ)益肝腎、健脾化濕、活血化瘀、清熱通便、消食化痰藥。澤瀉具有利水、清濕熱和泄熱等功效，可用于治療小便不利、水腫脹滿、泄瀉尿少、痰飲眩暈、熱淋澀痛以及高血脂癥等病癥；決明子

37、入腎經(jīng)和肝經(jīng)，有消積通便、清肝益腎、逐痰化濁、降脂等功效；絞股藍(lán)歸肝脾，具有健脾祛痰、利濕化瘀、降濁等功效?，F(xiàn)代臨床藥理研究表明澤瀉中主要成分為三萜類化合物，能抑制外源性膽固醇和甘油三酯的吸收，影響內(nèi)源性膽固醇代謝，加速三酰甘油的水解或影響肝臟對(duì)其合成，同時(shí)升高高密度脂蛋白膽固醇含量，清運(yùn)動(dòng)脈壁上的膽固醇，促進(jìn)肝臟脂質(zhì)的代謝和排泄11。決明子中主要成分為蒽醌類化合物，具有降血脂的作用。研究指出其可以減少膽固醇的吸收，二來(lái)促進(jìn)脂類轉(zhuǎn)運(yùn)和排泄，第三可以降低膽固醇合成酶的活性或減少乙酰輔酶A的生成6。絞股藍(lán)主要成分為絞股藍(lán)皂苷，具有抗腫瘤、降血脂、延長(zhǎng)細(xì)胞壽命的作用12。張文濤13指出澤瀉有減輕肝臟

38、脂質(zhì)蓄積的作用，減小脂肪空泡，減輕細(xì)胞炎癥浸潤(rùn)的作用。盧錕剛14等人報(bào)道將決明子、丹參、絞股藍(lán)配伍使用能顯著降低高脂血癥小鼠的血中膽固醇和甘油三酯，升高血清中高密度脂蛋白膽固醇。綦振峰15等人報(bào)道將山楂和決明子提取物配伍使用飼喂小鼠，能顯著降低小鼠的腎臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、低密度脂蛋白膽固醇含量,極顯著升高高密度脂蛋白膽固醇含量。本中草藥復(fù)方添加劑降低膽固醇的作用效果與文獻(xiàn)報(bào)道一致，都能很好地達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。4 結(jié)論利用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件Design Expert 8.0，采用Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)用于降低雞蛋膽固醇含量的中草藥復(fù)方添加劑的配比進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明三種中草藥超微粉碎物降低雞蛋膽

39、固醇含量的效果依次為：澤瀉決明子絞股藍(lán)，決明子和絞股藍(lán)之間存在顯著的交互作用，澤瀉和決明子、澤瀉和絞股藍(lán)之間的交互作用不明顯。中草藥復(fù)方添加劑最佳配比為：澤瀉超微粉碎物用量695.49mg，決明子超微粉碎物用量893.14mg，絞股藍(lán)超微粉碎物用量334.13mg，該條件下預(yù)測(cè)雞蛋膽固醇含量為2.46mmol/L。采用該條件進(jìn)行了重復(fù)試驗(yàn)，得到的驗(yàn)證結(jié)果2.48 mmol/L和預(yù)測(cè)值吻合較好，說(shuō)明優(yōu)化效果顯著，進(jìn)一步證明該回歸模型是有效可靠的。評(píng)估本中草藥復(fù)方添加劑發(fā)現(xiàn)其可以提高產(chǎn)蛋率11.73%，降低料蛋比33.64%；顯著降低蛋黃膽固醇含量69.90%和甘油三酯含量41.78%；血清膽固醇

40、下降52.90%、血清甘油三酯下降55.23%、血清低密度脂蛋白膽固醇含量下降51.85%、血清極低密度脂蛋白膽固醇含量下降32.62%，血清高密度脂蛋白膽固醇含量上升75.6%；胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)分別提高了0.23、0.67、0.23。本中草藥復(fù)方添加劑降低膽固醇的作用較好，能很好的達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，為實(shí)際生產(chǎn)提理論依據(jù)。參考文獻(xiàn) 1 Qureshi A A, Peterson D M. The combined effects of novel tocotrienols and lovastatin on lipid metabolism in chickensJ. Atheros

41、clerosis, 2001, 156(1): 39-47. 2 Jr. Ribeiro V, Albino L F T, Rostagno H S, et al. Effects of the dietary supplementation of Bacillus subtilis levels on performance, egg quality and excreta moisture of layersJ.Animal feed science and technology, 2014, 195: 142-146. 3 袁建敏，甘冰，張?zhí)靽?guó)，等. 肉用仔雞日糧中添加蛋氨酸銅、鋅和錳對(duì)糞便微量元素排放的研究J.家畜生態(tài)學(xué)報(bào),2008(06):66-70. 4 Elkin R G. Reducing shell egg cholesterol content. II. Review of appro