ELISA試驗(yàn)方法的基本原理

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay, ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。  ELISA的原理  ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。  進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，樣品中的受檢物質(zhì)（抗原或抗體）與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過(guò)洗板除去非結(jié)合物，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗

2、體，此時(shí)，能固定下來(lái)的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過(guò)加入與酶反應(yīng)的底物后顯色，根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進(jìn)行定性或定量的分析。  由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的靈敏度。  ELISA的基本類型  ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：1.  固相的抗原或抗體；2.  酶標(biāo)記的抗原或抗體；3.  酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。  1.  雙抗體夾心法測(cè)抗原

3、60; 針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。2.  競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原  首 先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物 降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。此方法測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，對(duì)小分子抗原如激素和藥物類的測(cè)定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快，缺點(diǎn)是需要較 多量的酶標(biāo)記抗原。3.  免疫抑制法測(cè)抗原   被檢標(biāo)本對(duì)底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比，二者之差即為預(yù)測(cè)抗原的量。4.  間接法測(cè)抗體是檢測(cè)抗體最常用的方法，原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。   本法只要更換不同的固相抗