性別對(duì)超重人群皮下脂肪脂聯(lián)素mRNA表達(dá)的影響

1、性別對(duì)超重人群皮下脂肪脂聯(lián)素mRNA表達(dá)的影響【摘要】 目的 探討性別因素對(duì)超重人群皮下（SC）脂肪組織脂聯(lián)素（APN）mRNA（SA mRNA）表達(dá)的影響。方法 選取22例男性超重患者體質(zhì)量指數(shù)（BMI）27 kg/m2,OBM組、26例女性超重（BMI25 kg/m2,OBF組）以及40例正常體質(zhì)量者（BMI<25 kg/m2,男性為NM組，女性為NF組），實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定腹部SA mRNA的表達(dá)，同時(shí)測(cè)定血糖血清膽固醇(TC)、甘油三酯（TG）、胰島素水平等生化指標(biāo)。結(jié)果 在超重人群中，OBF組的SA mRNA明顯高于OBM組（P<0.05）；但OBF組SA mRNA仍

2、低于NM組（P<0.01）。SA mRNA與BMI、腰臀比(WHR)、TC和TG水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.290,r=-0.178,r=-0.247,r=-0.178,P<0.05)。逐步回歸分析以SA mRNA為因變量，BMI,WHR,TC,TG以及HOMA等作為自變量，結(jié)果顯示，在整體人群中，BMI和TC入選(R2=0.030,P<0.05,R2=0.169,P<0.01)。在OBM組中，只有TC入選(R2=0.274,P<0.01)。結(jié)論 女性超重人群SA mRNA高于超重男性，提示SA mRNA的性別差異主要表現(xiàn)在超重人群中，體重適中者則無(wú)此關(guān)聯(lián)。 【關(guān)鍵詞

3、】 脂聯(lián)素；超重；性別因素；脂肪組織；基因表達(dá)脂肪組織不僅是一個(gè)能量?jī)?chǔ)存器官，也是人體內(nèi)一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官1，可以分泌包括脂聯(lián)素（APN）在內(nèi)的多種活性蛋白因子，發(fā)揮不同的生物代謝功能。研究表明，APN具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗胰島素抵抗和抗炎等作用，在保護(hù)肥胖相關(guān)疾病，如心血管疾病和糖尿病中發(fā)揮重要作用2。本研究選取2004年9月至2006年2月在天津市公安醫(yī)院開(kāi)腹手術(shù)的超重患者，檢測(cè)其皮下（SC）脂肪組織APN mRNA（SA mRNA）的表達(dá)，并測(cè)定一系列相關(guān)代謝指標(biāo)的水平，進(jìn)一步探討SA mRNA表達(dá)水平與性別之間的關(guān)系。1 材料與方法1.1 對(duì)象脂肪組織來(lái)自腹部擇期手術(shù)的88例患者，其

4、中，超重人群48例，女性超重（OBF組）患者26例，平均年齡（50.659.39）歲，男性超重（OBM組）患者22例，平均年齡（48.0910.77）歲；正常體質(zhì)量40例，女性（NF組）22例，平均年齡（43.455.81）歲，男性（NF組）18例，平均年齡（49.786.48）歲。超重人群判斷依據(jù)體質(zhì)量指數(shù)（BMI），根據(jù)亞洲國(guó)家大規(guī)模臨床研究的結(jié)論，男性BMI27 kg/m2或女性BMI25 kg/m2視為超重。所有研究對(duì)象均無(wú)糖尿病、高血壓、甲亢、Cushing綜合征及其他內(nèi)分泌代謝疾病，也無(wú)惡性腫瘤、心腎功能衰竭、嚴(yán)重肝臟疾患及其他嚴(yán)重全身性疾病患者；近期未曾服用減肥及其他影響脂肪代謝

5、藥物。1.2 標(biāo)本采集測(cè)量體重、身高、血壓、腰圍、臀圍，并計(jì)算BMI、腰臀比（WHR）?？崭谷≈庹徐o脈血5 ml，取血前夜禁食12 h，禁水8 h，取血后分離血清，2 h內(nèi)檢測(cè)血糖，同批次檢測(cè)其他生化指標(biāo)：血漿葡萄糖、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）及胰島素，方法同前3。計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMAIR）=空腹血糖空腹胰島素/22.5。術(shù)中取SC（劍突與臍中點(diǎn)的腹白線處腹壁皮下）脂肪組織約23 g，立即放置液氮中冷凍，并移至-80保存。1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增APN基因片段提取SC脂肪組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，APN及管家基因actin的上下游引物及Taq酶探針的引物見(jiàn)表1

6、。反應(yīng)體系：10 buffer 2.5 l，10 mmol/L dNTP 2 l，MgCl2 3 l（3 mmol/L），APN正義鏈和反義鏈以及actin正義鏈和反義鏈各2 l，APN和actin引物各1 l，Taq DNA 聚合酶0.75 l（3.75 IU），BSA 各0.25 l，模板1 l，滅菌雙蒸水 10.5 l。反應(yīng)條件（Roche公司Lightcycler熱循環(huán)儀）：95 預(yù)變性5 min,95 變性10 s，56 （APN）或58（actin）退火10 s，72延伸12 s，共40個(gè)循環(huán)。表1 RTPCR引物及探針（略）1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以x

7、s表示，計(jì)量資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，組間比較應(yīng)用單因素方差分析，兩兩比較使用LSD法；胰島素和HOMAIR以自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換值進(jìn)行分析。采用Kendalls taub秩相關(guān)分析。多元線性回歸分析采用逐步回歸法。2 結(jié) 果2.1 各組人群間一般情況OBM組和OBF組的體質(zhì)量、BMI明顯高于NM組和NF組（P<0.01）。OBM組WHR較NM組、NF組明顯增高（P<0.01），并且高于OBF組（P <0.05），OBF組WHR高于NM組和NF組（P<0.05）。OBF組和OBM組的TC和TG均明顯高于NM組和NF組（P<0.05）。OBF組的HOMAIR明顯高于NF組（P<

8、;0.05）。其他指標(biāo)如收縮壓、舒張壓、血糖以及血肌酐和血尿酸各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。2.2 SA mRNA的性別差異NF組(1.0010.296)與NM組(1.0000.215)SA mRNA基因表達(dá)量相比略高，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；在超重人群SC脂肪組織，OBF組SA mRNA表達(dá)量(0.1200.057)明顯高于OBM組(0.0280.012)（P<0.05）；OBF組的SA mRNA表達(dá)量仍低于NM組（P<0.01）。表2 各組人群間檢測(cè)指標(biāo)比較(略)2.3 SA mRNA的相關(guān)分析基因表達(dá)量以 CT（CT,adiNCT,a

9、ctin）的值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。CT越大說(shuō)明達(dá)到熒光基值所需的循環(huán)數(shù)越大，則模板量越小，所以在相關(guān)分析中采用CT的值，以保證統(tǒng)計(jì)量與模板量的一致性趨勢(shì)。在觀察對(duì)象總體中，SA mRNA的表達(dá)量與性別無(wú)相關(guān)性（r= 0.119，P>0.05），與BMI、WHR、TC和TG水平呈負(fù)相關(guān)，見(jiàn)表3；在超重人群中，SA mRNA與性別相關(guān)（r= 0.226，P<0.05）。表3 SA mRNA基因表達(dá)量的相關(guān)分析（略）2.4 SA mRNA的回歸分析逐步回歸分析以SA mRNA為因變量，BMI、WHR、TC、TG以及HOMA等作為自變量，結(jié)果顯示，在觀察對(duì)象總體中，BMI和TC入選(R2=0.030

10、,P<0.05,R2=0.169,P<0.01)。在OBM組中，只有TC入選(R2=0.274,P<0.01)。總體人群的SA mRNA的回歸方程為：CT=6.127-1.151 TC-0.229 BMI。OBM組的SA mRNA回歸方程為：CT=0.815-1.709TC，分別對(duì)總體人群和OBM組的自變量進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)。BMI的偏回歸系數(shù)在0.05水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t為2.057，P<0.05），TC的偏回歸系數(shù)在0.05水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為3.246，3.111，P<0.01）。3 討 論 脂肪細(xì)胞增殖與分化異?？蓪?dǎo)致肥胖及脂肪發(fā)育不良等，尤其是肥胖，

11、已日趨成為世界性的健康問(wèn)題，而且是冠心病、高血壓、2型糖尿病等許多嚴(yán)重疾病的共同致病基礎(chǔ)。APN是一種由脂肪組織特異性分泌并在白色脂肪組織中高表達(dá)的多肽類(lèi)物質(zhì)，是體內(nèi)唯一與體脂含量呈負(fù)相關(guān)的脂肪因子，其所在位點(diǎn)3q27是2型糖尿病和代謝綜合征易感基因位點(diǎn)4，研究表明，噻唑烷二酮（TZD）通過(guò)其過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）激動(dòng)劑活性來(lái)上調(diào)APN基因的表達(dá)，從而達(dá)到使胰島素增敏的作用，也因此使得APN成為2型糖尿病和代謝綜合征的新治療靶點(diǎn)。 本研究證實(shí)，超重女性SA mRNA明顯高于超重男性，但均低于正常體重人群的SA mRNA，正常體重女性和男性SA mRNA比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明

12、SA mRNA的性別差異更多的表現(xiàn)在超重人群中，推測(cè)其可能原因：與性激素有關(guān)，在APN發(fā)現(xiàn)之初即被觀察到其在女性體內(nèi)的含量高于男性，而且雌二醇或孕酮并不影響APN水平，男性相對(duì)較低的循環(huán)APN主要?dú)w因于雄激素的影響5；與體質(zhì)不銅有關(guān)，女性與男性脂肪分布存在差異。Kern等6研究顯示，在同等程度的肥胖人群中尤其BMI<30 kg/m2，女性的體脂含量是男性的兩倍，女性的APN基因表達(dá)比男性高65%；與性別間脂肪細(xì)胞的數(shù)量和大小差異有關(guān)，脂肪細(xì)胞的大小與胰島素敏感性密切相關(guān)，脂肪細(xì)胞體積增大，胰島素敏感性下降，APN分泌也不斷下降。此外，相關(guān)分析結(jié)果顯示，在超重人群中，SA mRNA與性別相

13、關(guān)，也證實(shí)了這一觀點(diǎn)。在觀察對(duì)象總體中SA mRNA與BMI呈負(fù)相關(guān)，這與之前一些報(bào)道正好相反，推其原因可能與研究對(duì)象不同有關(guān)。 研究證實(shí)，APN從脂肪細(xì)胞分泌后主要存在于外周血液中，女性血清中APN的濃度高于男性7，Degawa等8研究表明，肥胖女性血清APN降低歸因于腹部SA mRNA的降低，而我們前期研究結(jié)果3卻提示循環(huán)APN可能主要來(lái)源于內(nèi)臟脂肪組織。Drolet等9研究顯示，腹型肥胖女性的網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞APN分泌下降程度明顯高于SC，表明循環(huán)APN可能主要來(lái)源于內(nèi)臟脂肪細(xì)胞的分泌。Hoffstedt等10認(rèn)為，肥胖人群中SA mRNA下降在血清APN濃度降低環(huán)節(jié)中起的作用有限，而可能的

14、原因?yàn)榉逝秩巳簩?duì)APN的消耗增加或是循環(huán)APN的降解增加。另外，由于血清APN濃度還存在包括翻譯和(或)分泌水平等轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)，以及諸多因素的影響，因此，SC脂肪組織APN表達(dá)的性別差異是否為導(dǎo)致血清APN的性別差異的原因還有待于進(jìn)一步的研究。【參考文獻(xiàn)】 1 Nedvdkov J,Smitka K,Kopsk V,et al.Adiponectin,an adipocytederived proteinJ.Physiol Res,2005;54(2):13340.2 Haluzk M,Parzkov J,Haluzk MM.Adiponectin and its role in the

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