高效液相色譜儀操作方法-

1、一、開機1、開機前準備:流動相使用前必須過0.45um的濾膜(有機相的流動相必須為色譜純;水相必須用新鮮注射用水,不能使用超過3天的注射用水,以防止長菌或長藻類;把流動相放入溶劑瓶中。A瓶:為水相B瓶:為有機相。2、打開電腦,選Win 2000,進入Win 2000界面。3、雙擊CAG Boodp server圖標,放大CAG Boodp server小圖標,出現窗口,5min內打開液相各部件電源開關,等待1100廣播信息后,表示通訊成功連接,關閉CAG Boodp serve 窗口。4、雙擊online圖標,儀器自檢,進入工作站。該頁面主要由以下幾部分組成:最上方為命令欄,依次為File,R

2、un Control,Instrumen等;命令欄下方為快捷操作圖標,如多個樣品連續(xù)進行分析、單個樣品進樣分析、調用文件保存文件等;中部為工作站各部件的工作流程示意圖;依次為進樣器-輸液泵-柱溫箱-檢測器-數據處理-報告;中下部為動態(tài)監(jiān)測信號;右下部為色譜工作參數:進樣體積、流速、分析停止時間、流動相比例、柱溫、檢測波長等。4、從“View”菜單中選擇“Method and control”畫面。二、編輯參數及方法1、開始編輯完整方法:從“Method”菜單中選擇“New method”,出現DEF-LC.M,從“Method”菜單中選擇“Edit entire method”,選擇方法信息、

3、儀器參數及收集參數、數據分析參數和運行時間表等各項,單擊OK,進入下一畫面。2、方法信息:在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。單擊OK,進入下一畫面。3、泵參數設定:進入“Setup pump”畫面,在“Flow”處輸入流量,如1ml/min;在“Solvent B”處輸入有機相的比例如70.0,(A=100-B,也可在Insert 一行“Timetable”,編輯梯度;輸入保留時間;在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓,以保護柱子。單擊OK,進入下一畫面。4、DAD檢測器參數設定:進入“DAD signals”畫面,輸入樣品波長

4、及其帶寬、參比波長及其帶寬(參比波長帶寬默認值為100nm;選擇Stoptime:as Pupm;在“Spectrum”中輸入采集光譜方式“store”:選All;如只進行正常檢測,則可選None;范圍Range:可選范圍為190950nm;步長Step可選2.0nm;閥值:選擇需要的燈;Peak width(Response time即響應值應盡可能接近要測的窄峰峰寬,可選“2s”或4s; Slit-:狹窄縫,光譜分辨率高;寬時,噪音低?？蛇x4nm單擊OK,進入下一畫面。5、進入“Signal Details”畫面,單擊OK,進入下一畫面。6、進入“Edit Integration Even

5、ts”(編輯積分結果畫面,單擊OK,進入下一畫面。7、進入“Specify report”(積分參數畫面,單擊OK,進入下一畫面。8、進入“Instrument curves”畫面,單擊OK,進入下一畫面。9、進入“Run Time checklist”(運行時間表畫面,選擇“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”,單擊OK,完成參數設定,回到工作站畫面。10、單擊“Method”菜單,選中“Save method as”,輸入文件名,單擊OK。(路徑: eHPCHEM1methods*注:如果調用一個方法,則在“Method”菜單,選中“Load

6、 method”,選方法名,單擊OK。11、從菜單“View”中選擇“Online signal”,選中Window 1 ,然后單擊Change鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中,點OK。(如同時檢測二個信號,則重復11,選中Window 2。三、運行樣品1、單擊泵(Pump圖標下面的小瓶圖標,輸入溶劑的實際體積和瓶體積,并且選停泵體積。單擊OK。2、手動打開Purge閥:逆時針轉23圈。3、單擊泵(Pump圖標,出現參數設定菜單,單擊Setup pump選項,進入泵編輯畫面。設Flow:5ml/min,單擊OK。4、開泵:直接點Pump圖標下面的泵開關小圖標,或單擊Pump圖標,出現參數設定

7、菜單,單擊Pump contrlo選項,選中On,單擊OK。5、系統開始排液(Purge,直到管線內(由溶劑瓶到泵入口無氣泡為止,切換通道繼續(xù)排液,直到所有通道無氣泡為止。(每個管線內液體約20ml,在5ml/min的流速下,均需45min才能排完6、單擊泵(Pump圖標,出現參數設定菜單,單擊Setup pump選項,進入泵編輯畫面。把Flow改為0.51.0ml/min,單擊OK。7、等待流速降下來后,關閉排液閥。8、待壓力穩(wěn)定后,從“Instrument”菜單中選擇“System on”或單擊GUI圖標的On圖標啟動系統。開始走基線,并可選擇觀察信號。注:儀器運行過程,畫面顏色由灰色轉變

8、成黃色或綠色,當各部件都達到所設參數時,畫面均變?yōu)榫G色,左上角紅色的“not ready”變?yōu)榫G色“ready”,表明可以進行分析。(此時如果要終止儀器的運行,可單擊流程圖右下角的“off”,再單擊“Yes”,關閉輸液泵和檢測器氘燈。9、單擊最大化按鈕,將online Plot窗口放大。待基線平穩(wěn)后,點信號窗口的“Banlance”,調至零點。10、等儀器Ready ,從“Runcontrol”菜單中選擇F5或“Run method”。11、編輯樣品信息:從“Run control”菜單中選擇“Sample into”選項,選擇“Sample Info.”,即打開了樣品信息頁面,輸入操作者(O

9、perator Name、數據存貯通道(Subdirectory、樣品名(Sample Name、進樣瓶號(Vial、濃縮因子(Multipline、稀釋因子(Dilution、,“Data file”中選擇“Prefix”,在Prefix框中輸入批號或日期等,在Counter框中輸入計算器的起始位,儀器會自動命名。(樣品量(Sample Amount、內標量(ISID Amount可不選,Location只對自動進樣器有用,不填則走空白,檢查干擾峰的來源。單擊OK。12、進樣分析:進樣閥扳到Load位置,插入注射器,注樣品,進樣后扳動閥至Inject位置。13、進樣分析結束,點Close鍵退

10、出樣品分析。(注意:檢測完盡量要關DAD的燈,以保持燈的壽命。單擊DAD圖標,出現參數設定菜單,單擊control ,選擇關燈。四、數據分析方法編輯(可在offline下操作1、從“View”菜單中選“Date analysis”進入數據分析畫面。該頁面最上方為命令欄,依次為File ,Graphics,Integration等。命令欄下為快捷操作圖標,如積分、校正、色譜圖、單一色譜圖調用、多色譜圖調用、調用方法、保存等。2、從“File”菜單中選“Load signal”,或單擊快捷操作的“單一色譜圖調用”圖標,選擇色譜圖文件名,單擊“OK”,畫面中即出現所調用的色譜圖。3、做圖譜優(yōu)化,從“

11、Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項。從Ranges中選擇Auao scale及合適的顯示時間,單擊OK,或選擇“Use Ranges”調整。反復進行,直到圖的比例合適為止。4、積分(1先調用所要分析的色譜圖,從“Integration”中選擇“Auto integrate”,從“Integration”中選擇“Integration Results”,此時儀器將內置的積分參數給出積分結果。如積分結果不理想,再從“Integration”菜單中選擇“Integration Events”選項,或單擊快捷操作的“編輯/設定積分表”圖標,此時,在屏幕下方左側出現積分參數

12、表,右側為積分結果,在積分參數表中按實際的要求輸入修改的參數,如斜率(Slope sensitivity、峰寬(Peak width、最小峰面積(Area reject、最低峰高(Height reject等。(2從“Integration”中選擇“Integrate”選項或單擊快捷操作的“對現有色譜圖積分”圖標,儀器即按照新設定的積分參數重新積分。(3若積分結果不理想,則修改相應的積分參數,直到滿意為止。(4完成后,單擊左邊的“”圖標,將積分參數存入方法。5、打印報告:(1從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項,或單擊最右側快捷操作的“定義報告及打印格式”(右下角帶

13、叉的報告畫面圖標,進入打印畫面。(2根據實際要求選擇報告的格式和輸出形式等。可在“Calculate”右則的黑三角中選“Percent”(面積百分比,其它項不變。(如“Destination”項下選擇“Screen”;“Based On”選“Area”;“Sorted By”選“Signal”;“Repirt Style”選“Short”;選擇“Add chromatogram Output(打印色譜圖”;選擇“With Calibrated Peaks”;選擇“Portrait”;可根據需要選擇“Size”。(3單擊OK。(4選擇快捷操作的“報告預覽”圖標,可預覽報告的全貌。從“Report

14、”菜單中,選擇“Print Report”,則報告打印到屏幕上,如想輸出到打字機上,則單擊“Print”,即可進行報告的打印。最后,單擊“close”退出此操作頁面。6、定量分析如果需要進行標準曲線制備,可按此項進行操作。(1一級校正表的建立:在“Data Analysis”界面下,調用最低濃度的色譜圖,在“欄“Calibration”下,選擇“New Calibration Table”,選擇“Automatic Setup Level”,并設校正級數為“1”,單擊“OK”。在畫下方左側出現校正表,右側為校正圖。在畫面左下側的校正表中選擇所要的色譜峰,輸入校正級數、化學物名稱及濃度,如果采用

15、內標法,需對內標峰進行標記。單擊OK,工作站提示是否刪除0濃度行,單擊Yes 。(2二級校正表的建立:調用第二個色譜圖,在命令欄“Calibration”下,選擇“Add Level”,設為“2”,單擊“OK”,在畫面左下側的校正表中輸入校正級數、化學物名稱及樣品濃度。(如需對校正表中的某些數據進行重新修正,可調用新的圖譜,在命令欄“Calibration”下,選擇“Recalibration”,并在校正表中輸入校正級數,樣品濃度。此時,校正表右側自動繪制各組分的標準曲線,并進行線性回歸。單擊校正表中的“Print”,可進行打印。五、關機1、關機前,用過緩沖鹽溶液必須先用100%的水沖洗系統(打開排液閥,調流速為5ml/min,沖洗約5 min,然后調流速為1ml/min,待流速降下來后,關閉排液閥,再沖洗沖洗約20 min;然后用甲醇同法清洗20min,然后關泵。注意:此方法適用于反相色譜柱,而正相色譜柱應用