口蹄疫合成肽疫苗研究進(jìn)展.docx

1、中圖總學(xué)逐掘2009,25(13):18-22ChineseAgriculturalScienceBulletin口蹄疫合成肽疫苗研究進(jìn)展馬麗娜，劉永生，陳豪泰，張杰(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家裕疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室，農(nóng)業(yè)部畜禽病毒學(xué)重點開放實驗室,農(nóng)業(yè)部草食動物疫病重點開放實驗室，蘭州730046)摘要：疫苗接種是預(yù)防口蹄疫的有效手段，隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科的迅猛發(fā)展，口蹄疫新型疫苗的研究取得了較快發(fā)展。此文就口蹄疫合成肽疫苗的發(fā)展過程和研究進(jìn)展做一闡述。關(guān)鍵詞：口蹄疫;合成肽疫苗分類號:S852.4+3分類號:S852.4+3文獻(xiàn)標(biāo)識碼:ADevelopmentofSyn

2、theticalPeptideVaccineofFootandMouthDiseaseMaLina,LiuYongsheng,ChenHaotai,ZhangJie(KeyLaboratoryofGrazingAnimalDiseasesofMinistryofAgriculture,KeyLaboratoryofAnimalVirologyofMinistryofAgriculture,StateKeyLaboratoryof'VeterinaryEtiologicalBiology,LanzhouVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyo

3、fAgriculturalSciences,Lanzhou730046)Abstract：TheresearchanddevelopmentofsyntheticpeptidevaccineofFMDwasreviewedinthispaper.Vaccinationisaneffectivemeasureofpreventionforfootandmouthdisease(FMD).Withdevelopmentofmolecularbiologyandimmunology,newtypevaccinesofFMDwouldbedeveloped.基金項目：蘭州市科技計劃項目“口蹄疫免疫生物

4、傳感器檢測方法建立"(07-242),病毒學(xué)國家重點實驗室開放研究基金“免疫PCR在O型口蹄疫病毒檢測方面的應(yīng)用”(2009012)。第一作者簡介：馬麗娜，女，1978年出生，河北唐山人，研實員,研究生，碩士，主要從事病毒學(xué)和免疫學(xué)相關(guān)研究。通信地址:730046甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)鹽場堡徐家坪】號中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究Email：fhnln。通訊作者:張杰，女，1971年出生，遼寧省新民市人，副研究員，研究生，博士，主要從事病毒性疾病的致病機(jī)理、快速診斷和相關(guān)基因疫苗研究工作,在中文核心刊物或國際刊物發(fā)表論文近30篇，申請專利8項。通信地址：73004

5、6,甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)鹽場堡徐家坪1號中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所,TelE-mail：scarlettezhang。收稿日期:2009-05-04,修回日期:2009-05-07oKeywords:syntheticalpeptidevaccine,FMD0引言口蹄疫是由口蹄疫病毒(footandmouthdiseasevirus,FMDV)引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，以宿主范圍廣、傳染性強(qiáng)、傳播迅速著稱，因嚴(yán)重危害發(fā)病動物的生產(chǎn)性能和畜產(chǎn)品質(zhì)量在造成巨大經(jīng)濟(jì)損失的同時極大地沖擊爆發(fā)國家的國際貿(mào)易，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類疾病?？?/p>

6、蹄疫病毒共分為A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3七個血清型,各血清型間缺乏交叉保護(hù)性，不同血清型的亞型和分離株間抗原變異很大。目前，對于口蹄疫的防治以免疫接種為主，常用曰蹄疫疫苗主要有弱毒疫苗、滅活疫苗和新型疫苗3種,不同種類疫苗在不同國家和地區(qū)以及口蹄疫流行不同階段的防治中發(fā)揮了不同的作用。基于良好的免疫保護(hù)性，口蹄疫滅活疫苗和弱毒疫苗在以往口蹄疫防治中發(fā)揮了巨大作用,但是由于滅活不徹底及弱毒苗毒力返強(qiáng)可能導(dǎo)致的病毒外散帶來的安全隱患，研究者一直在尋找一種更為安全有效的口蹄疫疫苗。隨著“表位生物學(xué)”概念的提出，許多蛋白類抗原的表位相繼得到鑒定，口蹄疫病毒抗原位點定位的研究日

7、益明朗,但由于病原微生物的多樣性和變異性，制作全價通用疫苗愈來愈困難，使多肽疫苗開始受到人們廣泛的重視，并呈現(xiàn)出巨大的發(fā)展空間。1合成肽疫苗概述合成肽疫苗(syntheticalpeptidevaccine)是依據(jù)天然蛋白質(zhì)氨基酸序列一級結(jié)構(gòu)用化學(xué)方法人工合成包含抗原決定簇的小肽(約20T0個氨基酸)，通常包含一個或多個B細(xì)胞抗原表位和T細(xì)胞抗原表位。該疫苗是一種完全基于病原體抗原表位或者決定簇氨基酸序列特點開發(fā)設(shè)計的一類疫苗，不存在毒力回升或滅活不全的問題。特別是對于還不能通過體外培養(yǎng)方式獲得足夠量抗原的微生物病原體或雖能進(jìn)行體外培養(yǎng),但有潛在致病性和免疫病理作用等涉及安全性與有效性問題的病

8、原體意義重大。合成肽疫苗的研究最早始于FMDV合成肽疫苗,主要集中在FMDV的單獨B細(xì)胞抗原表位或與T細(xì)胞抗原表位結(jié)合而制備的合成肽疫苗研究。1.1表位肽選擇與合成1.1.1抗原表位的選擇是肽疫苗研制的第一步目前,對于抗原位點的研究方法主要有計算機(jī)軟件預(yù)測法、SDS-PAGE結(jié)合Westernblot技術(shù)分析法、化學(xué)或生物學(xué)方法(包括酶切割法和水解抗原抗體復(fù)合物法)、肽探針掃描法、噬菌體表面展示技術(shù)、抗性突變體篩選法、縮氨酸掃描技術(shù)以及X射線衍射法和核磁共振法等。型內(nèi)、型間特異性或保守性抗原位點序列單獨或不同組合應(yīng)用可以獲得針對病原體特異或各型特異的疫苗。不同病原體關(guān)鍵位點的聯(lián)合應(yīng)用還可獲得聯(lián)

9、苗的保護(hù)效果，降低因多次免疫可能給動物機(jī)體帶來的損害。一般來說，要依研究目的、興趣設(shè)計多肽片段，特別是在沒有抗原位點精確結(jié)構(gòu)信息(多數(shù)情況如此)的情況下更要根據(jù)研究用途或應(yīng)用來選擇設(shè)計策略。就疫苗研究來說,理想的表位應(yīng)該是在病原體各型間或同一血清型內(nèi)各分離株中高度保守的序列,特別是那些位于病原體表面、具有可及性的、中和性的、序列長度在820個氨基酸殘基的抗原位點。如果肽段太短，則可能增加與其它病原的交叉反應(yīng),所產(chǎn)生的抗體與天然蛋白間的親和力或者結(jié)合力弱;如果序列太長，則可能引入二級結(jié)構(gòu)，失去抗體的特異性，而且肽鏈越長，通常合成難度越大，產(chǎn)品提純也越困難。1.1.2多肽合成技術(shù)抗原多肽的合成目前

10、主要包括片段濃縮法和固相合成法兩種。前者先合成一定數(shù)量小肽，經(jīng)純化和去保護(hù)后結(jié)合成較長的肽，以此類推直到所需長度序列。后者是把目標(biāo)肽鏈的第一個氨基酸碳端段基共價結(jié)合在固相載體上(固相載體是一種不溶性的高分子樹脂)。脫去氨基保護(hù)基團(tuán)后，再加入氨基和熊基都結(jié)合了保護(hù)基團(tuán)的另一個氨基酸，令這個氨基酸的梭基脫去保護(hù)基團(tuán)，與結(jié)合在固相上的氨基氮端氨基形成肽鍵。如此多次重復(fù)，直至到所需長度的肽鏈;最后把肽鏈從樹脂上裂解下來,經(jīng)過純化處理即得所要多肽。自1963年Merrifield成功發(fā)展固相多肽合成(SPPS)技術(shù)以來，經(jīng)過不斷改進(jìn)和完善，該技術(shù)己成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的常用技術(shù)，特別是在選擇和確定有效

11、抗原表位研究方面，是合成肽疫苗的一條可供選擇的途徑。1.2肽疫苗種類依據(jù)合成肽疫苗中抗原肽的拷貝數(shù)、載體種類、佐劑等被分為幾類,主要包括以下幾種。1.2.1抗原肽-載體復(fù)合物除早期直接用作抗原免疫接種的較大的多肽(分子量5000kD以上)外,抗原肽.載體復(fù)合物是肽疫苗中應(yīng)用最早、最多的一類，主要以抗原肽蛋白載體連接物形式呈現(xiàn)。用于與抗原肽交聯(lián)的蛋白載體既有異體蛋白也有動物自體蛋白，有時還包括一些細(xì)胞因子類物質(zhì)，以鑰孔蚯血藍(lán)蛋白(keyholelimpethemacyanin,KLH),牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA),卵清蛋白(ovalbumin,OVA)，牛甲狀腺

12、球蛋白(bovinethyroglobulin,THY),破傷風(fēng)類毒素(TT)等較為常用。KLH因為有更強(qiáng)的抗原性，應(yīng)用最廣泛。BSA因經(jīng)常被用做檢測試驗的阻斷劑而使其應(yīng)用受到一定限制。1.2.2多抗原肽抗原基于抗原肽-載體復(fù)合物中的載體蛋白多為異體蛋白，同一載體連接的幾個肽疫苗同時或相繼使用時，高比率的載體蛋白可能引起接種機(jī)體的炎癥或過敏反應(yīng)，成為影響抗原肽特異性的原因。研究者利用增加抗原肽重復(fù)次數(shù)以增加抗原分子量的方法制備無載體蛋白合成多肽抗原，包括多聚抗原肽抗原、串聯(lián)抗原肽抗原、含二硫鍵的鏈環(huán)和環(huán)狀二聚體抗原肽抗原、樹狀多肽抗原肽抗原、含串聯(lián)抗原肽的樹狀多抗原肽抗原等,其中多聚抗原肽抗原

13、是研究最早的一類無載體蛋白合成肽疫苗用抗原，它主要將抗原肽利用縮合劑縮合成多聚物而成,其抗原性和免疫原性明顯增加。串聯(lián)抗原肽抗原是通過把相同或不同的肽段串聯(lián)起來以增大抗原分子的分子量，可以通過逐步接長合成法得到。為增加抗原肽的分子量和免疫性，還可在抗原肽的端基加上半胱氨酸,經(jīng)氧化后形成二硫鍵從而得到鏈狀或環(huán)狀抗原肽，該類抗原效果較好，如采用環(huán)狀二聚體抗原的瘧疾疫苗SPf(66)n。樹狀多抗原肽抗原(DendriticMultipleAntigenicPeptides,MAP)是利用賴氨酸(Lys)含有的兩個氨基為碳端，合成以Lys為核心含有兩個抗原肽的抗原，連接n次Lys時，即可合成出以Lys

14、為核心含有2n個抗原肽的抗原。這種設(shè)計使疫苗的一個分子中包含多種特異性表位，較單體肽具有明顯優(yōu)越性，可誘導(dǎo)更好的保護(hù)力。含串聯(lián)抗原肽的樹狀多抗原肽抗原兼?zhèn)渖鲜鰞深惪乖瓋?yōu)點，以Lys為核心，以串聯(lián)抗原肽代替上述單一抗原肽來實現(xiàn)，獲得了較好的免疫力。2口蹄疫合成肽疫苗研究概況口蹄疫病毒主要包括4個結(jié)構(gòu)蛋白，即VP1、VP2、VP3.VP4,其中前3個暴露于病毒粒子表面，后者位于病毒內(nèi)部。現(xiàn)有研究表明，具有良好免疫原性的抗原位點主要集中于VP1上，其中VP1141-160氨基酸序列已證明可在多種動物誘導(dǎo)保護(hù)性中和抗體。1985年，F(xiàn)rancis用FMDVO1VP1141-160區(qū)域合成肽的KLH連接

15、物，以小免疫劑量初次免疫豚鼠時,激發(fā)了豚鼠免疫系統(tǒng)對同一肽段再次小免疫劑量的特異性血清中和抗體反應(yīng)，且再次反應(yīng)不受載體限制。此外，當(dāng)14M60肽與無免疫原性載體(例如smallunilamellarliposomes)連接時也可誘發(fā)中和抗體反應(yīng)，進(jìn)而揭示FMDV14M60肽段包含一個重要的中和抗體位點，可以激發(fā)自身T細(xì)胞輔助反應(yīng)。隨后，1987年,Francis131等進(jìn)一步報道了FMDVVP1141-160區(qū)域未連接肽激發(fā)豚鼠病毒中和性抗體產(chǎn)生需要初次接種時加入福氏不完全佐劑、肽C端存在未封閉蔬基基團(tuán)的半胱氨酸殘基，而二次接種可以只接種肽不加佐劑。此外，146156氨基酸序列對于誘導(dǎo)病毒中和

16、抗體極為重要，拓展序列137460區(qū)段可進(jìn)一步促進(jìn)該反應(yīng)。由于人們認(rèn)為B細(xì)胞表位可以被可誘發(fā)保護(hù)性病毒特異性免疫反應(yīng)的線性短肽所模擬，如GH環(huán)(抗原位點A)和C末端區(qū)域(抗原位點C),因而,Dimarch將FMDVOIKVP1的14M58和200-213區(qū)域以線性結(jié)構(gòu)連接，肽段間以Pro-Pro-Ser為間隔用于誘導(dǎo)一個折疊結(jié)構(gòu)(即所謂的“DiMarchi”肽)，可以激發(fā)豚鼠或者自然宿主(豬和牛)具有顯著抗FMDV中和性抗體和保護(hù)性，同時提出VP1碳端氨基酸對提高動物保護(hù)性的重要意義"。1991年,Francis171報道以多抗原肽系統(tǒng)向免疫系統(tǒng)提呈FMDVVP1140-160位點的

17、二聚體、四聚體和八聚體結(jié)構(gòu)比串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)更能激發(fā)免疫反應(yīng)。以賴氨酸連接的肽二聚體比單肽具有更好的免疫原性，四聚體比二聚體強(qiáng)510倍。在激發(fā)病毒中和抗體方面，四聚體多抗原肽體系與八聚體多抗原肽體系具有相當(dāng)甚至更強(qiáng)的能力。另外,多抗原肽體系連接肽與氫氧化鋁佐劑共同接種兩次后可以顯著激發(fā)中和抗體的特點，表現(xiàn)出與肽載體連接物相似的特點。1995年,ZamoranoP等用FMDVO1CamposVP1135-160位(pl35.160)合成肽和覆蓋該區(qū)域的重疊10mer合成肽研究對小鼠的免疫反應(yīng)及保護(hù)性時發(fā)現(xiàn)，無論是否與載體蛋白BSA連接,pl35.160均具有強(qiáng)免疫原性,可誘發(fā)小鼠長時間的中和抗體反應(yīng)

18、，并對病毒攻擊提供堅強(qiáng)的保護(hù)，而10mer短肽只有與BSA連接后方可產(chǎn)生肽特異性抗體。值得注意的是135-144區(qū)域短肽(pl35444)以串聯(lián)二聚體或三聚體形式存在是，不需與載體連接即可引起小鼠強(qiáng)烈的中和抗體反應(yīng)及堅實的抗病毒攻擊保護(hù)性。免疫親和層析試驗(immunoaffinitychromatography)證明P135-160區(qū)域至少存在4個不連續(xù)的中和性位點，分別位于pl35144、pl40-149、pl45-154、pl50J60。同時，抗原依賴性增殖試驗(antigen-dependentproliferationassays)和過繼性細(xì)胞轉(zhuǎn)移試驗(adoptivecelltra

19、nsferassay)也證明了兩個T細(xì)胞表位的存在，分別位于pl35-144和pl50-160區(qū)域。Zamorano的研究證明并發(fā)展了Francis在1987年的報道。1997年iZamoranol9J等在先前研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步探究了FMDV01CamposVP1135444位串聯(lián)二聚體合成肽(pl35-144x2)對牛體的免疫原性，在有效誘發(fā)牛強(qiáng)烈中和抗體反應(yīng)同時,所產(chǎn)生的針對B和T細(xì)胞表位的反應(yīng)既是VP1135-144序列高度特異性的，又可在免疫牛體內(nèi)長期持續(xù)存在(至少310天)。至此，Zamorano先后證明pl35-144x2可被3種動物小鼠、牛和豚鼠強(qiáng)烈識別，并產(chǎn)生T細(xì)胞特異性、保護(hù)性

20、中和抗體反應(yīng)。由于有研究顯示與FMDV免疫決定簇表位相對應(yīng)的retro-inverso肽可以模擬天然形態(tài)L型肽的結(jié)構(gòu)和抗原活動。1996年,Benkirane,0)等針對FMDVVP1141-159環(huán)區(qū)域合成了一系列L-型和retro-inverso肽，并將其與含有單磷酰脂A(monophosphoiyllipidA)的小單層脂質(zhì)體(smallunilamellarliposomes)佐劑共價結(jié)合接種家兔制備抗體。在免疫接種早期retro-inverso肽比L-型肽誘導(dǎo)更高水平和更持久的血清抗體滴度，且與豚鼠抗VP1蛋白血清和病毒粒子的抗血清發(fā)生強(qiáng)烈交叉反應(yīng)。該研究既證明retro-inver

21、sopeptidomimetics比天然L型肽更加穩(wěn)定，也間接顯示retro-inversopeptidomimetics有望發(fā)展成合成肽疫苗的潛力。合成肽作為免疫原存在的一個普遍問題是主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的限制性,FMDV是典型的細(xì)胞依賴性體液免疫為主，單純B細(xì)胞位點肽誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性有限，因而T細(xì)胞表位的引入對提高肽段的免疫性意義重大。但T細(xì)胞表位的識別受MHC限制，非選擇性Th表位或病毒蛋白不同部分的特異性Th表位的引入可極大解決這個問題。Brown等利用大腸桿菌表達(dá)的FMDVVP1140-160及200-213位肽段基因片段在免疫牛、豬等都獲得了較好的免疫力。1988年Br

22、own"研究發(fā)現(xiàn)FMDVVP1±可以誘導(dǎo)豚鼠、牛和豬保護(hù)性中和抗體產(chǎn)生的免疫原性位點肽以二聚體或四聚體形式應(yīng)用時可以誘導(dǎo)更強(qiáng)的中和抗體反應(yīng)，當(dāng)這些肽作為乙型肝炎病毒核心蛋白的一部分提供給動物時可以進(jìn)一步提高保護(hù)性中和抗體產(chǎn)生能力。此外，接種適當(dāng)連接到FMDV肽段上的T細(xì)胞位點可以激發(fā)小鼠體內(nèi)的肽應(yīng)答。1990年，Doel1121將分別用A、O、C血清型FMDVVP1序列的141-158和200213肽段組成的40個氨基酸合成肽，在牛和豚鼠進(jìn)行試驗,每個肽都產(chǎn)生高滴度的特異性抗病毒中和抗體,O、A型肽可完全保護(hù)豚鼠抵抗各同源病毒的攻擊,C型較差。2002年,WangJ以VP1

23、GH環(huán)及大量側(cè)翼序列為椎架(129-169),將共有殘基整合進(jìn)入VP1高變區(qū)位點，并引入外源Th位點設(shè)計的合成肽疫苗，以12.5昭劑量免疫豬，以01Taiwan株FMDV攻擊時獲得20/21保護(hù)率。該設(shè)計拓寬了肽疫苗在多個物種的免疫原性，通過引入循環(huán)約束和毗鄰序列(cyclicconstraintandadjoiningsequences)肽優(yōu)化了對不同毒株的交又反應(yīng)性。2007年，Wang(,4等研究發(fā)現(xiàn)Asia1型FMDVYNBS/58分離株VP1133-163和VP21-33上存在抗原表位，二者均可誘導(dǎo)豚鼠淋巴細(xì)胞增殖，但僅有VP1上片段可誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生，但VP2肽段可顯著提高VP1肽

24、誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生能力。2005年，Beignonn5J以霍亂毒素為佐劑，將FMDVVP1GH環(huán)141-159區(qū)域合成肽BSA連接物皮下接種小鼠，激發(fā)產(chǎn)生具有強(qiáng)烈病毒中和活性的抗肽抗體反應(yīng)。聯(lián)合應(yīng)用霍亂毒素與免疫刺激性CpG基序，可誘導(dǎo)具有顯著增強(qiáng)病毒中和活性的IgGl和IgG2a型抗肽抗體的產(chǎn)生。2007年，S3切等以結(jié)核分支桿菌熱休克蛋白70(HSP70)為佐劑和載體融合表達(dá)了來自O(shè)型FMDVTibet/CHA99株的五個B細(xì)胞位點(VP1141-160和200-213,VP141-6O,VP1135-167,VP270-77,131-134,VP355-59)和兩個T細(xì)胞位點(VP121.

25、40和14K160)的多表位合成基因，在小鼠誘導(dǎo)了比VP1融合表達(dá)物更為顯著的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，并促進(jìn)了IL.4和IFNr的分泌。2007年,ZhangH71報道，與GST融合表達(dá)相比，以缺失c/cl區(qū)域75-82aa的乙肝病毒核心為載體表達(dá)的口蹄疫VP1(141-160)-VP4(21-4O)-VP1(141-160)具有更高的肽特異性和病毒特異性抗體滴度。從而也間接印證了1988年,Brown的報道。2007年，Gemer1181利用來自實驗感染FMDV牛的淋巳細(xì)胞增殖實驗篩查了覆蓋FMDV結(jié)構(gòu)蛋白的442個重疊15肽，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)蛋白VP166-80位氨基酸殘基區(qū)域為一免疫優(yōu)勢表位，M

26、HC血清型為A31。2008年Du"'】等以腺病毒為載體將FMDVVP121.60、141-160.200-213三段氨基酸殘基序列與豬IFN.a融合表達(dá),該表達(dá)物誘發(fā)的小鼠FMDV特異性的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)顯著高于三段殘基序列與干擾素混合物組，所有接種豚鼠和豬均可完全抵抗病毒攻擊,獲得保護(hù)性。2008年,Cubillos合成了含有1個FMDVT細(xì)胞抗原決定簇和具有4個分支的B細(xì)胞抗原決定簇的樹形肽，把這種樹形肽注射到豬的肌肉后，四頭免疫豬未出現(xiàn)病毒攻擊后的顯著臨床癥狀，系統(tǒng)和粘膜無FMDV復(fù)制。成功使豬獲得對FMDV攻擊的保護(hù)。腸胃外給肽時，局部和全身均觀察到有效的抗FMD

27、VIgA型反應(yīng)。2008年，Greenwood刖以惰性納米磁珠為載體與不同T、B細(xì)胞位點序列肽FMDVO1K上VP1126.150、141165、189-213單獨或混合物連接時發(fā)現(xiàn)，雖然單序列肽納米磁珠可以誘導(dǎo)多數(shù)實驗羊產(chǎn)生抗FMDV特異性合成肽反應(yīng)，但多個肽序列不管是單獨或混合物的納米磁珠連接物均可誘導(dǎo)顯著的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。3展望合成肽疫苗的研究最早始于FMDV合成肽疫苗，隨著肽合成技術(shù)的日益成熟和普及，加之口蹄疫病毒抗原表位的明朗，使得口蹄疫多肽疫苗越來越受到人們的重視，并呈現(xiàn)迅猛的發(fā)展態(tài)勢。許多研究者在FMDV合成肽疫苗領(lǐng)域進(jìn)行了有益探索，但這些研究大多局限于結(jié)構(gòu)蛋白尤其是VP1上

28、抗原位點,特別是140-160和200213殘基附近。不同研究中所選抗原區(qū)域不同，鮮有共識性和可激發(fā)中和性抗體產(chǎn)生且能抵抗FMDV攻擊的核心位點和肽段的報道。與經(jīng)典程序疫苗相比，肽基礎(chǔ)的合成疫苗在穩(wěn)定性、易獲取性、安全、純化及成本方面具有明顯優(yōu)勢，但也存在著免疫原性弱、半衰期短等缺點。這與構(gòu)成抗原位點的氨基酸序列有關(guān),導(dǎo)致合成肽疫苗中所選用肽段多為小肽,且現(xiàn)有合成技術(shù)只能合成直鏈肽段，其三維空間結(jié)構(gòu)與完整分子不盡相同密切相。為了提高FMDV小肽免疫原性，研究者采用了以下方法:設(shè)計線性肽的串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu);與載體蛋白連接(如BSA,KLH)；將小肽插入諸如多抗原肽系統(tǒng)(MAP)支架結(jié)構(gòu); 插入病毒載

29、體(如乙肝病毒核心蛋白HBc)、熱休克蛋白、細(xì)胞因子、佐劑、免疫增強(qiáng)序列，構(gòu)建重組蛋白。合成肽疫苗在口蹄疫的防治中具有巨大的優(yōu)勢和潛力，盡管目前仍存在諸多不足,但隨著肽合成技術(shù)的發(fā)展,核心抗原肽的進(jìn)一步鑒定,MHC限制作用的消除以及增強(qiáng)肽免疫性技術(shù)的革新，口蹄疫合成肽疫苗必將在未來口蹄疫的防治乃至根除中展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)1 LopezMC,SilvaY,ThomasMC,etal.CharacterizationofthechimericSPf(66)nmoleculeusedasavaccineagainstmalariaJ.Vaccine,1994,12:585-591Fran

30、cisMJ,FryCM,RowlandsDJ,etal.ImmunologicalPrimingwithSyntheticPeptidesofFoot-and-MouthDiseasevirusJ.J.Gen.Virol,1985,66:2347-2354.2 FrancisMJ,FryCM,RowlandsDJ,etal.Immuneresponsetouncoupledpeptidesoffoot-and-mouthdiseasevirusJ.Immunology,1987,61(1):1-6.3 DiMarchiR,BrookeG,GaleC,eta】.Protectionofcattl

31、eagainstfootandmouthdiseasebyasyntheticpeptideJ.Science,1986,232:639-641.4 DoelTR,GaleC,BrookeG,etal.Immunizationagainstfoot-and-mouthdiseasewithsyntheticpeptidesrepresentingtheC-terminalregionofVP1J.J.Gen.Virol,1988,69:2403-2406.5 StewardMW,StanleyCM,DiMarchiR,etal.High-affinityantibodyinducedbyimm

32、unizationwithasyntheticpeptideisassociatedwithprotectionofcattleagainstfoot-and-mouthdiseaseJ.Immunology,1991,72:99-103.6 FrancisMJ,HastingsGZ,BrownF,etal.Immunologicalevaluationofthemultipleantigenpeptide(MAP)systemusingthemajorimmunogenicsiteoffoot-and-mouthdiseasevirusJ.Immunology,1991,73:249-254

33、,ZamoranoP9WigdorovitzA,Perez-filgueiraM,etal.A10-amino-acidlinearsequenceofVP1offootandmouthdiseaseviruscontainingB-andcellepitopesinducesprotectioninmiceJ.Virology,l995,212:614-621.7 ZamoranoPI,WigdorovitzA,PerezFilgueiraDM,etal.InductionofantifootandmouthdiseasevirusTandBcellresponsesincattleimmu

34、nizedwithapqjtiderepresentingtenaminoacidsofVP1J.VaccineJ997,16(6):558-563.8 BenkiraneN,GuichardG,BriandJRetal.Mimiciyofviralepitopeswithretro-inversopeptidesofincreasedstabilityJ.DevBiolStand,J996,87:283-291.9 BrownF.Useofpeptidesforimmunizationagainstfoot-and-mouthdiseaseJ.Vaccine,1988,6(2):180-18

35、2.10 DoeTR,GaleC,DoAmaralCMCF,etal.Heterotypicprotectioninducedbysyntheticpeptidescorrespondingtothreeserotypesoffoot-and-mouthdiseasevirusJ.JVirol,1990,64:2260-2264.11 WangCY,ChangTY,AMWalfield,etal.Effectivesyntheticpeptidevaccineforfbot-and-mouthdiseaseinswineJ.Vaccine,2002,20:2603-2610.12 Wang,JL,LiuMQ,HanJ,etal,Apeptideoffbot-and-mouthdiseasevirusserotypeAsialgeneratinganeutralizingantibodyresponse,andanimmunostimulatorypeptideJ.Vet.Microbiot2007,125(3-4):224-231.13 BeignonAS,BrownF,EftekhariEetal.Apeptidevaccineadministeredtransc