溶液配制方法p

1、實驗室常用試劑、緩沖液的配制方法1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度：1 M Tris-HCl，配制量：1 L配制方法：1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N）濃鹽酸的體積（ml）pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注

2、意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個單位。TrisHCl沖液（0.05M，25）50毫升0.1M三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶液與X毫升0.1N鹽酸混勻后，加水稀釋至100毫升。pHX(毫升)pHX(毫升)7.107.207.307.407.507.607.707.807.908.0045.744.743.442.040.338.536.634.532.029.28.108.208.308.408.508.608.708.808.9026.222.919.917.214.712.410.38.57.0三

3、羥甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2-CH2OH-CHOCH2-NH2分子量=121.14;0.1M溶液為12.114克/升。Tris溶液可從空氣中吸收二氧化碳，使用時注意將瓶蓋嚴(yán)。0.5 M EDTA(pH8.0)組份濃度：0.5 M EDTA，配制量：1 L，配制方法：1. 稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20 g NaOH)。注意：pH值至8.0時，EDTA才能完全溶解。3. 加去離子水將溶液定容至1 L，適量分成小份后，高溫高壓滅菌，室溫保存。10×TE B

4、uffer (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA，配制量：1 L3 M 醋酸鈉(pH5.2) 組份濃度：3M 醋酸鈉，配制量：100ml配制方法： 1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存。PBS Buffer (1×)組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2mM KH2PO4，配制：1 L配制方法：稱量試劑:8g

5、 NaCl, 0.2g KCl, 1.44g Na2HPO4, 0.24g KH2PO4，置于1 L燒杯中。加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。高溫高壓滅菌后，室溫保存。PB緩沖液(pH8.0)：1L NaH2PO4 0.16537g, Na2HPO4 6.7817g.注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。10 M 醋酸銨組份濃度：10 M 醋酸銨，配制量：100 ml配制方法：  1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100200 ml

6、燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?#160;2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。 4. 密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。常用緩沖液的配制方法1.甘氨酸-鹽酸緩沖液（0.05M）X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M鹽酸 再加水稀釋至200ml.pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml2.2 50 44.0 3.0 50 11.42.4 50 32.4 3.2 50 8.22.6 50 24.2 3.4 50 6.42.8 50 16.8 3.6 50 5

7、.0甘氨酸分子量75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L.2.鄰苯二甲酸-鹽酸緩沖液（0.05M）X ml 0.2M鄰苯二甲酸氫鉀 +Y ml 0.2M鹽酸 再加水稀釋至200ml.pH X Y pH X Y2.2 5 4.670 3.2 5 1.4702.4 5 3.960 3.4 5 0.9902.6 5 3.295 3.6 5 0.5972.8 5 2.642 3.8 5 0.2633.0 5 2.032 鄰苯二甲酸氫鉀分子量2.4.23 0.2M鄰苯二甲酸氫鉀溶液含40.85g/L.3.磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M檸檬酸/ml pH 0

8、.2M Na2HPO4/ml 0.1M檸檬酸/ml2.2 0.40 19.6 5.2 10.72 9.282.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.852.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.402.8 3.17 16.83 5.8 12.09 7.913.0 4.11 15.89 6.0 12.63 7.373.2 4.94 15.06 6.2 13.22 6.783.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.153.6 6.44 13.56 6.6 14.55 5.453.8 7.10 12.90 6.8 15.45 4.554.0 7.71 12.29

9、7.0 16.47 3.534.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.614.4 8.82 11.18 7.4 18.17 1.834.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.274.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.855.0 10.30 9.70 8.0 19.45 0.55Na2HPO4分子量141.98 0.2M溶液含28.40g/LNa2HPO4·2H2O分子量178.05 0.2M溶液含35.61g/LC6H8O7·H2O分子量210.14 0.1M溶液含21.01g/L4.檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液pH 鈉離子濃度/M

10、檸檬酸C6H8O7·H2O/g 氫氧化鈉NaOH/g 濃鹽酸HCl/ml 終體積/L2.2 0.20 210 84 160 103.1 0.20 210 83 116 103.3 0.20 210 83 106 104.3 0.20 210 83 45 105.3 0.35 245 144 68 105.8 0.45 285 186 105 106.5 0.38 266 156 126 10使用時可以每升中加入1g酚，若最后pH有變化，再用少量50%氫氧化鈉溶液或濃鹽酸調(diào)節(jié)，冰箱保存。5.檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（0.1M）pH0.1M檸檬酸/ml0.1M檸檬酸鈉/mlpH0.1M檸檬

11、酸/ml0.1M檸檬酸鈉/ml3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.610418.64.89.210.8C6H8O7·H2O分子量210.14 0.1M溶液含21.01g/LNa3C6H5O7·2H2O分子量294.12 0.1M溶液含29.41g/L6.乙酸-乙酸鈉緩沖液

12、（0.2M）pH 0.2M NaAc/ml 0.2M HAC/ml pH 0.2M NaAc/ml 0.2M HAC/ml3.6 0.75 9.25 4.8 5.90 4.103.8 1.20 8.80 5.0 7.00 3.004.0 1.80 8.20 5.2 7.90 2.104.2 2.65 7.35 5.4 8.60 1.404.4 3.70 6.30 5.6 9.10 0.904.6 4.90 5.10 5.8 9.40 0.60NaAc分子量136.09 0.2M溶液為27.22g/L7.磷酸鹽緩沖液(PB)磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（0.2M）pH0.2M Na2HPO4/m

13、l0.2M NaH2PO4/mlpH0.2M Na2HPO4/ml0.2M NaH2PO4/ml5.88.092.07.061.039.05.910.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.07.06.849.551.08.094.75.36.955.045.0Na2

14、HPO4·2H2O分子量178.05 0.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4·12H2O分子量358.22 0.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4·H2O分子量138.01 0.2M溶液含27.6g/LNaH2PO4·2H2O分子量156.03 0.2M溶液含31.21g/L(2) 磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液（1/15M）pH1/15M Na2HPO4/ml1/15M KH2PO4/mlpH1/15M Na2HPO4/ml1/15M KH2PO4/ml4.920.109.907.177.003.005.290.509.507.388.002

15、.005.911.009.007.739.001.006.242.008.008.049.500.506.473.007.008.349.750.256.644.006.008.679.900.106.815.005.009.1810.0006.986.004.00Na2HPO4·2H2O分子量178.05 1/15M溶液含35.61g/LKH2PO4分子量136.09 1/15M溶液含9.078g/L8.磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液（0.05M）X ml 0.2M KH2PO4 +Y ml 0.2M NaOH 再加水稀釋至20mlpH(20) X/ml Y/ml pH(20) X/m

16、l Y/ml5.8 5 0.372 7.0 5 2.9636.0 5 0.570 7.2 5 3.5006.2 5 0.860 7.4 5 3.9506.4 5 1.260 7.6 5 4.2806.6 5 1.780 7.8 5 4.5206.8 5 2.365 8.0 5 4.6809.巴比妥鈉-鹽酸緩沖液（18）pH 0.04M巴比妥鈉/ml 0.2M鹽酸/ml pH 0.04M巴比妥鈉/ml 0.2M鹽酸/ml6.8 100 18.4 8.4 100 5.217.0 100 17.8 8.6 100 3.827.2 100 16.7 8.8 100 2.527.4 100 15.3 9

17、.0 100 1.657.6 100 13.4 9.2 100 1.137.8 100 11.47 9.4 100 0.708.0 100 9.39 9.6 100 0.358.2 100 7.21 100 巴比妥鈉分子量206.18 0.04M溶液為8.25g/L11.硼酸-硼砂緩沖液（0.2M硼酸根）pH 0.05M硼砂/ml 0.2M硼酸/ml pH 0.05M硼砂/ml 0.2M硼酸/ml7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0硼砂Na2B4O

18、7·10H2O分子量381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液為19.07g/L硼酸H3BO3分子量61.84 0.2M溶液為12.37g/L硼砂易失去結(jié)晶水，必須在帶塞的瓶中保存12.甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液（0.05M）X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M氫氧化鈉 再加水稀釋至200mlpH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml8.6 50 4.0 9.6 50 22.48.8 50 6.0 9.8 50 27.29.0 50 8.8 10.0 50 32.09.2 50 12.0 10.4 50 38.69.4 50 16.8 10.6 50 45.5甘氨

19、酸分子量75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L13.硼砂-氫氧化鈉緩沖液（0.05M硼酸根）X ml 0.05M硼砂 +Y ml 0.2M氫氧化鈉 再加水稀釋至200mlpH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml9.3 50 6.0 9.8 50 34.09.4 50 11.0 10.0 50 43.09.6 50 23.0 10.1 50 46.0硼砂Na2B4O7·10H2O分子量381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液為19.07g/L14.碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液（0.1M）Ca2+，Mg2+存在時不得使用pH 20 9.16 9.40 9.51 9.

20、78 9.90 10.14 10.28 10.53 10.8337 8.77 9.12 9.40 9.50 9.72 9.90 10.08 1028 10.570.1M碳酸鈉/ml 1 2 3 4 5 6 7 8 90.1M碳酸氫鈉/ml 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Na2CO3·10H2O分子量286.2 0.1M溶液28.62g/L，NaHCO3分子量84.0 0.1M溶液8.40g/L 3M 醋酸鈉(pH5.2)組份濃度：3M 醋酸鈉，配制量：100ml配制方法： 1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢?/p>

21、溶解2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存。10 M 醋酸銨，配制量：100 ml，配制方法： 1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?#160;2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。 4. 密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色

22、，應(yīng)避免使用。同時也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160對其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實驗。2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：  液化苯酚應(yīng)貯存于-20，此時

23、的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分融解。  加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色，有助于方便識別有機(jī)相。  加入等體積的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。  重復(fù)操作步驟。  加入等體積的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。  重復(fù)操作步驟，稍微殘留部

24、分上層水相。  使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。  將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。苯酚/氯仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4保存。10% (W/V) SDS 組份濃度：10% (W/V)SDS，配制量：100ml配制方法：1.稱量10g高純度的SDS置于100-2

25、00ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68加入溶解; 2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2; 3.將溶液定容至100ml后，室溫保存。2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH，配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。Solution I(質(zhì)粒提取用試劑)組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM

26、EDTA, 50 mM Glucose，配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。2. 高溫高壓滅菌后，4保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。Solution II(質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mM NaOH，1%(W/V)SDS，配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中10% SDS 50ml, 2N NaOH 50ml;2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻，3.室溫保存，此溶液保存時間最好不要超過一個月，注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌Solution III(

27、質(zhì)粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M 乙酸，配制量：500 ml配制方法：1. 稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。4. 高溫高壓滅菌后，4保存。1 M DTT 組份濃度：1 M DTT，配制量：20 ml，配制方法：1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。3. 適量分成小份后，-20保存。IPTG (Isopropyl -D-1-Thiogalactopyranoside) 異

28、丙基-D-硫代半乳糖苷，別名Isopropyl -D-Thiogalactoside白色或白色粉末,溶于水后呈清亮無色液體 分子式：C9H18O5S 分 子 量: 238.30，2-8°C冷藏保存。10 mM ATP 組份濃度：10 mM ATP，配制量：20 ml配制方法：1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20保存。飽和硫酸銨1.不同溫度下飽和硫酸銨溶液的數(shù)據(jù)溫 度（）010202530重量百分?jǐn)?shù)41.4242.2243.0943.

29、4743.85摩爾濃度3.93.974.064.104.13每1000g水中含硫酸銨摩爾數(shù)5.355.535.735.825.911000ml水中用硫酸銨克數(shù)706.8730.5755.8766.8777.5每1000ml溶液中含硫酸銨克數(shù)514.8525.2536.5541.2545.92. 調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計算表（25）在 25 硫 酸 銨 終 濃 度 ，% 飽 和 度硫 酸 銨 初 濃 度 ， 飽 和 度10202530333540455055606570758090100每 1000ml 溶 液 加 固 體 硫 酸 銨 的 克 數(shù)05611414417619620924327731

30、335139043047251656166276710578611813715018321625128832636540644949459269420295978911231551892252623003403824245206192530496193125158193230267307348390485583301930629412716219823527331435644954633124374107142177214252292333426522353163941291642002382783194115064031639713216820524528537546945326599134

31、1712102503394315033661011371762143023925533671031411792643536034691051432273146534701071902757035721532377536115198807715790793. 調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計算表（0）在 0 硫 酸 銨 終 濃 度，% 飽 和 度硫 酸 銨 初 濃 度 ， 飽 和 度20253035404550556065707580859095100每 100ml 溶 液 加 固 體 硫 酸 銨 的 克 數(shù)010.613.416.419.422.625.829.132.636.139.843.647.6

32、51.655.960.365.069.757.910.813.716.619.722.926.229.633.136.840.544.448.452.657.061.566.2105.38.110.913.916.920.023.326.630.133.737.441.245.249.353.658.162.7152.65.48.211.114.117.220.423.727.130.634.338.142.046.050.354.759.22002.75.58.311.314.317.520.724.127.631.234.938.742.746.951.255.7250 2.75.68.4

33、11.514.617.921.124.528.031.735.539.543.647.852.23002.85.68.611.714.818.121.424.928.532.336.240.244.548.83502.85.78.711.815.118.421.825.429.132.936.941.045.34002.95.88.912.015.318.722.225.829.633.537.641.84502.95.99.012.315.619.022.626.330.234.238.35003.06.09.212.515.919.423.026.830.834.85503.06.19.3

34、12.716.119.723.527.331.36003.16.29.512.916.420.123.127.96503.16.39.713.216.820.524.47003.26.59.913.417.120.97503/26.610.113.717.48003.36.710.313.98503.46.810.59003.47.09503.51000注：當(dāng)量濃度(N)：溶液的濃度用1升溶液中所含溶質(zhì)的克當(dāng)量數(shù)來表示的叫當(dāng)量濃度，用符號N表示。例如，1升濃鹽酸中含12.0克當(dāng)量的鹽酸(HCl)，則濃度為12.0N。 當(dāng)量濃度=溶質(zhì)的克當(dāng)量數(shù)/溶液體積（升）摩爾濃度(mol/L),即溶液的濃度

35、用1升溶液中所含溶質(zhì)的摩爾數(shù)來表示. 例如1升濃硫酸中含18.4摩爾的硫酸，則濃度為18.4mol/L。 摩爾濃度（M）=溶質(zhì)摩爾數(shù)/溶液體積（升）濃度單位的換算公式：1）當(dāng)量濃度=1000.d.質(zhì)量百分濃度/E 2）質(zhì)量百分濃度=當(dāng)量濃度E/1000.d 3）摩爾濃度=1000.d質(zhì)量百分濃度/M 4）質(zhì)量百分濃度=質(zhì)量-體積濃度（毫克/升）/104.d 5）質(zhì)量-體積濃度（mg/L）=104質(zhì)量百分濃度 5、ppm是重量的百分率，ppm=mg/kg=mg/L 即:1ppm=1ppm=1000ug/L ,1ppb=1ug/L=0.001mg 式中：E溶質(zhì)的克當(dāng)量；d溶液的比重； M溶質(zhì)的摩爾

36、質(zhì)量；“PS”緩沖液PH7.67.47.27.0H2ONaClNa2HPO4NaH2PO410008.52.20.110008.52.20.210008.52.20.3100ml8.5g2.2g0.4ga.Hanks'平衡鹽成分（g/L）BS004BS006BS008BS010無水氯化鈣0.140.14無水硫酸鎂0.097670.09767氯化鉀0.400.400.400.40氯化鈉8.008.008.008.00無水磷酸二氫鉀0.060.060.060.06碳酸氫鈉無水磷酸氫二鈉0.0480.0480.0480.048D葡萄糖1.001.001.001.00酚紅0.010.01pH（

37、無碳酸氫鈉）6.6±0.36.6±0.36.7±0.36.6±0.3pH（加碳酸氫鈉）7.4±0.37.4±0.37.4±0.37.3±0.3滲透壓（無碳酸氫鈉）276±5%276±5%270±5%270±5%滲透壓（加碳酸氫鈉）284±5%286±5%280±5%280±5%b. Earle's平衡鹽成分（g/L）BS000BS001無水氯化鈣0.20.2無水硫酸鎂0.097670.09767氯化鉀0.40.4碳酸氫鈉氯化鈉6

38、.86.8無水磷酸二氫鈉0.1220.122D葡萄糖11酚紅0.01pH（無碳酸氫鈉）4.6±0.34.6±0.3pH（加碳酸氫鈉）7.6±0.37.6±0.3滲透壓（無碳酸氫鈉）240±5%240±5%滲透壓（加碳酸氫鈉）288±5%288±5%c.Dulbecco's磷酸鹽緩沖鹽成分（g/L）BS901BS902無水氯化鈣氯化鉀0.20.2磷酸二氫鉀0.20.2氯化鈉88無水氯化鎂0.047無水磷酸氫二鈉1.151.15pH7.5±0.37.5±0.3滲透壓280±5%28

39、5±5%SDS-PAGE蛋白電泳SDS-PAGE上樣緩沖液：5ml 1mol/l的Tris-HCl（pH6.7），2.5gSDS, 1ml巰基乙醇，0.05g溴酚蘭，10g蔗糖，加水定容至100ml?？捡R斯亮藍(lán)染色液：0.25g考馬斯亮藍(lán)R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。脫色液：90ml甲醇:水(1:1)和10ml冰醋酸配成100ml脫色液Tris-甘氨酸電泳緩沖液（pH8.3）：在900ml去離子水中溶解15.1gTris堿，94g甘氨酸，加入50ml10（W/V）的電泳級SDS貯液，用去離子水補(bǔ)至1000ml量則成5×

40、;貯液。10% (W/V) SDS：組份濃度：10% (W/V)SDS，配制量：100ml，配制方法：1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23.將溶液定容至100ml后，室溫保存。1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 組份濃度：1.5 M Tris-HCl，配制量：1 L配制方法： 1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中， 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｓ脻恹}酸調(diào)節(jié)pH值至8.8， 將溶液定容至1 L，高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注

41、意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個單位。SDS-PAGE分離膠配方表SDS-PAGE濃縮膠（5% Acrylamide）配方表抗生素的貯存溶液及其工作濃度*1 以水為溶劑的抗生素貯存液應(yīng)通過0.22 mm濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)保存于不透光的容器中。*2 鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基)。常用培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g；酵母提取物5g；氯化鈉10g。如果需要用5mol/L Na

42、OH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。2×YT培養(yǎng)基配制每升培養(yǎng)基，在900ml去離子水中加入：胰化蛋白胨    16g，酵母提取物    10g，NaCl 5g.搖動容器直至溶質(zhì)溶解，用5N NaOH調(diào)pH值至7.0，用去離子水定容至1L。在15psi(1.05kgcm2)高壓下蒸汽滅菌20min。YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g，酵母提取物10g，葡萄糖20g。用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸營

43、養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因為YPD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。SOB培養(yǎng)基配制每升培養(yǎng)基，在950ml去離子水中加入：胰化蛋白胨    20g，酵母提取物5g，NaCl 0.5 g.搖動容器使溶質(zhì)完全溶解。加10ml 250mmolL KCl溶液(將1.86g KCl用100ml去離子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH<!>調(diào)pH值至7.0。用去離子水定容至1L。在15 psi(1.05kgcm2)高壓下蒸汽滅菌20min。該溶液在使用前，加入5ml滅菌的

44、2 mol/l MgCl22molL MgCl2溶液的配制方法如下：用90ml去離子水溶解19g MgCl2，用去離子水調(diào)整體積為100ml，在15psi(1.05kgcm2)高壓下蒸汽滅菌20min。SOC培養(yǎng)基SOC培養(yǎng)基除含有20mmol/L葡萄糖外，其他成分與SOB培養(yǎng)基相同。SOB培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后冷至60或60以下，加20ml除菌的1mol/L葡萄糖溶液(1mol/l葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去離子水溶解18g葡萄糖，完全溶解后，用去離子水定容至100ml，用0.22um濾器過濾除菌)。Terrific肉湯(又稱TB培養(yǎng)基，Tartof and Hobbs 1987)配制每

45、升培養(yǎng)基，在900ml去離子水中加入：胰化蛋白胨    12g，酵母提取物24g，甘油 4ml.搖動容器使溶質(zhì)完全溶解。然后在15psi(1.05 kgcm2)高壓下蒸汽滅菌20min。當(dāng)溶液冷至60或60以下時加入100ml無菌的0.17mol/L KH2PO4，0.72mol/L K2HPO4溶液該溶液的配制方法是：用90ml去離子水溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4，完全溶解后，用去離子水定容至100ml并在15psi(1.05kgcm2)高壓下蒸汽滅菌20min。GYT培養(yǎng)基（Tung and Chow 1995）10%(v

46、/v)甘油，  0.125%(m/v)酵母提取物，  0.25%(m/v) 胰蛋白胨.使用0.22um濾器過濾除菌，分裝成2.5ml一份，保存于4。M9培養(yǎng)基Na2HPO4 12.8g KH2PO4 3.0g NaCl 0.5g NH4Cl 0.5g 葡萄糖(單獨(dú)滅菌) 10.0g 維生素B1(單獨(dú)滅菌) 1g/ml pH 自然配制1L培養(yǎng)基，應(yīng)在750m1無菌去離子水(冷至50或50以下)中加入：5×M9鹽溶液 200ml，1 mol/LMgSO4 2 ml，適當(dāng)碳源的20%溶液(如20%葡萄糖) 20ml，1 mol/LCaCl2 

47、; 0.1 ml，滅菌的去離子水至980ml。如果需要，可在M9培養(yǎng)基中補(bǔ)加適當(dāng)氨基酸和維生素的貯存液。5×M9鹽溶液配制：用無離子水溶解下列鹽類，終體積為1L：Na2HPO4·7H2O  64g， KH2PO4 15g，NaCl 2.5g，NH4Cl  2.5g。分裝成200ml一份，調(diào)pH=7.4，在15psi(1.05kg/cm2)高壓下蒸汽滅菌15min。分別配制MgSO4溶液和CaCl2溶液，高壓滅菌。用無菌水將5×M9鹽溶液稀釋至980ml后，加入MgSO4和CaCl2溶液。葡萄糖溶液在加到稀釋的M9鹽溶液之前，用0.22um濾器過濾除菌。當(dāng)使用含有染色體上脯氨酸生物合成操縱子缺陷(lac-proAB)的大腸桿菌以及互補(bǔ)的proAB基因在F'質(zhì)粒上時，在M9基本培養(yǎng)基中補(bǔ)加下列成分：0.4%(m/v)葡萄糖(右旋糖)5mM MgSO4·7H2O0.01%硫胺NZCYM培養(yǎng)基配制每升培養(yǎng)基，在950ml去離子水中加入：NZ胺    10g，NaCl 5g，酵母提取物5g，酪蛋白水解物1