生物化學實驗習題及參考答案.

1、生物化學實驗習題及解答 一、名詞解釋1、pI;2、層析；3、透析；4、SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳；5、蛋白質變性;6、復性；7、Tm 值；8、同工酶;9、Km值;10、DNA變性;11、退火;12、增色效應二、基礎理論單項選擇題1、用下列方法測定蛋白質含量，哪一種方法需要完整的肽鍵？（A、雙縮月尿反應B、凱氏定氮C、紫外吸收D、竣肽酶法2、下列哪組反應是錯誤的？（A、葡萄糖Molish反應B、膽固醇Libermann-Burchard反應C、色氨酸坂口（Sakaguchi反應D、氨基酸西三酮反應3、SangerM齊1J是（A、苯異硫氟酸B、2,4-二硝基氟苯C、丹磺酰氯D、-琉基乙醇4、肽鍵在

2、下列哪個波長具有最大光吸收？（A、 215nmB、 260nmC、 280nmD、 340nm5、下列蛋白質組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？（A、色氨酸的呷咪基B、酪氨酸的酚環(huán)C、苯丙氨酸的苯環(huán)D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝膠電泳測定蛋白質的相對分子量是根據(jù)各種蛋白質（A、在一定pH值條件下所帶的凈電荷的不同B、分子大小不同C、分子極性不同D、溶解度不同7、蛋白質用硫酸俊沉淀后，可選用透析法除去硫酸俊。硫酸俊是否從透析袋中 除凈，你選用下列哪一種試劑檢查？（A、西三酮試劑B、奈氏試劑C、雙縮月尿試劑D、Folin-酚試劑8、蛋白質變性是由于（A、一級結構改變B、亞基解聚C、空間構

3、象破壞D、輔基脫落9、用生牛奶或生蛋清解救重金屬鹽中毒是依據(jù)蛋白質具有（A、膠體性B、粘性C、變性作用D、沉淀作用10、有關變性的錯誤描述為（A、蛋白質變性后，其一級結構和空間結構改變B、蛋白質變性后，其理化性質和生物學活性改變C、加熱、紫外線照射、超聲波等可以引起蛋白質變性D、變性蛋白質粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、雙鏈DNA熱變性后（A、黏度下降B、沉降系數(shù)下降C、浮力密度下降D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點通常在酶的哪一種 氨基酸殘基上？（A、大冬氨酸B、脯氨酸C、賴氨酸D、絲氨酸13、在生理條件下，下列哪種基團既可以作為H+的受體也可以作為H+

4、的供 體？（A、His的咪唾基B、Arg的“瓜基C、Cys的琉基D、Trp的呷咪基三、填空1、脯氨酸和羥脯氨酸與西三酮反應產(chǎn)生（色物質，而其他氨基酸與西三酮產(chǎn)生 （色的物質。2、通?？捎米贤夥止夤舛确y定蛋白質的含量，這是因為蛋白質分子中的（、 （、（三種氨基酸的共腕雙鍵有紫外吸收能力。3、移液槍在每次實驗后應將刻度調至（，讓彈簧回復原型以延長移液槍的使用 壽命，并嚴禁吸?。ā?、使用離心機時，如有噪音或機身振動時，應立即（，并且離心管須對稱放入套管 中,防止機身振動，若只有一支樣品管，則另外一支要用（代替。5、測定蛋白質濃度的方法主要有（、（、（。6、利用蛋白質不能通過半透膜的特性，使它和其

5、他小分子物質分開的方法有 （和（等。7、核酸在260nm附近有強吸收，這是由于（。8、雙鍵DNA熱變性后，或在pH2以下，或在pH12以上時，其OD260（，同樣條件 下，單鍵DNA的OD260（。9、硝酸纖維素膜可結合（鏈核酸。將RNA變性后轉移到硝酸纖維素膜上再進 行雜交，稱（印跡法。10、常用二苯胺法測定（含量，用苔黑酚法測定（含量。11、變性DNA的復性與許多因素有關 包括（、卜（、«（。12、溫度對酶活力影響有以下兩方面：一方面（，另一方面（。13、維生素C是（酶的輔酶，另外還具有（作用。14、在分光光度計的使用或檢定中，（的準確度是衡量儀器工作性能的一項重要 指標，它的準

6、確程度直接關系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學性。（的誤差越大，測試結果的可信性越差，從而影響到測試數(shù)據(jù)的準確性。四、問答1、紫外分光光度法測定核酸含量的原理。2、蛋白質變性與沉淀的關系。3、牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。4、試述凝膠成像系統(tǒng)操作時應注意的事項。5、若樣品中含有蛋白質和核甘酸等雜質，如何排除干擾？6、體液血糖測定有哪些方法？7、DNA在電場中的遷移率取決于哪些因素 ？8、瓊脂糖凝膠有哪些注意事項？9、考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質含量的原理是什么？10、何謂Rf值?影響Rf值的主要因素是什么？11、蛋白質分離和純化的一般方法？12、如何正確選擇核酸電泳指示劑？一、名詞解釋1、指氨基酸

7、的正離子濃度和負離子濃度相等時的 pH值,用符號pI表示。2、按照在移動相和固定相（可以是氣體或液體之間的分配比例將混合成分分開 的技術。3、通過小分子經(jīng)過半透膜擴散到水（或緩沖液的原理，將小分子與生物大分子 分開的一種分離純化技術。4、在去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰氨凝膠電泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不是根據(jù)分子所帶的電荷大小分離的。5、生物大分子的天然構象遭到破壞導致其生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質在受 到光照，熱，有機溶濟以及一些變性濟的作用時，次級鍵受到破壞，導致天然構象的破壞，使蛋白質的生 物活性喪失。6、在一定的條件下，變性的生物大分子恢復成具有生物活性的天然構象

8、的現(xiàn) 象。7、核酸分子變性過程中，紫外吸收達到最大增量一半時的溶解溫度。8、能催發(fā)相同的反應類型但其理化性質及免疫學性質不同的酶。9、反應速度為最大反應速度一半時的底物濃度。是酶的特征物理學常數(shù)之 近似表示酶與底物的親和力。10、DNA雙鏈解鏈，分離成兩條單鏈的現(xiàn)象。11、既DNA由單鏈復性、變成雙鏈結構的過程。來源相同的 DNA單鏈經(jīng)退 火后完全恢復雙鏈結構的過程，同源DNA之間'DNA和RNA之間，退火后形成雜交 分子。12、當雙螺旋DNA熔解（解鏈時,260nm處紫外吸收增加的現(xiàn)象。二、基礎理論單項選擇題1、A;2、C；3、B;4、A;5、A;6、B;7、B；8、C;9、D;10

9、、A;11、A;12、D;13、A;三、填空1、黃、紫2、Trp、Tyr、phe3、最大、強揮發(fā)性、強腐蝕性的液體。4、切斷電源，即時排除故障；等質量的水5、雙縮月尿法、Folin-酚試劑法、凱氏定氮法6、透析、超濾7、在喋吟堿基和喀呢堿基中存在共腕雙鍵8、增加、不變9、單、Northern10、DNA、RNA11、樣品的均一度、DNA的濃度、DNA片段的大小、溫度的影響、溶液的離 子強度12、溫度升高，可使反應速度加快；溫度太高，會使酶蛋白變性而失活13、羥化、解毒14、透射比或吸光度、透射比或吸光度四、問答1、答：核酸、核甘酸及其衍生物都具有共腕雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光,RNA和DNA的 紫

10、外吸收峰在260nm波長處。一般在260nm波長下，每1ml含1由RNA溶液的光 吸收值為0.0220.024每1m1含1聞DNA溶液的光吸收值約為0.020,故測定未知濃 度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可計算出其中核酸的含量。此法操作 簡便,迅速。若樣品內混雜有大量的核甘酸或蛋白質等能吸收紫外光的物質，則測光誤差較大，故應設法事先除去。6、答：沉淀可以是由蛋白質變性從而產(chǎn)生沉淀，也可以是由于鹽析。蛋白質變性是指 光照，熱，有機溶濟以及一些變性劑（如重金屬鹽的作用時蛋白質的空間結構被破壞， 使得蛋白質喪失活性，該過程不可逆。鹽析是指向蛋白質的溶液中加入輕金屬鹽 ，使 得蛋白質沉淀

11、析出，這是由于加入鹽降低了蛋白質得溶解度而析出，該過程可逆，加水 蛋白質又會溶解。二者本質上是不同的。3、答：牛奶含有半乳糖、蛋白質、脂肪成分。蛋白質中的酪蛋白通過等電點沉淀，冉通過離心而獲得，糖類小分子由于處于清夜中而分離，沉淀物中所含有的脂肪通過有 機溶劑抽提而去除，最終得到純白色、晶狀酪蛋白。方法:取新鮮牛乳，用酸堿調PH到酪蛋白的等電點沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇 醴吸水至干燥得粉末稱重，計算提取率。步驟：保溫一調PH沉淀一離心一洗滌一 干燥一稱量4、答:1紫外凝膠照相時要防止EB污染儀器，在紫外透射燈樣品臺上墊上藍色和白色 膠片，開關凝膠成像系統(tǒng)前面板那、操作GeneSna琳件之時都

12、不可以戴手套。白光透射光 源放置在紫外透射光源上面時要把藍色和白色膠片取出。2注意開機順序，先開凝膠成像系統(tǒng)，再打開電腦進入GeneSna解件。3在使用紫外光源照相的過程中，不可以打開凝膠成像系統(tǒng)前面板。5、答：用去垢劑（如SDS,十二烷基磺酸鈉使蛋白質變性，RNA通過RNase消化清除。測定血糖的方法常用的有三種：靜脈血漿葡萄糖(VPG,毛細血管全血葡萄糖 (CBG和靜脈全血葡萄糖(VBG。7、答:1DNA的分子大小及構型：？8 A不同構型DNA的移動速度次序為：供價閉環(huán) DNA(covalentlyclosed circular,cccDNA直線DNA開環(huán)的雙鏈環(huán)狀 DNA。2瓊脂糖濃度：

13、一個 給定大小的線狀DNA分子，其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關系。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。3DNA分子的構象：當DNA分子處于不同構象時，它在電場中移動距離不 僅和分子量有關，還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋 DNA在 瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的，超螺旋DNA移動最快，而線狀雙鏈DNA移動最 慢。"4電源電壓:瓊脂糖凝膠分離大分子 DNA實驗條件的研究結果表明，在低濃 度、低電壓下，分離效果較好。5嵌入染料的存在：熒光染料澳化乙噬用于檢測瓊脂 糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長

14、線狀和帶缺口的環(huán)狀 DNA,使其剛性更強，還會使線狀DNA遷移率降低15%。6離子強度影響：電泳緩沖液的組成及其離子強度影響 DNA的電泳遷移率。8、答：1緩沖液的使用要正確，長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進行緩沖 液的循環(huán)是可取的。2瓊脂糖的影響。3凝膠中所加緩沖液應與電泳槽中的相一致。4樣品加入量的多少。5電泳系統(tǒng)的變化會影響DNA的遷移，加入DNA標準參照物進行判定是必要 的。6DNA樣品中的鹽濃度也影響DNA的遷移率。7DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃 度、遷移分子的形狀及大小。9、答：考馬斯亮藍 G-250(Coomassie brilliant blue G-250染料，在游離狀態(tài)下溶液呈棕 紅色，當它與蛋白質結合后變?yōu)樗{色。蛋白質含量在01000小碘圍內，蛋白質-色素結合物在595nm下的吸光度與蛋白質含量成正比，故可用比色法進行定量分析?？?馬斯亮藍G-250法(Bradford法是比色法與色素法相結合的復合方法，簡便快捷，靈敏 度高，穩(wěn)定性好，是一種較好的蛋白質常用分析方法。10、答：Rf為氨基酸的比移值。 影響紙層析遷移率Rf值的主要因素：1、樣 品本身的性質和結構；2、溶劑的性質；3、PH值；4、溫度；5、濾紙性質。11、答：主要有以下一些方法：透析及超濾法；丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀；電 泳