淄博職業(yè)學(xué)院畢業(yè)論文

1、 畢 業(yè) 論 文課題名稱花生殼中抗氧化物的提取方法姓 名 學(xué) 號 所在系 專業(yè)年級 指導(dǎo)教師 職 稱 二OO 七 年 月 日摘要本文主要研究了回流浸提法從花生殼中提取天然抗氧化成分（主要是黃酮類化合物）的方法。討論了溶劑（主要是甲醇、乙醇）、時間（2h、3h、4h）、溫度(70、80、90)、酸度（pH=2、3、5）等因素對提取效果的影響。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物，用分光光度法在紫外區(qū)對總黃酮的含量進(jìn)行測定。并通過正交試驗確定了最佳提取工藝。通過對比，結(jié)果表明最佳提取工藝條件為：乙醇為提取劑，濃度為70%，提取溫度為90，pH=3，提取時間為4h時提取物中總黃酮含量較高。關(guān)鍵詞：花生殼；黃酮類；提?。环?/p>

2、光光度法 目錄摘要 2 概述3 1試驗材料與方法31.1 試驗材料 3 原料3 試劑3 1.2儀器設(shè)備 3 1.3 實驗方法 3總黃酮含量的測定 3 原料的預(yù)處理 4 提取方法4 樣品制備流程42.預(yù)試驗結(jié)果對比43試驗結(jié)果與分析 53.1試驗方案設(shè)計 53.2試驗結(jié)果分析 54 結(jié)果與討論74.1結(jié)果74.2討論 7參考文獻(xiàn)8 謝辭9概述花生，長生果，豆科，一年生草本。目前，其開發(fā)利用的主要是花生仁、花生紅衣和花生根1，花生果殼大部分用作燃料或當(dāng)作廢渣棄去，造成自然資源的極大浪費，直接影響了花生的綜合利用價值。我國每年花生莢果產(chǎn)量約500萬t，其中花生殼占140萬t。研究表明，花生殼中除了含

3、有大量碳水化合物及粗纖維外，還有黃酮類化合物，該類化合物有很好的清除自由基的作用。據(jù)報道，成熟的花生殼中有含量（質(zhì)量含量，下同）為3.34%7.13%的多酚類物質(zhì)。酚類物質(zhì)是油脂的抗氧化劑，若花生殼中酚類物質(zhì)超過0.167%時，就顯出抗氧化作用2。因此，若把花生殼中的多酚類物質(zhì)提出，即可獲得天然的食品抗氧化劑。近年來，有醫(yī)學(xué)報道，花生殼中的黃酮類化合物質(zhì)有降血壓、降血脂和治療冠心病的作用。所以，從花生殼中提取的抗氧化成分不僅是油脂的防腐劑，而且還有保健作用，是一種多功能的食品添加劑。1試驗材料與方法1.1 試驗材料 原料 花生殼 試劑 95%乙醇 分析純 天津北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠 無水甲醇 分析

4、純 北方化工廠無水乙醇 分析純 天津北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠固體NaOH 天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司 （1:1）HCl溶液 煙臺三合化學(xué)試劑有限公司 5%NaNO2溶液10%Al（NO3）31.2 儀器設(shè)備 粉碎機 FFC-15 山東即墨市雙工機械廠制造電子天平 AR2130/C 上海電子儀器廠 電熱恒溫水浴鍋 HWS-20 龍口市先科儀器公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE52CS 上海亞榮生化儀器廠循環(huán)水式多用真空泵 SHB-BA95型 鄭州長城科工貿(mào)有限公司真空干燥箱 DZF-6050型 上海精宏實驗設(shè)備有限公司紫外可見分光光度計 721 上海精密科學(xué)儀器有限公司1.3 試驗方法總黃酮含量的測定3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的

5、制作配制0.2mg/mL的蘆丁溶液50mL，取不同體積的蘆丁溶液于7個25mL容量瓶中，每個反應(yīng)管中蘆丁含量分別為0.0mg，0.2mg，0.4mg，0.6mg，0.8mg，1.0mg，1.2mg。各加入5%的NANO2溶液1mL，放置6min，再加入10%的AL（N03）3溶液1mL，放置6min，然后加入4%的NAOH溶液10mL，用蒸餾水定容，靜置15min，以第一管做參比，在510nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得蘆丁質(zhì)量濃度與吸光度的關(guān)系曲線方程：Y=0.4198X+0.0159R2=0.9995 樣品溶液的制備分別稱取不同方法下提取的干燥后的總黃酮物適量于25mL容量瓶中，用蒸餾水定

6、容至刻度，搖勻溶解，分別吸取1mL置于25mL容量瓶中，在510nm處測吸光度A，然后由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算得到黃酮的含量。 原料的預(yù)處理 花生殼經(jīng)清洗后，晾干，在5060的溫度下烘干23h，然后在常溫下自然干燥，保存于干燥的環(huán)境下。用粉碎機將花生殼粉碎，過40目篩。干燥保存?zhèn)溆谩?提取方法 預(yù)試驗是以75%的乙醇作為溶劑，在同樣的溫度（80），同樣的時間（3h），同樣的溶劑比（1:30）和pH值（pH=3）條件下用回流浸提和直接浸提來提取黃酮，對比哪種方法提取的黃酮含量高。 回流浸提法 稱花生殼粉5g于250mL圓底燒瓶中，用1:30的料液比加入150mL70%的乙醇溶液 ，調(diào)pH=3（經(jīng)查閱資

7、料知在酸性條件下提取率高），在80下回流浸提3h，真空抽濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾（35）回收溶劑，濃縮至干，用無水乙醇將干燥物洗出，真空干燥至恒重。直接提取法稱花生殼粉5g于250mL錐形瓶中，用1:30的料液比加入150mL70%的乙醇溶液，調(diào)pH=3，在80下直接浸提3h，真空抽濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾（35）回收溶劑，濃縮至干，用無水乙醇將干燥物洗出，真空干燥至恒重。 樣品制備流程 濾渣 花生殼粉碎稱量（5.000g）回流浸提趁熱抽濾濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液無水乙醇洗出真空干燥試驗方案設(shè)計選用乙醇（濃度分別為60%，70%，80%）、甲醇（濃度分別為60%，75%，90%）兩種不同濃度的不同溶劑作

8、為提取劑來進(jìn)行試驗。由于料液比對提取效果影響不大，固定料液比為1：30。選擇乙醇濃度(%)、提取時間(h )、提取溫度()和pH值四個因素作為正交試驗的考察因素，提取率（提取物中黃酮的含量%）作為試驗指標(biāo)，進(jìn)行正交試驗。試驗因素與水平見表2(乙醇為提取劑)、表3（甲醇為提取劑）。 表2 乙醇試驗因素與水平表乙醇濃度(%)提取時間(h)提取溫度()pH值160270227038033804905表3 甲醇試驗因素與水平表甲醇濃度(%)提取時間(h)提取溫度()pH值1602702275380339049052. 試驗結(jié)果與分析2.1預(yù)試驗結(jié)果 按方法進(jìn)行實驗，結(jié)果見表1。表1 不同提取方法的比較

9、提取方法乙醇回流浸提法乙醇直接浸提法提取物總量（g）01830.227總黃酮含量（%）18.697.46提取率（%）3.884.54經(jīng)對比，回流浸提法提取率雖然低，但是總黃酮含量高，由于本試驗是以總黃酮含量作為考察指標(biāo)，因此，選用回流浸提法進(jìn)行正式試驗。在預(yù)試驗中，由于粉碎的太細(xì)，纖維物質(zhì)影響浸提使提取物顏色成為深紅棕色，所以正式試驗選用過完40目的粗粉末。2.2試驗結(jié)果分析正交試驗設(shè)計與結(jié)果分析見表4（乙醇為提取劑）、表5（甲醇為提取劑）表4 乙醇正交試驗設(shè)計及結(jié)果表L9（34）A(濃度%)B(時間h)C(溫度)D(pH)提取量(g)提取率（%）黃酮含量(%)1231(60)1(60)1(6

10、0)1(2)2(3)3(4)1(70)2(80)3(90)1(2)2(3)3(5)0.1430.1170.1462.862.342.9212.3414.4915.604562(70)2(70)2(70)1(2)2(3)3(4)2(80)3(90)1(70)3(5)1(2)2(3)0.1840.2450.1743.684.903.4817.1218.4616.937893(80)3(80)3(80)1(2)2(3)3(4)3(90)1(70)2(80)2(3)3(5)1(2)0.2310.1410.3864.622.827.7217.6216.2017.34K1K2K342.4352.5151.

11、1647.0849.1549.8745.4748.9551.6848.1449.0448.92k1k2k314.1417.5017.0515.6916.3816.6215.1616.3217.2316.0516.3516.31極差3.360.932.070.3 由上表可知,乙醇四種因素最佳組合為濃度為70%，t=4h，T=90，pH=3。黃酮含量為18.46%。因素影響依次是濃度>溫度>時間>pH。表5 甲醇正交試驗設(shè)計及結(jié)果表L9（34）A(濃度%)B(時間h)C(溫度)D(pH)提取量(g)提取率(%)黃酮含量(%)1231(60)1(60)1(60)1(2)2(3)3(

12、4)1(70)2(80)3(90)1(2)2(3)3(5)0.3050.2260.3136.104.526.2611.1813.9513.274562(75)2(75)2(75)1(2)2(3)3(4)2(80)3(90)1(70)3(5)1(2)2(3)0.2100.4130.3384.208.266.7616.6314.2315.087893(90)3(90)3(90)1(2)2(3)3(4)3(90)1(70)2(80)2(3)3(5)1(2)0.3230.1930.4096.463.868.1815.7717.9914.40K1K2K338.445.9448.1643.5846.174

13、2.7543.2545.9843.2739.8144.8047.89k1k2k312.815.3116.0514.5315.3914.2514.4215.3314.4213.2714.9315.96極差3.251.140.912.69 由上表可知,甲醇四種因素的最佳組合為濃度為90%，t=3h，T=80，pH=5。黃酮含量為17.99%。各因素影響依次是濃度>pH>時間>溫度。對比上述兩個表的結(jié)論,可以得到,花生殼中總黃酮含量的最佳提取劑是乙醇，最佳提取工藝是70%乙醇，溫度在90，pH=3時提取4h。黃酮的含量為18.46%。3 結(jié)論與討論3.1結(jié)論 通過預(yù)試驗對比了回流浸

14、提法和直接浸提法，乙醇回流浸提法黃酮含量為18.69%，乙醇直接浸提法黃酮含量為7.46%。試驗確定了用回流浸提法效果好，因此正試驗中采用回流浸提法來提取花生殼中的總黃酮。 花生殼中總黃酮含量的最佳提取劑是乙醇，最佳提取工藝是70%乙醇，溫度在90，pH=3時提取4h。黃酮的含量為18.46%。3.2討論 用乙醇提取花生殼中的抗氧化成分，影響因素有溫度、時間、酸度、提取劑濃度和溶質(zhì)溶劑比，考慮到固液比對提取效果影響不大，試驗只討論了前四種因素的影響，通過正交試驗確定了最佳提取工藝為濃度為70%，浸提時間為4h，溫度為90，pH值為3時提取效果比較好。預(yù)實驗中，抽濾之后，濾液為紅褐色，濾渣為米黃

15、色，真空濃縮時，開始出現(xiàn)的干燥固體是土黃色，后來成為紅褐色，原因可能由于真空旋轉(zhuǎn)時溫度高，因此，正試驗中將減壓蒸餾和真空干燥的溫度調(diào)低。另一原因可能是由于花生殼粉碎的太細(xì)，里面含有的纖維物質(zhì)影響了浸提，所以，正實驗中換用過完40目后的粗粉末。用分光光度法測定花生殼中總黃酮含量方法簡單，準(zhǔn)確性較好，可為今后利用花生殼提取黃酮類化合物建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考4。由正交表可得到，溶劑的濃度對提取效果的影響最大。由于標(biāo)準(zhǔn)曲線是用水定容的，而黃酮在水中的溶解性很小，導(dǎo)致測得的數(shù)據(jù)精確性和準(zhǔn)確性不高，因此，時間、溫度和pH值對提取效果的影響沒有得到規(guī)律。測得的黃酮含量比較低，分析原因可能是由于本試驗只研究黃酮的提取方法5，并沒有涉及到將產(chǎn)品進(jìn)一步分離，純化，同時也可能與干燥操作有一定的關(guān)系。有待于以后繼續(xù)進(jìn)行。參考文獻(xiàn)1朱麗靜.花生殼綜合利用J.科技信息,1996,(9):2324.2萬素英等.食品抗氧化劑M.中國輕工業(yè)出版社，1998. 133苗敬芝等.銀杏