竹節(jié)參皂苷抗風(fēng)濕作用的有效性與安全性評價(jià)

1、 姓名：張 銳 學(xué)號：1522210550015 發(fā)現(xiàn)和甄別 臨床前研究臨床研究 申報(bào)及后續(xù)工作基礎(chǔ)和應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)并篩選藥物來源藥學(xué)藥理學(xué)毒理學(xué)期臨床試驗(yàn)期臨床試驗(yàn)期臨床試驗(yàn)填寫新藥申請后續(xù)登記活動 新藥研發(fā)項(xiàng)目IV期臨床試驗(yàn)臨床前研究前言有效性安全性 總結(jié)新藥臨床前研究的內(nèi)容新藥臨床前研究的內(nèi)容藥學(xué)藥學(xué) 定型鑒別、定量測定、理化性質(zhì)、合成路線和制劑工定型鑒別、定量測定、理化性質(zhì)、合成路線和制劑工藝、穩(wěn)定性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案制訂等。藝、穩(wěn)定性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案制訂等。藥理學(xué)藥理學(xué) 藥效學(xué)、一般藥理學(xué)、藥代動力學(xué)及可能的作用機(jī)制藥效學(xué)、一般藥理學(xué)、藥代動力學(xué)及可能的作用機(jī)制研究。研究。 毒理學(xué)毒理學(xué) 急

2、性毒性、長期毒性、特殊毒性及其它毒性（刺激性、急性毒性、長期毒性、特殊毒性及其它毒性（刺激性、溶血、過敏、藥物依賴性、）研究溶血、過敏、藥物依賴性、）研究 。一、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎簡介 前言前言有效性安全性 總結(jié)前言 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoidarthritis，RA）是一種自身免疫性疾病，確切病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚。關(guān)節(jié)的疼痛與炎癥是風(fēng)濕病中較為常見的臨床表現(xiàn)，因此鎮(zhèn)痛與抗炎是風(fēng)濕病治療學(xué)中最主要的內(nèi)容。常用藥物：常規(guī)藥物治療(如非甾體抗炎藥、慢作用抗風(fēng)濕藥、糖皮質(zhì)激素)、生物制劑治療等二、竹節(jié)參簡介 前言前言有效性安全性 總結(jié)前言 竹節(jié)參竹節(jié)參在土家族苗族聚居區(qū)民間醫(yī)療中被譽(yù)為“ 草藥

3、之王” , 屬珍稀瀕危的名貴“ 七類” 中草藥。竹節(jié)參為五加科植物竹節(jié)參Panax japonicus C. A. Mey. 的干燥根莖。作用：散瘀止血、消腫止痛、祛痰止咳、補(bǔ)虛強(qiáng)壯的功效，用于治療癆嗽咯血、跌撲損傷、咳嗽痰多、病后虛弱等癥。二、竹節(jié)參簡介 前言前言有效性安全性 總結(jié)前言 竹節(jié)參的主要化學(xué)成分皂苷，其結(jié)構(gòu)主要是齊墩果烷型五環(huán)三葩皂苷和達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂昔。各類型三萜類皂苷的母核結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)式轉(zhuǎn)基因式自發(fā)式 其他誘導(dǎo)式TNF- 轉(zhuǎn)基因型IL-1Ra-/-模型K/BxN 轉(zhuǎn)基因模型HTLV-1 小鼠模型MRL/Mpj-lpr/lpr(MRL/lpr)小鼠 降植烷誘導(dǎo)型 膠原抗體誘導(dǎo)型

4、前炎癥因子誘導(dǎo)型 卵蛋白誘導(dǎo)型 角叉菜膠誘導(dǎo)型 avridine 誘導(dǎo)型 蛋白多糖誘導(dǎo)型軟骨低聚體基質(zhì)蛋白誘導(dǎo)型嚙齒類動物模型佐劑誘導(dǎo)型（ AA ）膠原誘導(dǎo)型（ CIA）鏈球菌細(xì)胞壁誘導(dǎo)型（SCW）一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性實(shí)驗(yàn)動物：SPF級昆明種小鼠,體重202g,雌雄各半。1.1抗炎實(shí)驗(yàn)1.1.1角叉菜膠所致小鼠足腫脹模型 (1)分組給藥 隨機(jī)分為五組,每組10只。組為control, 組為吲哚美辛，、 、組為TSPJ低、中、高劑量組。 (2)角叉菜膠所致小鼠足腫脹模型 按藥理實(shí)驗(yàn)方法，各鼠右足趾皮下注射1%角叉菜膠(50L/只)致炎。 (3) 給藥方式 本次試驗(yàn)

5、為預(yù)防性試驗(yàn),每組連續(xù)灌胃給藥10d, d10給藥后1h后致炎。 (4)檢測指標(biāo) 在致炎后0.5, 1, 2, 3, 4, 5h時(shí)采用自制的容量測定儀,以排水法計(jì)算其右足趾體積,計(jì)算各組的腫脹度和腫脹抑制率。一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性1.1.2抗氧化實(shí)驗(yàn) (1)分組給藥 隨機(jī)分為五組,每組10只。I組為control, 組為吲哚美辛, 、 IV、 V組為TSPJ低、中、高劑量組。 (2)給藥方式和時(shí)間 本次試驗(yàn)為預(yù)防性試驗(yàn),每組連續(xù)灌胃給藥10d。 (3)檢測指標(biāo) 末次給藥后1h摘眼球取血,靜置，分離血清,分裝，-20保存。按GSH-PX、SOD和MDA試劑盒要求進(jìn)行

6、操作,分別檢測小鼠血清GSH-PX、SOD活性及過氧化產(chǎn)物MDA的含量。一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性1.1.3細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn) (1)分組給藥 隨機(jī)分為五組,每組10只。I組為control, 組為吲哚美辛, 、 IV、 V組為TSPJ低、中、高劑量組。 (2)給藥方式和時(shí)間 本次試驗(yàn)為預(yù)防性試驗(yàn),每組連續(xù)灌胃給藥10d。 (3)檢測指標(biāo) 末次給藥后1h摘眼球取血,分離血清,-20保存。按試劑盒操作方法,檢測小鼠血清IL-1 、 TNF-a含量。一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.2.1竹節(jié)參總皂苷對角叉菜膠所致小鼠足腫脹的抑制結(jié)果 角叉菜

7、膠是常用的急性炎癥模型刺激物,局部注射引起明顯的毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加,造成局部水腫,炎性細(xì)胞浸潤,形成紅腫痛熱等急性炎癥癥狀。使用吲哚美辛在致炎后0.5-4 h就減輕足腫脹,持續(xù)5小時(shí)以上,與control組相比,差異具有顯著性(P0.01), TSPJ能減輕角叉菜膠所致小鼠右后足的紅、腫等癥狀,有明顯差異(P0.05或P0.01),但是起效緩慢。見表1.1。一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性1.2.2竹節(jié)參總皂昔對血清中GSH-PX、 SOD活性及MDA含量的影響 在本次試驗(yàn)中,TSPJ能明顯提高機(jī)體抗氧化能力,GSH-PX活性和SOD活性明顯提高,對自由基的清除能力加

8、強(qiáng),自由基代謝產(chǎn)物MDA產(chǎn)生量明顯減少,從而對機(jī)體產(chǎn)生較好的保護(hù)作用,這也與其滋補(bǔ)強(qiáng)壯、抗炎、消腫止痛作用相符合。見表2.4。 一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性1.2.3竹節(jié)參總皂苷對小鼠血清中IL-1, TNF-a含量的影響 如前所述,炎癥反應(yīng)中除了前列腺素外,IL-1、 TNF-a等其他炎癥因子也參與炎癥網(wǎng)絡(luò)并且可能發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),吲哚美辛組小鼠血清中IL-1、 TNF-a水平明顯下降,與control組比較,差異性極顯著(P0.001),表明吲哚美辛參與了干擾IL-1、 TNF-a的生成,TSPJ組小鼠血清TNF-a水平下降,差異性顯著(P0.01

9、),對IL-1影響不大,原因不明。一、竹節(jié)參總皂苷抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究前言有效性總結(jié)安全性1.3竹節(jié)參總皂苷對小鼠抗炎作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 結(jié)果表明,竹節(jié)參總皂苷中高劑量均能明顯減輕角叉菜膠所致小鼠右后足的紅、腫等癥狀,與control組比較,50mg/kg TSPJ組在致炎后13h, 100mg/kg TSPJ組在致炎后0.54h能減輕小鼠足腫脹,有明顯差異。 TSPJ三個(gè)劑量組的小鼠血清MDA明顯降低(P0.05),有量效關(guān)系;竹節(jié)參總皂苷能恢復(fù)小鼠血清中GSH-PX、 SOD的活力,提示TSPJ具有減少炎癥反應(yīng)時(shí)自由基生成,抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的作用。 各類細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)中有重要功能,IL-1

10、, TNF -a能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子,增進(jìn)白細(xì)胞與之粘著,也可引起急性炎癥的發(fā)熱,TNF還能促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集和激活間質(zhì)組織釋放蛋白水解酶。本實(shí)驗(yàn)中TSPJ治療組小鼠血清IL-1 、TNF-a水平明顯下降水平下降,因此抑制IL-1、 TNF-a的生成可能是竹節(jié)參總皂苷抗炎作用機(jī)制之一。 綜上所述,TSPJ具有明顯的抗炎功能, 抑制IL-1、 TNF-a的生成可能是竹節(jié)參總皂苷抗炎作用的重要機(jī)制。二、竹節(jié)參總皂苷對CIA大鼠組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變的影晌前言有效性總結(jié)安全性實(shí)驗(yàn)動物：SPF級Wistar大鼠,體重20010g,雌雄各半。2.1 試驗(yàn)方法2.1.1 動物分組及處理 A.正常組

11、:注射液為無菌液體石蠟; B.模型組:制作CIA大鼠模型; C.雷公藤組:制作CIA大鼠模型,按雷公藤甲素計(jì)25g/kg灌胃給藥; D. TSPJ小劑量組:制作CIA大鼠模型,竹節(jié)參總皂苷25mg/kg灌胃給藥; E.TSPJ中劑量組:制作CIA大鼠模型,竹節(jié)參總皂苷50mg/kg灌胃給藥; F.TSPJ大劑量組:制作CIA大鼠模型,竹節(jié)參總皂苷100mg/kg灌胃給藥;2.1.2 動物模型 膠原誘導(dǎo)型（CIA）二、竹節(jié)參總皂苷對CIA大鼠組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變的影晌前言有效性總結(jié)安全性2.2 觀察項(xiàng)目2.2.1關(guān)節(jié)炎病變程度2.2.2足爪容積的測定2.2.3大鼠體重變化2.2.4免疫器官重

12、量檢測2.2.5 ConA誘導(dǎo)的CIA大鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的測定2.2.6 CIA大鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2的誘生與檢測2.2.7 CIA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PM)產(chǎn)生IL-1、 IL-6. TNF-a的含量2.2.8 CIA組織病理組織學(xué)檢測2.2.9關(guān)節(jié)超微結(jié)構(gòu)的觀察2.2.10關(guān)節(jié)滑膜組織中細(xì)胞間粘附分子-1 (ICAM-1)的檢測二、竹節(jié)參總皂苷對CIA大鼠組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變的影晌前言有效性總結(jié)安全性2.3 結(jié)果2.3.1 TSPJ各劑量組AI評分也隨著繼發(fā)性炎癥的產(chǎn)生而升高,但與同期的模型組比較有顯著性差異,提示竹節(jié)參總皂苷具有抗CIA的作用,具有量效關(guān)系,但TSPJ并無快速消除炎

13、癥癥狀的作用,且治療效果比雷公藤治療組稍差。2.3.2使用TSPJ后,各劑量組腫脹程度從縱向來看,也隨著繼發(fā)性炎癥的產(chǎn)生而增加,但與同期的模型組(橫向比較)比較有顯著性差異,提示竹節(jié)參總皂苷具有抗CIA的作用,且具有量效關(guān)系,但治療效果比雷公藤治療組稍差。2.3.3 CIA模型組體重增長速度減慢或停止,與正常組比較,差異有顯著性(P0.05) , 雷公藤治療組體重增長速度也出現(xiàn)減慢現(xiàn)象, TSPJ各組體重增長速度基本正常。2.3.4 CIA模型可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能亢進(jìn); TSPJ都具有使亢進(jìn)的免疫功能恢復(fù)正常的作用,而雷公藤則直接抑制免疫器官的發(fā)育和增長。2.3.5 ConA誘導(dǎo)的CIA大鼠脾臟

14、T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)明顯低于正常對照組，TSPJ給藥可以恢復(fù)CIA大鼠脾淋巴細(xì)胞功能,TPT對CIA大鼠低下的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)沒有明顯影響。2.3.6 TSPJ可使CIA大鼠脾淋巴細(xì)胞低下的IL-2水平恢復(fù)接近正常組大鼠水平,對照藥TPT的作用不顯著。二、竹節(jié)參總皂苷對CIA大鼠組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變的影晌前言有效性總結(jié)安全性2.3.7 TSPJ大中劑量能明顯抑制PM產(chǎn)生IL-l 、 IL-6和TNF-a;提示治療劑量的TSPJ可以不同程度地下調(diào)致炎細(xì)胞因子水平,阻斷炎癥通路的惡性循環(huán)。2.3.8 TSPJ各劑量組病理切片總體情況:皮下軟組織充血水腫減輕,組織間可見少許的炎性細(xì)胞浸潤,關(guān)節(jié)囊

15、結(jié)構(gòu)完整,關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見明顯的纖維蛋白沉積,關(guān)節(jié)滑膜間可見少量炎性細(xì)胞,部分滑膜仍有一定程度的增生,軟骨細(xì)胞未見明顯增生現(xiàn)象,未見明顯骨小梁溶蝕和骨膠原降解現(xiàn)象。2.3.9 TSPJ組:各劑量組的滑膜層細(xì)胞性內(nèi)膜無增厚,細(xì)胞層數(shù)接近正常,細(xì)胞排列均勻,偶見少量淋巴細(xì)胞浸潤,細(xì)胞間未見明顯的膠原纖維增生,超微結(jié)構(gòu)基本正常。2.3.10 TSPJ各劑量組關(guān)節(jié)滑膜ICAM-1表達(dá)數(shù)目、面積總和、積分光密度值及平均黑度值均低于模型對照組,且有著性差異(P0.05或P0.01),說明TSPJ具有降低CIA關(guān)節(jié)炎癥損傷的作用,其總體效果與陽性對照藥TPT無明顯差異。三、結(jié)論前言有效性總結(jié)安全性竹節(jié)參具有以下

16、作用:(1)提高機(jī)體抗氧化能力,減少自由基對炎癥組織的損傷;(2)具有減輕炎癥組織中炎癥介質(zhì)PGE和LTB的作用;(3)使炎癥組織中細(xì)胞因子如IL-1B、 IL-6. TNF-a等明顯減少;(4)減輕炎癥組織中ICAM-1的產(chǎn)生,使炎癥部位不產(chǎn)生粘連;(5)對免疫系統(tǒng)具有雙向調(diào)節(jié)作用,在治療過程中使亢進(jìn)的免疫功能下調(diào)至正常,不會產(chǎn)生類似雷公藤和其他免疫抑制劑導(dǎo)致的免疫功能減退。一、毒性作用類別藥物不良反應(yīng)副反應(yīng)后遺效應(yīng)停藥反應(yīng)毒性反應(yīng)變態(tài)反應(yīng)特異質(zhì)反應(yīng)致癌性致畸性致突變性毒性作用藥源性疾病總結(jié)前言有效性安全性二、臨床前毒理學(xué)評價(jià)主要內(nèi)容急性毒性、長期毒性、特殊毒性、局部用藥毒性、過敏試驗(yàn)、刺激

17、性試驗(yàn)、藥物依賴性試驗(yàn)?？偨Y(jié)前言有效性安全性三、竹節(jié)參皂苷粗提物毒性總結(jié)前言有效性安全性1.1 實(shí)驗(yàn)材料1.1.1 藥物、細(xì)胞與試劑 藥物：竹節(jié)參皂苷提取物 細(xì)胞：小鼠單核巨噬白血病細(xì)胞株RAW264.7 試劑： DMEM 高糖培養(yǎng)基、胎牛血清、一氧化氮(NO)檢測試劑盒1.2 實(shí)驗(yàn)方法1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) RAW264.7 細(xì)胞株的復(fù)蘇：用75%酒精擦拭超凈工作臺,紫外線照射超凈工作臺30 min,從液氮罐中取出凍存管,迅速將凍存管放到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋(37 )中迅速解凍,不斷搖動,待凍存管內(nèi)液體完全溶解(控制在1 min 內(nèi)),取出用酒精棉球擦拭凍存管外壁,再拿入超凈臺內(nèi),將凍存管內(nèi)的液體

18、轉(zhuǎn)入15 mL離心管,加入2 倍體積含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基,800 r/min 離心5 min,棄去上清液,重懸細(xì)胞,接種到培養(yǎng)瓶中,37 、5% CO2 條件下培養(yǎng)。傳代：待細(xì)胞長至90%后,從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞,小心吸出舊培養(yǎng)液,用PBS 清洗,加入3 mL 10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基,用細(xì)胞刮棒沿一個(gè)方向輕輕將細(xì)胞刮下來,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,800 r/min離心5 min,棄去上清液,加入培養(yǎng)液,用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,分裝入培養(yǎng)瓶后,放入培養(yǎng)箱37 、5%CO2條件下培養(yǎng)。凍存：當(dāng)細(xì)胞長至80%90%時(shí),將細(xì)胞收集起來,將胎牛血清與二甲基亞砜(

19、DMSO)按照9 1的比列配制好凍存液。然后每管中加入2 mL 凍存液轉(zhuǎn)移至凍存管中,依次放在4 中40 min、-20 中40 min、-80 過夜,第2 日轉(zhuǎn)移至液氮灌中保存。竹節(jié)參皂苷粗提物不僅毒性小,而且其抗炎效果最好。三、竹節(jié)參皂苷粗提物毒性總結(jié)前言有效性安全性1.2.2 RAW264.7 細(xì)胞活力測定 將RAW264.7 接種于96 孔板,細(xì)胞數(shù)為105 個(gè)/mL,每孔100 L,貼壁后,設(shè)置調(diào)零孔(只有培養(yǎng)液)、正常組、給藥組,給藥濃度為5、10、20、40、80 g/mL,每組4 個(gè)復(fù)孔,24 h 后吸取上清液,在每孔中加入含MTT 的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,然后將上清去掉,每

20、孔加入150 L DMSO,置搖床上低速震蕩10 min,使結(jié)晶充分溶解,在酶聯(lián)免疫檢測儀490 nm 處測量各孔吸光度。1.2.3 RAW264.7 細(xì)胞一氧化氮釋放量測定 將RAW264.7 接種96 孔板,細(xì)胞數(shù)為105 個(gè)/mL,每孔100 L,貼壁后,同時(shí)加入不同提取工藝的竹節(jié)參皂苷(濃度為10、1 g/mL)和1 g/mL LPS 作用,設(shè)為空白組、LPS 組、LPS竹節(jié)參皂苷組,每組4 個(gè)復(fù)孔,24 h 后,取上清液50 L,依次加入Griess和Griess各50 L, 37 恒溫箱中反應(yīng)30 min,在酶聯(lián)免疫檢測儀540 nm 處測量各孔吸光度。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SP

21、SS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)均以xs 表示,采用方差分析進(jìn)行多組間差異比較,以Dunnett-t 檢驗(yàn)比較兩組間均數(shù)的差異。P 0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在炎癥反應(yīng)中,NO 是判斷炎癥最基本的指標(biāo)四、竹節(jié)參提取物對大鼠長期毒性總結(jié)前言有效性安全性 長期毒性動物實(shí)驗(yàn)一般指連續(xù)給藥14d以上。本實(shí)驗(yàn)觀察竹節(jié)參提取物灌胃給予大鼠90、180 d 及恢復(fù)30 d 的毒性反應(yīng)，考察大鼠長期給藥的安全性，為竹節(jié)參臨床用藥安全性評價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.1 實(shí)驗(yàn)材料2.1.1 藥物、動物 藥物：竹節(jié)參 實(shí)驗(yàn)動物： SPF 級SD 大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量( 150 10) g2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.

22、2.1 竹節(jié)參提取物的制備 將竹節(jié)參干燥根莖粉碎后，用60%乙醇回流提取3 次后，回收乙醇，合并濾液，濃縮，得到竹節(jié)參提取物，提取率為25.8%。2.2 .2動物分組及給藥方法 將96 只大鼠按體重隨機(jī)分為4 組，每組24 只，雌雄各半，分別為竹節(jié)參提取物低、中、高劑量( 生藥3 2、6 4、12 8 gkg1 ) 組，相當(dāng)于臨床成人用量的25、50、100 倍，另設(shè)對照組。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，對照組給予蒸餾水，給藥組給予相應(yīng)劑量的竹節(jié)參提取物。給藥體積為1.0 mLkg1 ，每天1 次，每周6 次，連續(xù)給藥180 d，停藥后恢復(fù)30 d 。分別于給藥第90、180 d 以及停藥恢復(fù)30 d，每

23、組各取8 只大鼠， 20%烏拉坦麻醉( 0。7 mL/100 g) 后于腹主動脈取血，分離血清做血液生化指標(biāo)檢測; 同時(shí)取大鼠主要臟器進(jìn)行系統(tǒng)觀察和組織病理學(xué)檢查。四、竹節(jié)參提取物對大鼠長期毒性總結(jié)前言有效性安全性2.2.3 大鼠一般狀況、進(jìn)食量及體重觀察 每天觀察大鼠一般狀況，包括外觀體征、行為活動、食欲、大小便; 每天記錄大鼠進(jìn)食量; 每周稱量大鼠體重1 次。2.2.4 血液學(xué)檢查 大鼠腹主動脈取血后檢測凝血酶原時(shí)間( PT) 、白細(xì)胞計(jì)數(shù)( WBC) 、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)( RBC) 、血紅蛋白( Hb) 、紅細(xì)胞壓積( HCT) 和血小板數(shù)目( PLT) 等。2.2.5 血液生化學(xué)檢查 大鼠腹

24、主動脈取血，3000 rmin1離心10 min 取上層得到血清，用全自動生化分析儀檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶( ALT) 、谷草轉(zhuǎn)氨酶( AST) 、總膽紅素( TBIT) 、總蛋白( TP) 、白蛋白( ALB) 、球蛋白( GLO) 、總膽固醇( TCHO)、葡萄糖( GLU) 、尿素氮( BUN) 等主要生化學(xué)指標(biāo)。2.2.6 系統(tǒng)解剖、臟器指數(shù)檢查和組織病理學(xué)檢查 大鼠處死后，立即取出心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、腦、睪丸、附睪、子宮、卵巢、胸腺、腎上腺，稱重后計(jì)算臟器指數(shù)。另取胃、十二指腸、甲狀腺、胰腺、附睪、前列腺，與心臟等組織一同放入4%多聚甲醛溶液中固定24 h 后，轉(zhuǎn)入70%乙醇中

25、，進(jìn)行脫水、包埋，組織切片、HE 染色，于光鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)以均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差( x s) 表示，數(shù)據(jù)分析采用SPSS17 0 統(tǒng)計(jì)軟件，以單因素方差分析( one-way ANOVA) 并進(jìn)行多組間差異比較，行Dunnett-t檢驗(yàn)，暫未考慮調(diào)整顯著性水準(zhǔn)。四、竹節(jié)參提取物對大鼠長期毒性總結(jié)前言有效性安全性2.3 結(jié)果2.3.1 對大鼠一般狀況、進(jìn)食量和體重的影響 給藥期和恢復(fù)期間，各組動物外觀正常，活動自如，各劑量組大鼠體重、攝食量和糞便等均未見明顯異常。大鼠體重呈穩(wěn)定增長趨勢，與對照組比較，各劑量組大鼠無顯著性差異( 見表1) 。結(jié)果提示竹節(jié)參提取物對大鼠一般狀況、進(jìn)食量和體重的進(jìn)食量和體重?zé)o明顯影響。四、竹節(jié)參提取物對大鼠長期毒性總結(jié)前言有效性安全性2.3.2 對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2 所示，給藥期間，與對照組比較，竹節(jié)參提取物中、高劑量組WBC 和HCT 均明顯增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 0.0