無菌檢驗方法驗證

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上1. 目的（PURPOSE）規(guī)范藥品質量檢查方法的管理，確保藥品所用無菌檢驗方法的可行性、檢驗結果的可靠性。2. 適用范圍（SCOPE）適用于藥品的無菌檢驗方法驗證。3. 職責（RESPONSIBILITY）質量控制部微生物組負責4. 關鍵詞（KEY WORDS）無5. 定義（DEFINITION）無6. 程序（PROCEDURE）6.1 驗證的原理6.1.1驗證試驗方案的設計需要滿足兩個方面的要求：1）在檢測前樣品的預處理方式能有效抵消（或中和）產品中抑菌性；2）樣品的預處理方式和檢測過程以及培養(yǎng)條件等均不會影響樣品中的微生物生長。6.1.2 對同類產品三個不同批號

2、樣品進行微生物挑戰(zhàn)試驗后，通過比較三批樣品中挑戰(zhàn)菌株的恢復生長結果來評價整個檢驗方法的準確性、有效性和重現(xiàn)性。6.2 驗證試驗用供試品的制備與檢查6.2.1 樣品組（A組）：用適當?shù)姆椒ㄖ泻蜆悠?，再向其中接入少量的挑?zhàn)微生物（接種量控制在10100cfu之間），按照常規(guī)檢測程序和培養(yǎng)條件檢查挑戰(zhàn)微生物的恢復生長情況。6.2.2 蛋白胨對照組（B組）：除了用A溶液（0.1%蛋白胨溶液）替代實際樣品外，中和方式、檢測程序和培養(yǎng)條件等均與樣品組（A組）相同。6.2.3 陽性對照組（C組）：不經中和處理，將微生物挑戰(zhàn)菌株直接接種于培養(yǎng)基培養(yǎng)，接種量與前兩組相同，均在10100cfu之間。6.3 驗證用

3、挑戰(zhàn)微生物6.3.1用于驗證試驗的挑戰(zhàn)微生物要具有廣泛代表性，至少包括需氣菌、厭氧菌、兼性菌等，所選用的菌株要基本上涵蓋樣品中可能存在的各類微生物。在驗證中常選用的微生物有金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉等。6.3.2 挑戰(zhàn)微生物的培養(yǎng)條件及貯存條件需按QC-6.2菌種管理進行，以確保各代微生物細胞的生理狀態(tài)保持穩(wěn)定一致。6.3.3驗證時，選擇的挑戰(zhàn)微生物傳代次數(shù)不應超過5代，并且詳細記錄所用菌株的來源、傳代次數(shù)。6.4菌種6.4.1 驗證試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術，

4、以保證試驗菌株的生物學特性。 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) 26003或ATCC 6538枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) CMCC(B) 63501或ATCC 6633大腸埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B) 44102或ATCC 8739 梭狀芽胞桿菌(Clostridium sporogenes) CMCC(B) 64941或ATCC 19404白色念珠菌(Candida albicans) CMCC(F) 98001或ATCC 10231 黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F)

5、 98003或ATCC 164046.4. 2菌液制備(1)接種金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌、大腸桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中, 接種梭狀芽胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）中，于32.5培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1824小時。 (2)接種白色念珠菌新鮮培養(yǎng)物至胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中，于24.0培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2448小時。（3）接種黑曲霉新鮮培養(yǎng)物至胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中，于24.0培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)57天。(4)上述培養(yǎng)物用0.9無菌氯化鈉溶液制成每lmL含菌數(shù)為10l00cfu的菌懸液；因此在制備菌液時，需要標定菌液濃度，可以采用麥氏比濁管比濁法或直接用平皿稀釋法。（5）其

6、中金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、和梭狀芽胞桿菌接種于硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）；而黑曲霉、白色念珠菌和枯草芽孢桿菌接種于胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）。6.5 驗證試驗條件與藥品無菌檢查試驗相同，可參照QC-4.3無菌檢查法。6.6 驗證用的檢查方法無菌檢查首選薄膜過濾法，若樣品難過濾或不能用薄膜過濾法的情況下，可以采用直接接種法。6.6.1 薄膜過濾法6.6.1.1驗證產品對薄膜過濾法的抑菌性與實際的無菌檢查相同，在同一型號的濾筒內過濾規(guī)定量的供試品。若不能直接過濾的樣品，可選擇適宜的方法進行產品的預處理，即制備供試液。6.6.1.2取一定量的沖洗液對濾膜進行沖洗，每次沖洗

7、量不超過200ml，最多沖洗次數(shù)不超過5次。6.6.1.3 在最后一次沖洗液中加入10100cfu的挑戰(zhàn)微生物，并將相應的培養(yǎng)基加入到裝有濾膜的濾筒內。6.6.1.4 將所選的挑戰(zhàn)微生物逐一加到相應的培養(yǎng)基進行驗證，并將裝有培養(yǎng)基的濾筒置于適當?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過7天。6.6.1.5 可接受標準1）如果樣品組中培養(yǎng)基培養(yǎng)結果有明顯的微生物生長，并且與陽性對照組的培養(yǎng)結果相似，則無菌檢查試驗中務必要過濾與驗證相等量的產品、沖洗液，沖洗次數(shù)及使用等量的培養(yǎng)基。2）如果與陽性對照組相比，樣品組培養(yǎng)基內微生物生長現(xiàn)象不明顯或不生長，說明該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用。可以增加沖洗液，更換濾膜

8、并使用中和劑來重新進行驗證。3）如果已沖洗了5次，并且每次沖洗液體積達到500ml，仍無法中和濾膜上的殘余抑菌性物質，那么在無菌檢查試驗中就采用此沖洗液體次數(shù)和沖洗量作為最終沖洗方法。6.6.2 直接接種法6.6.2.1 驗證產品對直接接種法的抑菌性時，選擇合適的挑戰(zhàn)微生物。6.6.2.2向每種無菌檢查用的培養(yǎng)基內接入挑戰(zhàn)微生物，每瓶的接種量控制在10100cfu之間，參照QC-6.2菌種管理確定培養(yǎng)基用量。6.6.2.3 按無菌檢查要求，向含有微生物的培養(yǎng)基中接入規(guī)定量的供試品，另外留一瓶作為陽性對照。6.6.2.4 將所選用的挑戰(zhàn)微生物及相應的培養(yǎng)基逐一進行驗證，并將培養(yǎng)基瓶（管）置于適當

9、的溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過7天。6.6.2.5 可接受標準1）如果與陽性對照相比，樣品組中有明顯的生長現(xiàn)象，說明該方法可行，則在無菌檢查試驗中要與驗證試驗條件一致。2）如果與陽性對照相比，樣品組中微生物生長現(xiàn)象不明顯，說明產品具有抑菌性?？墒褂猛聹?80、卵磷脂、十四烷酸異丙酯等中和劑來消除抑菌效果。進行再驗證。3）如果中和劑不能消除抑菌作用，可適當增加培養(yǎng)基體積來消除抑菌作用。若培養(yǎng)基體積增加到2000ml仍無法消除抑菌作用，則在無菌試驗中就使用2000ml培養(yǎng)基，但對醫(yī)療器械而言，可以據器械的具體體積來確定培養(yǎng)基用量。6.7 驗證結果評價 驗證結束后，需要對整個方法驗證的試驗過程和結果分析進行評價。6.7.1 對每種挑戰(zhàn)菌株而言，每次驗證試驗數(shù)據的有效性和合理性。6.7.2 驗證試驗數(shù)據說明，產品預處理方式、檢驗用器具、材料和培養(yǎng)條件等的合理性。6.7.3 驗證試驗數(shù)據說明該產品的無菌檢驗方法準確、有效、可靠。6.8 驗證試驗報告 按驗證試驗報告的統(tǒng)一格式進行填寫。7. 7.背景資料（BACKGROUND INFORMATION）引用的SOPreference SOPQC-4.3無菌檢查法QC-6.2菌種管理引用的參考文獻reference document中華人民共和國藥典2005年版增補版附錄