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文檔簡介
1、中國畜牧獸醫(yī)2015,42(1):0234-0244ChinaAnimalHusbandry&VeterinaryMedicinedoi:10.16431/ki.1671-7236.2015.01.037禽大腸桿菌病疫苗研究進(jìn)展馬興樹(河北工程大學(xué)農(nóng)學(xué)院分子生物學(xué)實驗室,邯鄲056021)摘要:致病性大腸桿菌(APEC)是引起家禽多種腸外疾病如氣囊炎、心包炎、肝周炎、蜂窩織炎及敗血癥的主要人畜共患病原菌。在過去的數(shù)十年間,試驗了多種不同類型的疫苗用于本病的控制。鑒于APEC血清型較多且不同血清型之間缺乏交叉免疫保護(hù),故生產(chǎn)上使用的APEC疫苗研究進(jìn)展緩慢.作者對不同類型APEC疫苗進(jìn)行了綜述并
2、提出未來的研究方向。關(guān)鍵詞:禽大腸桿菌病;滅活疫苗;弱毒疫苗;亞單位疫苗;廣譜疫苗;未來疫苗中圖分類號:S858.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號:1671-7236(2015)01-0234-11ResearchProgressonVaccinesofAvianColibacillosisMAXing-shu(LaboratoryofMolecularBiology,CollegeofAgriculfure,HebeiUniversityofEngineering,Handan056021,China)Abstract:AvianpathogenicEscherichiacoli(APEC)ison
3、eofthemostimportantzoonoticpathogensofanumberofextra-intestinaldiseasesinthepoultryindustry.includingairsacculitis,pericarditis,perihepatitiscellulitisandsepticemia.Varioustypesofvaccinehavebeentestedoverthepastfewdecadesforcontrolofaviancolibacillosis.Unfortunately,vaccinesusedinpoultryproductionma
4、ketheslowprogressoftheresearchestodate,asAPECsareserotypicallydiversewithvaccinesfailingtocross-protectionagainstheterologouschallenge.HereinwereviewthedifferentcategoriesofAPECvaccinesthathavebeentestedandprovideaninsightintothefutureofAPECvaccines.Keywords:aviancolibacillosis;inactivatedvaccine;at
5、tenuatedvaccine;subunitvaccine;broadspectrumvaccine;futurevaccine收稿日期:2014-09-16基金項目:河北省教育廳科技支撐計劃項目(13226602D)作者簡介:馬興樹(1963-),男.河北張家口人,博士,教授,主要從事動物傳染病防治及病原微生物分子生物學(xué)的教學(xué)與研究工作通信作者:馬興樹E-mail:maxinjzshu肉大腸桿菌病(aviancolibacillosis,AC)是由禽致病性大腸桿菌(avianpathogenicEscherichiaco-仃,APEC)引起雞、火雞及其他禽類急性、全身性腸外感染的總稱,臨床
6、上以心包炎、肝周炎、氣囊炎、蜂窩織炎、敗血癥及輸卵管炎、腹膜炎、雛雞臍炎和腫頭綜合征等較為常見,是目前導(dǎo)致世界養(yǎng)禽業(yè)特別是肉雞業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最為嚴(yán)重的細(xì)函性傳染病。感染APEC的禽群死亡率增高、胴體廢棄率增加、生長率及飼料轉(zhuǎn)化率下降,有研究結(jié)果表明.APEC與其他腸外致病性大腸桿菌(ExPEC)如新生兒腦膜炎大腸桿曲(NMEC)及尿道致病性大腸桿留(UPEC)具有相似的毒力基因及致病能力,是重要的食源性人畜共患病原菌此外,APEC亦是通過其攜帶質(zhì)粒和遺傳物質(zhì)交換而傳播耐藥基因的主要來源。多年的生產(chǎn)實踐表明,通過消除易感因素或通過藥物防控禽大腸桿菌病效果甚微,且隨著耐藥菌株不斷產(chǎn)生及藥物殘留問題的增
7、加,禽產(chǎn)品質(zhì)甌安全愈來愈受到人們的重視。因此,利用非抗生素方法防控APEC將是未來發(fā)展的必然趨勢,其中接種疫苗是有效防控禽大腸桿菌病發(fā)生和流行、減少禽產(chǎn)品immunizaionJ.AviDis1985,29:1108-1117.18HellerED.LeitnerH,DrabkinNctal.PassiveimmunisationofchicksagainstEscherichiacoliCJ.AvianPathol,199049:345-354.19:Dho-MoulinM,FairbrotherJM.AvianpathogenicEscherichiacoli(APEC)J.VetRes1
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22、ongEsch-erichiucoliisolatesfromapparentlyhealthybirdsandbirdswithcolibacillosisJ.AviDis2000.44:23-33.!49R(driguez-SiekKE,GiddingsCW.DoctkottC,etal.CharacterizingtheAPECpathotypeJJ.VetRes.2005,36:241-256.50 LynneAM.FoleySLNolan.K.ImmuneresponsetorecombinantEacherichiacoliIssproteininpouhryJ】.AviDis.2
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31、5類疫苗進(jìn)行簡要闡述,以期為禽大腸桿菌病的防控提供參考。1滅活疫苗1.1理化方法滅活疫苗大腸桿菌滅活疫苗可通過福爾馬林、乙醇、丙酮、加熱、超聲波裂解及輻射等理化方法滅活制備。1957年,Gross率先使用福爾馬林滅活A(yù)PEC02:K1和078:K80免疫接種肉仔雞,然后用02或078菌株進(jìn)行攻毒以評估疫苗對同源和異源菌株的保護(hù)效力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)078對同源萌株(078)比對異源菌株(。2)攻毒有更好的保護(hù)力,而用()2疫苗免疫的仔雞對2種血清型攻毒菌株無保護(hù)力。隨后,Deb等分別通過乙薛、丙酮、福爾馬林、加熱滅活及福爾馬林滅活/明磯沉淀方法對()78:K80大腸桿菌制備疫苗,經(jīng)皮下、肌肉和腹腔內(nèi)接
32、種3周齡肉仔雞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)福爾馬林滅活/明磯沉淀疫苗組可抵抗同源菌株肌肉攻毒至6周齡。同樣,與078:K80疫苗相比,用APEC153株02:K1制備的疫苗免疫仔雞,盡管能誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的0和K凝集素,但對同源菌株攻毒缺乏保護(hù)。因此,只通過對O和K抗原的抗體應(yīng)答并不能確定APEC疫苗的效力,因為在相同的抗原(02:K1)中加入弗氏完全或不完全佐劑后皮下接種23周齡的仔雞則可獲得保護(hù)。相關(guān)的研究也證實福爾馬林滅活的O1:K1油佐劑疫苗經(jīng)皮下接種4和6周齡或5和7周齡雞,2周后用3X106CFU的APEC氣囊攻毒,結(jié)果只對同源菌株保護(hù)59七鑒于此,Schwartz等眄制備了多價(01、02和078)
33、油乳劑疫苗分別于1和14日齡2次肌肉接種仔雞后,對3種血清型菌株攻毒均可產(chǎn)生明顯的保護(hù),但對異源APEC麻株攻毒無效,故APEC疫苗缺乏通用性。雖然滅活疫苗只對同源菌株提供保護(hù),但攻毒途徑及滅活方法亦會影響試驗結(jié)果。如用加熱或福爾馬林滅活的078:K80:H9肌肉免疫1和2周齡的火雞,10d后用同源菌株靜脈攻毒,結(jié)果全部免疫火雞均出現(xiàn)APEC感染病變回。Melamed等】通過超聲滅活02:K1和078:K80大腸桿菌并加入氫氧化鋁佐劑制備疫苗,皮下接種10日齡雛雞,10d后用同源和異源菌株皮下攻毒,通過死亡雞數(shù)和出現(xiàn)APEC病變雞數(shù)確定保護(hù)效果,結(jié)果表明02:K1疫苗對同源(02:K1)和異源
34、(078-K80)菌株攻毒提供保護(hù),而078:K80疫苗對異源(。2:K1)菌株攻毒無保護(hù)。經(jīng)超聲滅活的疫苗,其保護(hù)效果也優(yōu)于加熱、福爾馬林或輻射處理滅活的疫苗,其保護(hù)程度與攻毒時ELISA檢測的抗體滴度呈正相關(guān)。進(jìn)一步將超聲滅活的()2:K1制備膜泡(membranevesicles)疫苗免疫火雞,則可獲得對同源菌株攻毒保護(hù)。此種疫苗不僅產(chǎn)生ELISA抗體,同時也刺激補體系統(tǒng)和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的殺的活性。大腸桿菌J5是一株遺傳穩(wěn)定、粗糙型突變株,缺乏尿苜二磷酸半乳糖4差向異構(gòu)酶(UDP-半乳糖-4-差向異構(gòu)酶,催化菌體側(cè)鏈連接核心抗原的酶),對雛雞及雞胚無致病性5偵。將其80P水浴加熱滅活1h
35、(6X108CFU/mL),分別靜脈接種5、14和20日齡肉仔雞各0.25.0.5和1mL,28日齡靜脈攻毒078菌株(6X108CFU/mL)后連續(xù)觀察7d。結(jié)果表明接種滅活J5的仔鴻全部健活,剖檢亦無肉眼可見病變,其所產(chǎn)生的血清抗體與078具有交又反應(yīng),這可能與J5細(xì)胞壁側(cè)鏈不完整而使核心抗原簇暴露有關(guān)。事實上,所有血清型大腸桿菌的核心抗原在化學(xué)結(jié)構(gòu)及免疫學(xué)上都相似,這為開發(fā)廣譜大腸桿菌滅活疫苗指明了方向由于APEC滅活疫苗通常需要注射接種,同時鑒于母源抗體可傳遞給子代,故免疫種雞即可使仔雞獲得被動保護(hù),克服了規(guī)?;u場單個注射接種仔雞的弊端。1985年,Rosenberger等:首次用福
36、爾馬林滅活的02.078和035APEC制備油乳劑疫苗于20周齡1次或20和25周齡2次免疫種母雞,微量凝集試驗檢測表明被免種雞的特異抗體升高。對被免和未免種雞孵出的仔雞氣管攻毒同源菌株表明母源抗體可保護(hù)仔雞減少出殼后死亡率和損傷長達(dá)2周。Chaffer等亦觀察到火雞抗APEC的母源抗體出殼時滴度高,其后逐漸下降至14日齡低滴度。種雞亦獲得了類似結(jié)果,即出殼后仔雞至21日齡時檢測不到APEC抗體口3:。盡管如此,但出殼21d后的仔雞/火雞必須獲得保護(hù),因為此日齡段是易感APEC的高峰期購。1.2生物方法滅活疫苗(菌蛻疫苗)菌蛻(bacterialghosts,BGs)作為新型基因滅活苗,具有與
37、活菌形態(tài)結(jié)構(gòu)一致,但無活菌的致病作用并可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫、細(xì)胞免疫及黏膜免疫。據(jù)Jalava等(2。)介紹用制備的大腸桿菌078:K80菌蛻經(jīng)口服、肌肉注射和滴鼻免疫1日齡維雞,免疫后21d用同源菌株攻毒。盡管全部免疫接種雞發(fā)病,但肌肉和口服免疫組的死亡率明顯降低,自心臟和肝臟回收攻毒菌株也明顯減少,而滴鼻免疫組的死亡率與對照組相同。因此,1日齡雛雞口服大腸桿078:K80菌蛻疫苗優(yōu)勢明顯。Mayr等2。用不添加任何佐劑的腸出血性大腸桿菌(0157:H7)菌蛻疫苗單次口服免疫小鼠,可誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞與體液免疫。免疫小鼠后第55天用異源腸出血性大腸桿萌進(jìn)行致死性攻毒,其免疫保護(hù)率為86%;如于2
38、8d進(jìn)行第2次加強免疫,則小鼠的免疫保護(hù)率可高達(dá)93.3%,而對照組存活的小鼠分別為26.7%和30.0%。因此,利用單劑量大腸桿菌菌蛻疫苗免疫的動物可獲得良好的免疫保護(hù),其交叉免疫保護(hù)效果也優(yōu)于其他疫苗。綜上所述,滅活疫苗的效力不僅與制苗用APEC菌株血清型、佐劑類型、制苗方法及接種途徑和次數(shù)有關(guān),同時還受免疫雞日齡的影響。目前研發(fā)的APEC滅活疫苗見表1L22o2弱毒疫苗2.1自然分離弱毒株最早使用的禽大腸桿菌病弱毒疫苗為活的無毒株或致弱毒株。1980年,Arpg用APEC()78:K1活疫苗肌肉或氣管滴入免疫7和14日齡火雞,24日齡時用108CFU同源菌株靜脈攻毒,與未免疫組比較,7管
39、接種組的死亡率降低了88%、肌肉接種組降低了77%。雖然免疫組降低了死亡率,但攻毒后24d存活的多數(shù)火雞表現(xiàn)有敗血性多滑膜炎。1994年,F(xiàn)rommcr等田們用一株分離白肉仔雞糞便的活的含菌毛非致病性菌株BT-7(血清型064)分別對于1、7、】4和21日齡肌肉免疫的肉雞,28日齡攻毒,結(jié)果發(fā)現(xiàn)14或21日齡免疫較1或7日齡免疫的仔雞保護(hù)更堅強.其原因可能是由于母源抗體干擾和/或免疫器官不成熟而對抗原刺激不能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。經(jīng)不同途徑(肌肉、噴霧、飲水)和接種次數(shù)(1或2次)免疫肉仔雞,結(jié)果表明,21日齡免疫后1周肌肉攻毒O1:K1、O2:K1和()78:K80至少保護(hù)2周。在7和21日齡
40、經(jīng)飲水或肌肉途徑2次免疫的仔雞與在21齡經(jīng)相同途徑1次免疫的仔雞,其保護(hù)率相當(dāng),而噴霧免疫的仔雞缺乏明顯的保護(hù)mJ。2.2化學(xué)致弱毒株1985年.Nivas等板將口丫呢橙處理過的一種光滑型耐鏈毒素078菌株作為疫苗(24h肉湯培養(yǎng)物)氣霧免疫事先暴露于氨氣和不暴露氨氣的2周於火雞,結(jié)果表明未暴露氛氣組的火雞可有效清除肺臟和其他內(nèi)臟的細(xì)幽,而暴露于氛氣組的火雞與對照組相比無顯著差別。同年,Naveh等26】利用亞硝酸增殖含有LPS核心(LPS核心為多數(shù)腸道致病菌共有,其抗體可提供廣譜保護(hù))但不能生物合成。抗原多糖的大腸桿菌K-12粗箱型突變株(LR2).將此突變株給雞接種IOCFU亦無毒力,但接
41、種雞可通過激活巨噬細(xì)胞和吞噬細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生非特異性免疫。此疫苗可經(jīng)7霧和飲水及噴霧等不同方法進(jìn)行群體免疫。用單劑量免疫535日齡的雛雞.可對()2和()78氣管攻毒提供保護(hù)達(dá)20d02.3原生質(zhì)體融合致弱毒株黃青云等28選取常見的()2和()78APEC菌株,分別以氟哌酸和氯霉索誘導(dǎo),培育成遺傳性穩(wěn)定的耐藥標(biāo)記弱毒菌株O2(NorChr)和O78(ChlNorD,進(jìn)一步以其作親本.通過原生質(zhì)體融合技術(shù)培育成功具有雙抗藥性和雙抗原性的融合雙價弱毒菌株O2/O78(orChV),通過AA雞安全試驗及免疫試驗證明其安全,免疫原性優(yōu)良。提取其外膜蛋白(OMPs)分別免疫小鼠和雞均產(chǎn)生對()2和()78良
42、好的同源及異源交叉保護(hù)為研究通用安全的APECOMPs疫苗提供了科學(xué)依據(jù)。2.4基因工程致弱毒株通過基因工程技術(shù)可精確地將APEC中參與代謝或致病基因敲除而制備疫苗是H前疫苗研究的新領(lǐng)域。Kwaga等網(wǎng)將APEC。2菌株編碼精氨酸和嗜呢代謝作用的酶基因carAB敲除制備突變株弱毒疫苗,將此突變株5X10*和7X1O5CFU)皮下接種1口齡雛雞證明安全??诜庖?周齡火雞后1周,可抵抗出血性腸炎病毒A和()2野生菌株的聯(lián)合氣管攻毒。免疫火雞未觀察到任何病變,而未免疫火雞攻毒后的死亡率和病變率分別為40%和52%,但此疫苗對異源菌株攻毒或肉雞使用效果如何未見后續(xù)報道。Peighambari等通過類
43、似的途徑構(gòu)建了APEC02和()78cyacrp突變株。通過單劑峨和雙劑量噴霧免疫肉仔雞以確定其安全性、免疫原性和效力。通過對14和21日齡肉仔雞噴霧20液滴野生型大腸桿菌、突變株(左cya/crp)或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)確定疫苗的安全性和免疫原性。02和078突變株免疫接種雞不引起死亡或肉眼病變。接種突變株和野生菌株的肉雞血清IgG和氣囊洗液IgA水平顯著高于PBS對照組。用()2或免疫日齡Ageofimmunization攻毒Challenge保護(hù)效果Effect,表1禽大腸桿菌病滅活疫苗Table1Inactivatedvaccinesofaviancolibacillosisa,+
44、,表示保護(hù),一,表示不保護(hù);b,加入弗氏完全或不完全佐劑的2種組方具有保護(hù)性;c,攻推免疫0雞孵出的輜雞疫苗株血清型Vaccinestrainserotype滅活方法Inaclivatcdmethod接種途徑Routeofdelivery初免(d)1st二免(d)2nd途徑Route日齡(d)Age同源攻禰Homologouschallenge異源攻毒Heterologouschallenge078K80乙醇、丙咽、福爾馬林、加熱皮下、肌肉、腹腔21未進(jìn)行肌肉42、49、56+b02:KI乙靜、丙酮、福爾馬林、加熱皮下14.21未進(jìn)行皮下35或42+b078K80加熱、福爾馬林肌肉714靜豚2
45、4+未試驗O1KI福爾馬林頸部背側(cè)皮F28或3542或49后胸氣囊56+()1/02/078福爾馬林肌肉114未試驗28+未試驗()2:KI超聲、加熱、福爾馬林、輻射皮下10未進(jìn)行皮下20+十()78:K80超聲、加熱、福爾馬林、輻射皮下10未進(jìn)行皮下20+J5-加熱靜脈5、14、20未進(jìn)行靜脈28可能有效可能有效02:KI超聲皮下、肌肉未進(jìn)行未試驗皮下未進(jìn)行-未進(jìn)行()2/035/078福爾馬林皮下。140175氣管14-078K80菌蛻肌肉、口服1來知21+未進(jìn)行a,4.Indicatedprotective.Indicatednotprotective;b,Bothformulaswer
46、eprotectiveonlywhenincorporatedwithFreundscompleteorincompleteadjuvantjc.Henswereimmunizedandhatchedchickswerechallenged078疫苗株免疫14d和用02疫苗株免疫10和14d的肉仔雞,免疫后10d用原始毒株攻毒。結(jié)果免疫組和對照組之間局部IgA和IgG,血清IgG應(yīng)答無顯著差異。用02而非()78疫苗株免疫的雛雞氣囊損傷等級顯著低于未免疫組。通過精準(zhǔn)缺失突變技術(shù).Kariyawasam等狗構(gòu)建了3種生物合成基因突變株,即RalE(編碼LPS合成所需的尿嘵噬核甘二磷酸鹽半乳糖差向
47、異構(gòu)酶)、編碼瞭吟生物合成所需的腺甘酸琥珀酸合成酶)及。A基因(編碼對氨基苯甲酸、芳香族氨基酸和葉酸生物合成的中間產(chǎn)物-分支酸)。用此3株突變株氣霧免疫1和14日齡的推雞表明安全、無毒并能保護(hù)同源菌株氣霧攻毒,但對異源菌株攻毒無效,其中株不及其他兩株有效。Salchi等33也證實“A突變株()78:K80免疫1和】4日齡惟雞不能產(chǎn)生抗體應(yīng)答,對同源和異源菌株攻毒無效并導(dǎo)致試驗雞氣囊、肝臟和心包的病理變化,旦免疫的肉雞與對照組相比體重減輕。新近的研究表明疫苗是通過細(xì)胞介導(dǎo)免疫而非循環(huán)抗體獲得保護(hù)S此外,Nagano等功通過等位基因交換構(gòu)建了基因缺失疫苗,該疫苗株失去r色氨酸脫氨酶活性、缺乏吸附剛
48、果紅的能力、不能發(fā)酵除葡萄糖和L-果膠糖以外的糖類,亦不攜帶4種已知的毒力基因(iss、ish、cvaA、papC)。通過噴霧和點眼及胚內(nèi)接種可激發(fā)對野生毒力型APEC()78攻毒的有效免疫應(yīng)答。特別是經(jīng)此疫苗免疫后,通過靜脈攻毒,與對照組相比,死亡率、臨床和器官損傷等級及攻毒偏株回收率均降低。其優(yōu)點是接種19日齡的雞胚,其出錐率及勺隹雞存活率不受影響,雖然自免疫雛雞回收到了少量的攻毒優(yōu)株。這種接種途徑對家禽業(yè)逐漸廣泛使用的胚胎免疫具有更大價值。令人不可思議的是很多在試驗條件下證明安全有效的APEC弱毒疫苗株為何沒有商品化?其原因除存在非特異性突變和毒力返強的可能外,或許與其“毒力太弱”以至于
49、不能在體內(nèi)存活足夠長的時間以激發(fā)堅強的免疫應(yīng)答有關(guān)。即使已商品化的疫苗PoulVac仍需進(jìn)一步在田間條件下觀察。然而,與必須進(jìn)行個體免疫的滅活疫苗相比,弱毒疫苗更適用于現(xiàn)代規(guī)?;嬷硤鋈后w免疫的需求,這或許是吸引眾多研究者深入研發(fā)此類疫苗的關(guān)鍵所在。目前研發(fā)的APEC活疫苗見表2223亞單位疫苗3.1菌毛疫苗抗菌毛抗體可阻止APEC黏附宿主細(xì)胞表面口們。據(jù)此,Gyimah等丈研發(fā)并試驗了抗雞大腸桿前病的Ol:K1菌毛油乳劑疫苗。疫苗含南毛蛋白116或29pg,分別在4和6周齡皮下注射2次。8周齡時后胸氣囊內(nèi)注射同源APEC攻毒。與未免疫對照雞相比,免疫雞死亡率、病變損傷程度及內(nèi)臟細(xì)萌回收率顯著
50、下降。隨后.該組作者又研發(fā)了包括3種最常見血清型(01.02和078)在內(nèi)的多價菌毛疫苗,每種血清型菌毛蛋白為180gW、該疫苗經(jīng)皮下接種4和6周齡雞,2周后攻毒,與對照雞相比,免疫雞對()1、。2和078菌株所致的損傷等級顯著降低。vandenBosch39研究了自雞大腸桿菌病分離并于瓊脂培養(yǎng)基上生長的APEC萌株Fl1菌毛的表達(dá)。對大量收集的菌株篩查結(jié)果表明所有檢測的APEC.78%的菌株及屬于禽大腸桿鑿病中最常見的血清型()18K1.O2:K、035和078:K80)的96%APEC菌株均表達(dá)F11菌毛。F11菌毛用于免疫肉種母雞,其抗體應(yīng)答通過ELISA檢測。免疫母雞孵出的仔雞于3周齡
51、用()1:K1.O2:Kl、()15:K14.O35:K-或078:K80APEC氣囊內(nèi)攻毒,結(jié)果高達(dá)85%的雛雞獲得保護(hù)。用靜脈接種制備的F11家兔抗血清靜脈被動免疫接種3周齡肉仔雞,隨后氣囊內(nèi)注射同源或異源APEC攻毒。除()1:K1外,雛雞對其他所有血清型都獲得保護(hù)。Kariyawasam等如用PapG或FimH菌毛黏附索免疫肉雞純化的IgY肌肉注射11日齡肉仔煽,3d后免疫雞用同源078APEC(純化菌毛蛋白用曲株)或異源APEC()1和()2)氣囊內(nèi)攻毒以評估被動接種菌毛黏附素抗體的效力。接種抗PapGIgY的雛雞對同源和異源APEC攻毒獲得保護(hù).而接種抗FimHIgY的雛雞對同源和
52、異源APEC攻毒不能保護(hù)。Vandemaele等叫將PapGII等位片段肌注1C日齡維雞后可誘發(fā)強烈的體液IgY應(yīng)答。24d后,用2.7X10,CFU/mL培養(yǎng)物氣囊或噴霧攻毒,其保護(hù)與非免疫對照組比較無顯著差異。由于未對呼吸道黏膜表面IgA進(jìn)行檢測,故很難得出PapG等位片段無保護(hù)的結(jié)論,因為非正統(tǒng)的投給方法卻可誘導(dǎo)產(chǎn)生黏膜免疫。3.2英膜多糖細(xì)前的莢膜多糖能抵抗巨噬細(xì)胞的吞噬作用,從而影響其他表面抗原的免疫應(yīng)答。故可利用莢膜多糖制備亞單位疫苗免疫雞,產(chǎn)生抗體以消除其抗吞噬作用,達(dá)到防御大腸桿菌侵襲的目的。雖然國內(nèi)外均有報道,終因其制備成本高、效果一般,故實際應(yīng)用價值不大。Table2Liv
53、eattenuatedvaccinesofaviancolibacillosis疫苗株Vaccinestrain接種途徑Routeofdelivery免疫日齡Ageofimmunization攻毒Challenge保護(hù)效果Effect初免(d)1st二免(d)2nd途徑Route日齡(d)Age同源攻毒Homologouschallenge異源攻毒Heterologouschallenge經(jīng)町呢橙處理的078前株Acridineorange-treatedpathogenicE.coli078噴霧14未進(jìn)行噴霧28未試驗未修飾的非致病性菌株078Unmodified,nonpathogenic
54、E.coli078氣管714靜脈28+未試驗氧化氮處理的K12(LR-2)Nitrousoxide*treatedE.coliK12(LR-2)氣霧、飲水5-35未進(jìn)行氣管25未進(jìn)行+未修飾的非致病性菌株(BT-7)Unmodified,nonpathogenicE.coli(BT-7)肌肉14或21未進(jìn)行氣霧28未進(jìn)行十02/078(NorrChlr)肌肉10未進(jìn)行肌肉24十十carAB口服28未進(jìn)行氣管32未試驗cyacry*氣霧、口服114氣管284-未試驗cyacry氣霧14未進(jìn)行嘖霧24+未試驗galE氣霧114噴霧21十purE氣霧114噴霧21aroA霧114噴霧21+氣霧、點眼
55、432靜脈46+未試驗鼠傷寒沙門氏幽突變株表達(dá)的APEC抗原*cyacry,SalmonellatyphimuriummutantexpressingAPECantigens3.3鐵調(diào)控外膜蛋白(IROMPs)用家兔抗大腸桿菌Olli73ku鐵腸桿菌素受體蛋白的多克隆抗血清篩檢的17株致病性和非致病性大腸桿菌中,發(fā)現(xiàn)腸菌素(enterobactin)受體的分子質(zhì)量和抗原特性高度保守3】。這種特性使得腸菌素受體或其他IROMPs可作為潛在的APEC候選疫苗株。用家兔制備的抗IROMPs(自大腸桿菌078:K80:H9提?。┭屐o脈接種被動免疫18日齡火雞,2h后,腹氣囊接種同源大腸桿菌(1X106或2X10。CFU)攻毒,接種火雞獲得保護(hù),無死亡率,而注射正常家兔血清和生理鹽水的對照組死亡率為此外,免疫組于攻毒后96h的菌血癥降低,氣囊回收大腸桿菌減少及攻毒火雞肉眼病變程度減輕。氣菌素(aerobactin)是腸桿菌科產(chǎn)氣菌素細(xì)菌產(chǎn)生的一種鐵載體。LeRoy等用鐵氣菌素聯(lián)合福氏完全佐劑間隔7d免疫種母雞,采用ELISA方法檢測出殼雛雞的抗鐵氣菌素特異性抗體是否轉(zhuǎn)移。出殼后立即用10倍系列稀釋強毒力產(chǎn)氣菌素大腸桿菌()78菌株的過夜培養(yǎng)物攻毒,未見明顯保護(hù)。雖然母雞產(chǎn)生的抗體不能保護(hù)其子代,但試驗再次表明免疫母雞可能是對付APEC的一種切實可行的策略.因為特異抗體顯著經(jīng)卵沉積
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