口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗(猴腎細(xì)胞)

1、口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗(猴腎細(xì)胞) Koufu Jisuihuizhiyan Jiandu Huo Yimiao(Houshen Xibao)Poliomyelitis（Live） Vaccine（Monkey Kidney Cell），Oral 本品系用脊髓灰質(zhì)炎病毒、III型減毒株分別接種于原代猴腎細(xì)胞, 經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液制成單價(jià)或三價(jià)液體疫苗， 用于預(yù)防脊髓灰質(zhì)炎。1 基本要求生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動(dòng)物等應(yīng)符合“凡例”要求；2 制造2.1 生產(chǎn)用細(xì)胞生產(chǎn)用細(xì)胞為原代猴腎細(xì)胞。 細(xì)胞管理及檢定應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”規(guī)定。生產(chǎn)用猴腎細(xì)胞應(yīng)選

2、自未作過(guò)其他試驗(yàn)或做過(guò)本疫苗檢定的健康獼猴， 所用動(dòng)物必須經(jīng)不少于6周的隔離檢疫，應(yīng)無(wú)結(jié)核、B病毒感染及其他急性傳染病，血清中泡沫病毒（foamy）抗體應(yīng)為陰性。凡有嚴(yán)重化膿灶、贅生物以及明顯的肝、腎病理改變者不得使用。 細(xì)胞制備取符合項(xiàng)要求的健康獼猴腎臟，經(jīng)胰蛋白消化、分散細(xì)胞，置37.0±0.5培養(yǎng)，69天長(zhǎng)成單層。每只猴制備的細(xì)胞為1個(gè)細(xì)胞消化批，同一天制備的不同細(xì)胞化消化批為1個(gè)細(xì)胞批。2.2 毒種 名稱(chēng)及來(lái)源生產(chǎn)用毒種為脊髓灰質(zhì)炎病毒I、II、III型減毒株，可用I、II、III型Sabin株、Sabin純化株、中III2株病毒或經(jīng)批準(zhǔn)的其他毒株。 種子批的建立 應(yīng)符合“生

3、物制品生產(chǎn)檢定菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。.1原始種子批 Sabin株原始毒種、型及中2株均由毒種研制單位制備和保存。.2主種子批 除WHO贈(zèng)送的Sabin株外，其他經(jīng)批準(zhǔn)的毒種由原始毒種在胎猴腎細(xì)胞或人二倍體細(xì)胞上傳12代制成的成分均一的一批病毒懸液稱(chēng)為主種子批。Sabin株主種子批的傳代水平為SO+1； 中2株主種子批傳代水平為中III2 1代；型pfizer株主種子批為RSO1。.3工作種子批 主種子批毒種原代胎猴腎細(xì)胞上傳l代制備成的成分均一的一批病毒懸液稱(chēng)為工作種子批。毒種傳代從原始種子批到生產(chǎn)種子批的傳代次數(shù)，Sabin、型和其他純化株以及中2株不得超過(guò)3代；Sabin型及其他純化株包括

4、pfizer株不得超過(guò)2代。制備生產(chǎn)用種子批所用的細(xì)胞應(yīng)限于原代胎猴腎細(xì)胞或人二倍體細(xì)胞。種子批的檢定除明確規(guī)定外，主種子批以及工作種子批應(yīng)進(jìn)行以下全面檢定。 .1 鑒別試驗(yàn)取適量型、型或III型單價(jià)脊髓灰質(zhì)炎病毒抗血清與適量病毒供試品混合，置3537中和12小時(shí)，接種猴腎細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞或其他敏感細(xì)胞，置適宜溫度(3536)培養(yǎng)，7天判定結(jié)果，病毒型別應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤。同時(shí)設(shè)血清和細(xì)胞對(duì)照，均應(yīng)為陰性。病毒對(duì)照應(yīng)為陽(yáng)性。.2 病毒滴定采用微量細(xì)胞病變法。取毒種作10倍系列稀釋?zhuān)肯♂尪炔《疽航臃N猴腎細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞或其他敏感細(xì)胞，置適宜溫度（3536）培養(yǎng)，7天判定結(jié)果。病毒滴度均應(yīng)不低于

5、 6.5 Lg CCID50ml。應(yīng)同時(shí)進(jìn)行病毒參考品滴定。.3 無(wú)菌檢查 依法檢查（附錄XII A）， 應(yīng)符合規(guī)定。.4 支原體檢查依法檢查（附錄XII B）， 應(yīng)符合規(guī)定。.5 病毒外源因子檢查依法檢查（附錄XII C ）， 應(yīng)符合規(guī)定。.6家兔檢查 毒種應(yīng)進(jìn)行此項(xiàng)檢查，如不立即進(jìn)行試驗(yàn)，毒種液應(yīng)保存于-20以下。取用體重1.52.5kg的健康家兔至少5只，每只注射10ml，其中1ml皮內(nèi)多處注射，其余皮下注射，觀察3周。到期處死時(shí)存活動(dòng)物數(shù)應(yīng)不低于80，無(wú)B病毒和其他病毒感染判為合格。家兔在24小時(shí)以后死亡，疑有B病毒感染者應(yīng)尸檢，須留神經(jīng)組織和臟器標(biāo)本待查，用腦組織作10懸液，用同樣方

6、法接種5只健康家兔進(jìn)行檢查。.7 免疫原性檢查用主種子批毒種制成疫苗，按常規(guī)接種易感兒童（免前抗體效價(jià)1:4）至少30名，分別于免疫前及免疫后4周采血，測(cè)定中和抗體，免疫后抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率應(yīng)不低于95。.8 猴體神經(jīng)毒力試驗(yàn)依法檢查（附錄XI L ）， 應(yīng)符合規(guī)定。.9 rct特征試驗(yàn)將單價(jià)病毒液分別于36±0.1及40±0.1進(jìn)行病毒滴定，試驗(yàn)設(shè)t-對(duì)照（生產(chǎn)毒種或已知對(duì)人安全的疫苗）。如果病毒液和t-對(duì)照在36±0.1的病毒滴度與40±0.1的滴度差不低于5.0 Lg，則 rct特征試驗(yàn)合格。.10 SV40核酸序列檢查依法檢查（附錄IX H）， 應(yīng)為陰性

7、。 毒種保存液體毒種需加終濃度為1mol / L的氯化鎂溶液，置-60以下保存。2.3 原液 細(xì)胞制備同項(xiàng)。 培養(yǎng)液細(xì)胞培養(yǎng)液為含適量滅能新生牛血清的乳蛋白水解物Earle氏液或其他適宜培養(yǎng)液。新生牛血清的質(zhì)量應(yīng)符合要求（附錄XIII D）。維持液為不含小牛血清的乳蛋白水解物Earles液或其他適宜的維持液。對(duì)照細(xì)胞病毒外源因子檢查依法檢查（附錄XII C）， 應(yīng)符合規(guī)定。 病毒接種和培養(yǎng)毒種與細(xì)胞按0.030.3MOI接種（同一工作種子批應(yīng)按同一MOI接種），種毒后置33±0.5培養(yǎng)4896小時(shí)至細(xì)胞出現(xiàn)完全病變后收獲。 病毒收獲同一細(xì)胞消化批收獲的病毒液檢定合格后， 經(jīng)澄清過(guò)濾收

8、集于大瓶中， 為單一病毒收獲液。單一病毒收獲液檢定按3.1項(xiàng)進(jìn)行。單一病毒收獲液保存于28保存不超過(guò)30天， 于-20保存不超過(guò)6個(gè)月。單一病毒收獲液合并或濃縮同一細(xì)胞批制備的多個(gè)單一病毒收獲液檢定合格后直接或適當(dāng)濃縮后進(jìn)行合并。 合并后的病毒液經(jīng)澄清過(guò)濾即為單價(jià)原液。2.3.9 單價(jià)原液檢定按3.2項(xiàng)進(jìn)行。0 單價(jià)原液保存于28保存不超過(guò)30天， 于-20保存不超過(guò)6個(gè)月。2.4 半成品 配制單價(jià)原液加入氯化鎂，終濃度為1mol/L，經(jīng)除菌過(guò)濾后即為單價(jià)半成品。取適量I、II、III型單價(jià)半成品，按一定比例進(jìn)行配制，經(jīng)除菌過(guò)濾后即為三價(jià)疫苗半成品。 半成品檢定按3.3項(xiàng)進(jìn)行。2.5 成品制備

9、 分批應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。 分裝應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。 規(guī)格每瓶1.0 ml。每1次人用劑量為2滴（相當(dāng)于0.1 ml），含脊髓灰質(zhì)炎活病毒總量應(yīng)不低于6.15 LgCCID50/ml，其中型應(yīng)不低于6.0 LgCCID50/ml，型應(yīng)不低于5.0 LgCCID50，型應(yīng)不低于5.5 LgCCID50/ml。 包裝應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。3 檢定 3.1單一病毒收獲物檢定 病毒滴定 按.2 項(xiàng)，病毒滴度應(yīng)不低于 6.5 Lg CCID50ml。 無(wú)菌檢查依法檢查（附錄XII A ）， 應(yīng)符合規(guī)定。 支原體檢查依法檢查（附錄XII B）， 應(yīng)符合規(guī)定。3.2

10、單價(jià)原液檢定3.2.1鑒別試驗(yàn)按.1項(xiàng)進(jìn)行。3.2.2病毒滴定 按.2項(xiàng)進(jìn)行。病毒滴度均應(yīng)不低于 6.5Lg CCID50ml。 3.2.3無(wú)菌檢查依法檢查（附錄XII A ）， 應(yīng)符合規(guī)定。3.2.4 支原體檢查依法檢查（附錄XII B）， 應(yīng)符合規(guī)定。3.2.5 猴體神經(jīng)毒力試驗(yàn)依法檢查（附錄XI L）， 應(yīng)符合規(guī)定。數(shù)批單價(jià)原液合并試驗(yàn)結(jié)果不合格，可以分批重試。3.2.6. SV40核酸序列檢查依法檢查（IX H）， 結(jié)果應(yīng)為陰性。3.3半成品檢定3.3.1病毒滴定按.2項(xiàng)進(jìn)行。單價(jià)半成品病毒滴度應(yīng)不低于 6.5Lg CCID50ml。半成品病毒滴度應(yīng)不低于7.15 LgCCID50ml

11、，其中I型應(yīng)不低于7.0 Lg CCID50ml ，II型應(yīng)不低于6.0 Lg CCID50ml，III型應(yīng)不低于6.5 Lg CCID50ml。3.3 .2無(wú)菌檢查 依法檢查（附錄XII A ）， 應(yīng)符合規(guī)定。3.4 成品檢定3.4.1鑒別試驗(yàn)取適量、III型三價(jià)混合脊髓灰質(zhì)炎病毒抗血清與適量病毒供試品混合，置3537中和12小時(shí)，接種Hep-2細(xì)胞或其他敏感細(xì)胞，置適宜溫度(3536)下培養(yǎng)，7天判定結(jié)果，應(yīng)無(wú)病變出現(xiàn)。同時(shí)設(shè)血清和細(xì)胞對(duì)照，均應(yīng)為陰性。病毒對(duì)照應(yīng)為陽(yáng)性。3.4.2外觀應(yīng)為澄清無(wú)異物的橘紅色液體。3.4.3 病毒滴定方法同.2，三價(jià)疫苗每1次人用劑量0.1 ml，病毒滴度應(yīng)不低于6.15 Lg CCID50,其中I型應(yīng)不低于6.0 Lg CCID50 ，II型應(yīng)不低于5.0 Lg CCID50 ，III型應(yīng)不低于5.5 Lg CCID50。3.4.4熱穩(wěn)定性試驗(yàn)疫苗出廠前必須同時(shí)做熱穩(wěn)定性試驗(yàn)， 應(yīng)與病毒滴定同時(shí)進(jìn)行。 37放置48小時(shí)后，按.2項(xiàng)進(jìn)行病毒滴定，每1次人用劑量病毒滴度下降應(yīng)不高于0.5 Lg。3