嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的細(xì)胞遺傳學(xué)研

1、嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的細(xì)胞遺傳學(xué)研    作者：張艷,何琦,黃曉軍,江浩,楊申淼,路瑾,秦亞溱,師巖,黨輝,邱鏡瀅,陸道培    【摘要】 為探討染色體異常克隆在嗜酸性粒細(xì)胞增多癥診斷和鑒別診斷中的意義及克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥涉及的染色體異常，收集了65例嗜酸性粒細(xì)胞增多患者的骨髓標(biāo)本，培養(yǎng)24小時，采用G顯帶進(jìn)行核型分析。結(jié)果表明： 65例中9例擬診為急性髓細(xì)胞性白血病?M4Eo檢出特異性的染色體異常inv(16)，而其余的56例以嗜酸性粒細(xì)胞增多待診的患者中5例檢出染色體異?？寺?，檢出率為8.9%。根據(jù)臨床、血

2、液學(xué)資料并結(jié)合染色體檢出結(jié)果，5例患者最后分別被診斷為急性髓系白血病伴嗜酸性粒細(xì)胞增多、慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病、8p11骨髓增殖綜合征、慢性髓系白血病急變、急性髓系白血病?M4Eo。檢出的染色體異?？寺》謩e為 14、t(5;12) (q31;p13)、t（8;9）(p11;q32)、t(9;22)（q34;q11）和inv(16)(p13q22)。結(jié)論：在嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的診斷中，染色體的檢測是判定克隆性和診斷慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病的重要手段，應(yīng)作為常規(guī)的檢測。    【關(guān)鍵詞】 克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥 慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病 染色體異常 細(xì)胞遺傳學(xué)

3、 Cytogenetic Study on Eosinophilia    Abstract    The aim of study was to investigate the importance of chromosome aberration in differential diagnosis of eosinophilia and the chromosomal aberrations involved in patients with clonal eosinophilia. 65 cases of e

4、osinophilia were collected and chromosome specimens of bone marrow cells were prepared by 24?hour culture, and G?banding technique was used for karyotyping. The results showed that out of 65 cases, chromosome 16 inversion was detected in 9 patients suspected as M4Eo, and among the other 56 cases, 5

5、were detected with chromosomal aberrations（8.9%）. Combining clinical, hematological and cytogenetical data, the 5 patients were diagnosed as acute myeloid leukemia with eosinophilia,chronic eosinophilic leukemia,8p11 myeloproliferative syndrome, chronic myeloid leukemia in acute phase and acute myel

6、oid leukemia? M4Eo respectively. The detected chromosomal aberrations were 14, t(5;12) (q31;p13), t（8;9）(p11;q32), t(9;22)（q34;q11）    and    inv(16)(p13q22). In conclusion, cytogenetical detection is very important in differential diagnosis of clonal eosinoph

7、ilic disorders and chronic eosinophilic leukemia, which is suggested to be done routinely in clinic.    Key words    clonal eosinophilic disorder; chronic eosinophilic leukemia； chromosomal aberration; cytogenetics    J Exp Hematol 2007; 15

8、(3):454-457    嗜酸性粒細(xì)胞增多癥是一類異質(zhì)性疾病，其病因多種多樣，最常見的是蠕蟲感染。在特定的情況下，由于嗜酸性粒細(xì)胞的激活，其胞內(nèi)顆粒的釋放還可造成多器官受損。臨床上，嗜酸性粒細(xì)胞增多癥可分為以下3種疾病：反應(yīng)性、克隆性和特發(fā)性高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征（hypereosinophilic syndrome, HES）。一般講，反應(yīng)性嗜酸性粒細(xì)胞增多為良性過程，而克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多常伴發(fā)于克隆性惡性血液病，對年輕患者需要行造血干細(xì)胞移植才能夠治愈。對于既往診斷HES的病例如有任何髓系細(xì)胞克隆性的依據(jù)，應(yīng)診斷為慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病。因此，

9、區(qū)分反應(yīng)性還是克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多非常重要。骨髓的染色體檢查通過異常克隆的檢出，可判定為克隆性;并且，特異性的染色體異常如t(9;22)、t(8;21)、inv(16)還可輔助診斷惡性血液病的類型。我們將近年來在我院進(jìn)行過染色體檢查的嗜酸性粒細(xì)胞增多患者的臨床、血液學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)結(jié)果作一總結(jié)，探討染色體異常克隆在其診斷和鑒別診斷中的意義以及克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥涉及的惡性血液病和染色體異常的類型。    材料和方法    病例    65例為2000年1月至2006年6月

10、在我院行染色體檢查的嗜酸性粒細(xì)胞增多患者，包括擬診為急性髓細(xì)胞性白血病?M4Eo 9例。男性41例，女性24例，中位年齡36（14-87）歲。嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)為外周血液中嗜酸性粒細(xì)胞絕對值大于0.45×109/L，分類超過4%，具體參照鄧家棟等主編的臨床血液學(xué)1。其它白血病、骨髓增殖性疾病，包括慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病按照2001年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)2。    標(biāo)本來源均為骨髓，接種于含有20%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，細(xì)胞密度為2×106/ml，置于37、5% CO2孵箱中培養(yǎng)24小時，按參考文獻(xiàn)3報道的制片和G顯

11、帶技術(shù)進(jìn)行染色體分析。核型分析和異?？寺∶枋霭慈祟惣?xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制ISCN（2005）。    融合基因的檢測    采用RQ?PCR法，根據(jù)設(shè)計原則設(shè)計相應(yīng)的引物和探針，由本所分子生物學(xué)實驗室完成，方法參見文獻(xiàn)4。    結(jié)    果    染色體異常檢出率    總檢出率為21.5%(14/65),其中9例擬診為急性髓細(xì)胞性白血病?M4Eo患者均檢

12、出特異性的染色體異常inv(16)(p13q22)而明確診斷，而其余的56例以嗜酸性粒細(xì)胞增多待診的患者中，5例（8.9%）檢出克隆性染色體異常。5例中的2例檢出特異性的染色體異常：t(9;22)（q34;q11）和inv(16)(p13q22)；余下的3例為非特異性異常： 14、t(5;12) (q31;p13)、t（8;9）(p11;q32)。    5例克隆性嗜酸粒細(xì)胞增多癥患者的特征    病例1、3外周血中嗜酸性粒細(xì)胞絕對值均1.0×109/L，以嗜酸性粒細(xì)胞增多待診，病例1骨髓染色體檢出 14

13、，而外周血淋巴細(xì)胞染色體檢查正常，排除了體質(zhì)性異常，因而 14為獲得性克隆性異常。該病例為克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多，結(jié)合骨髓形態(tài)中原始粒細(xì)胞25%，診斷為急性髓系白血病伴嗜酸性粒細(xì)胞增多；病例3骨髓染色體檢出累及8p11的8號和9號染色體相互易位，明確診斷為8p11骨髓增殖綜合征，而且染色體除8p11受累外還有 21的附加異常，提示疾病可能已向急性髓系白血病發(fā)展，患者的骨髓形態(tài)學(xué)檢查原始細(xì)胞已增高。病例2外周血和骨髓中嗜酸性粒細(xì)胞重度增高，以嗜酸性粒細(xì)胞白血病待診，骨髓染色體檢出t(5;12),明確了診斷，并排除了慢性髓系白血病伴嗜酸性粒細(xì)胞增高。病例4初始診斷為急性嗜酸性粒細(xì)胞白血病，但染色體

14、檢出特異性的t(9;22)易位，結(jié)合患者的骨髓形態(tài)學(xué)分析，修正診斷為慢性髓系白血病急變期。病例5初始診斷為嗜酸性粒細(xì)胞白血病，但染色體檢出特異性的inv(16),因此修正診斷為急性髓系白血病?M4Eo。5例患者的臨床、血液學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)特征見附表。    討    論    臨床上多種疾病可導(dǎo)致外周血中嗜酸性粒細(xì)胞增多，如寄生蟲感染、變態(tài)反應(yīng)疾病、皮膚疾病、結(jié)締組織病、胃腸道疾病、腫瘤性疾病等。因此，嗜酸性粒細(xì)胞增多癥可分為3類：第1類為反應(yīng)性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥，如上述的寄生

15、蟲感染，尤其是蠕蟲感染，變態(tài)反應(yīng)疾病等；第2類為克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥，包括慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血?。–EL）；第3類為高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征（HES）5。臨床診斷中首要的是區(qū)分反應(yīng)性還是克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多，判定克隆性疾病所致嗜酸性粒細(xì)胞增多有如下的方法6：異常染色體、女性雜合子G?6PD同功酶、嗜酸性粒細(xì)胞克隆培養(yǎng)異常染色體、K?RAS基因突變等，上述方法中染色體異?？寺〉臋z出是最直接的證據(jù)。    文獻(xiàn)報道，在中到重度的嗜酸性粒細(xì)胞增多癥中，克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多僅占0.9%7。我們除M4Eo外的56例嗜酸性粒細(xì)胞增多患者中染色體異?？寺z出率為8

16、.9%，檢出率顯著高于文獻(xiàn)報道，分析原因： 這是國外1997年發(fā)表的一篇文摘，且文中的克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多僅涉及MDS伴嗜酸增高，未包括其它的克隆性惡性血液病伴嗜酸增高，可能造成檢出的比例低；也可能為國人嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的特點;可能與我們總例數(shù)少，病例存在醫(yī)院選擇性偏倚有關(guān)。目前國內(nèi)外尚無大宗病例報道嗜酸性粒細(xì)胞增多癥中克隆性嗜酸粒細(xì)胞增高者的比例。    在克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥中，嗜酸性粒細(xì)胞增多是作為腫瘤克隆的一部分，涉及的惡性血液病有急性髓系白血?。ˋML）、急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）、慢性髓系白血?。–ML）、骨髓增生異常綜合征（MDS

17、）、骨髓增殖性疾病（MPD）等伴嗜酸性粒細(xì)胞增多8。因此，檢出的異?？寺〕３锳ML、CML、MDS、MPD等疾病中出現(xiàn)的染色體畸變。如AML?M4Eo中的inv(16)， M2中的t(8;21), 慢性髓系白血病中的t(9;22)。伴有嗜酸性粒細(xì)胞增多的MDS患者中，絕大多數(shù)有染色體畸變，常累及5號和7號染色體，或表現(xiàn)為三體8。文獻(xiàn)中還報道有其它的多種染色體畸變，均為非特異性, 如t(6;10)(q27;q11)、t(8;9)(p23;p24)、t(5;15)(q33;q22)等。    近年來，研究者們在伴嗜酸性粒細(xì)胞增多的MPD中檢出了常見的分子學(xué)

18、異常，如PDGFRA重排、PDGFRB重排及FGFR重排的嗜酸粒細(xì)胞增多癥，進(jìn)一步闡明了這類嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的分子病理機(jī)制，為治療開辟了新途徑。累及PDGFRA重排的染色體畸變?yōu)閠(4;22)(q12;q11),形成BCR?PDGFRA融合基因。還有一種常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)不能發(fā)現(xiàn)的4號染色體長臂1區(qū)2帶800 kb的微缺失，形成FIP1L1?PDGFRA融合基因，需要做RT?PCR或間期的熒光原位雜交才能檢出。累及PDGFRB的重排具有染色體5q31-33的畸變，如t(5;12)(q33;p13),可見于不典型CML、慢性粒單核細(xì)胞白血病等。PDGFRA和PDGFRB均具有受體酪氨酸激酶活性，因

19、此這類有PDGFRA重排和PDGFRB重排的嗜酸性粒細(xì)胞增多癥用格列衛(wèi)（STI 571）治療有效。累及FGFR的重排被稱為8p11骨髓增殖綜合征，染色體畸變形式為t(6;8)(q27;p11)、t(8;9)(p11;q32)和t(8;13)(p11;q12)等。8p11骨髓增殖綜合征預(yù)后差，強(qiáng)烈化療后行異基因造血干細(xì)胞移植是治愈該病的唯一手段。    染色體檢測在嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的鑒別診斷中起到了重要作用。9例擬診為急性髓細(xì)胞性白血病?M4Eo患者中均檢出特異性的染色體異常inv(16)(p13q22)，進(jìn)一步明確了診斷。余下的56例中5例檢出染色體異

20、常克隆，因此為克隆性嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。5例中的3例明確了初始診斷：病例2外周血嗜酸性粒細(xì)胞極其顯著增多44×109/L，臨床表現(xiàn)、體征、血象比較符合CML，但融合基因檢測BCR?ABL（?）、FIP1L1?PDGFR（?），染色體檢出異?？寺(5;12)(q31;p13)，從而明確了慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病的診斷，并為患者治療中應(yīng)用格列衛(wèi)提供了細(xì)胞遺傳學(xué)的依據(jù)；病例3經(jīng)染色體檢查明確為預(yù)后不良的8p11骨髓增殖綜合征，已予異基因造血干細(xì)胞移植。5例中的另2例患者染色體檢測的結(jié)果使得初始診斷得以修正：病例4檢出特異性的t(9;22)易位，以及CML加速或急變期典型的附加染色體異常 8

21、、i(17)、 19，結(jié)合患者的骨髓形態(tài)學(xué)分析，修正診斷應(yīng)為CML急變；病例5檢出inv(16) 異常，故診斷為急性髓細(xì)胞性白血病?M4Eo。    根據(jù)WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)，慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病診斷上除排除反應(yīng)性嗜酸性粒細(xì)胞增多外，還需具備克隆性的依據(jù)，以便與高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征鑒別。由此可見，染色體克隆性異常的檢出具有重要意義。刺激嗜酸性粒細(xì)胞增生的細(xì)胞因子主要為IL?3、IL?5、GM?CSF，而編碼這些因子的基因均位于5號染色體的長臂上，位于或臨近于這些基因位點的斷裂、缺失或易位可能與疾病的發(fā)生有關(guān)。因此，嗜酸性粒細(xì)胞白血病主要的染色體畸變累及5q31?35，涉及PDGFRB基因重排5、9。我們報道的1例慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病，染色體檢出異?？寺(5;12)(q31;p13)。近年來發(fā)現(xiàn)，部分HES病例應(yīng)用間期熒光原位雜交或RT?PCR可檢出FIP1L1?PDGFRA融合基因，因此這些病例應(yīng)重新診斷為CEL。    綜上所述，在嗜酸性粒細(xì)胞增多癥的診斷中，染色體的檢測是判定克隆性的重