人破傷風疫苗免疫與抗-TT高效價血漿篩查方法的研究

1、人破傷風疫苗免疫與抗-TT高效價血漿篩查方法的研究         【摘要】  目的 研究人破傷風疫苗免疫方法對供血漿者抗-TT效價的影響，篩查符合制備人破傷風免疫球蛋白標準的原料血漿的檢測方法。方法 對符合規(guī)定的志愿供血漿者進行分組，以同一劑量不同免疫程序進行免疫。采用ELISA定量檢測兩組供血漿者抗-TT效價水平，將抗-TT效價80IU/ml的供血漿者列為采集特免血漿對象，并將其血漿樣作小鼠試驗進行效價的復檢。結(jié)果 供血漿者組別間相同劑量疫苗不同免疫程序產(chǎn)生高效價抗-TT的比率比較差異明顯；0、4周免

2、疫程序組產(chǎn)生高效價的比率明顯高于0、8周免疫程序組，而且前者抗-TT高效價持續(xù)時間較后者的長。經(jīng)ELISA初篩檢測達標的血樣經(jīng)小鼠中和試驗法復查，兩結(jié)果比較差異無顯著性。結(jié)論 采用40IU吸附破傷風疫苗，0、4周程序免疫供血漿者可獲得高效價抗-TT原料血漿，兩種程序均可提高供血漿者的抗破傷風抗體水平，能夠達到終身保護的濃度。同時還進一步證實了ELISA檢測方法用于大規(guī)模篩查抗-TT高效價原料的可行性。 【關鍵詞】  破傷風疫苗 供血漿者 抗-TT;ELISA法   【Abstract】  Objective  Investigating the

3、 effect of immunized procedure of tetanus toxoid (TT) on the anti-TT titer of plasma donor and screening the test Methods  Used for detecting Source plasma according with the demands of anti-TT IgG. The plasma donors were divided into two groups and then the subjects were immunized with tetanus

4、 toxoid with the different procedures (the same dosage). The anti-TT IgG titer of plasma donor was detected by ELISA kits. The plasma donor that the titer of anti-TT antibody is80 IU/ml was regard as a special immunol plasma donor use for selecting plasma. Results  Indicated that the ratio of t

5、he high titer of anti-TT antibody between two groups is of the distinct difference, the ratio of high titer of antibody in the group immunized according to 0 and 4 week is higher than that of other group(0 and 8 week procedure), and the anti-TT titer of the formers sample can maintain for longer tim

6、e. The results of retesting the samples which were in keeping with the standard using ELISA showed that have no difference between two groups. Conclusion  The anti-TT IgG titer plasma donor in the group (0 and 4 week procedure)is higher,but both procedures can improve the level of anti-TT IgG o

7、f plasma donor,and ELISA is practicible for screening.   【Key words】  tetanus toxoid;plasma donor; anti-TT antibody; ELISA   破傷風是由產(chǎn)生毒素的破傷風桿菌引起的致死性傳染病，其高毒力的痙攣毒素可阻斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，引起肌肉強直和典型的全身痙攣，目前仍是全球眾多地區(qū)的一個重要公共衛(wèi)生問題，尤其是熱帶發(fā)展中國家最貧窮地區(qū)，母親和新生兒破傷風的發(fā)病率和死亡率較高1。破傷風可通過免疫接種含破傷風類毒素（tetanu

8、s toxoid, TT）的疫苗來預防，破傷風疫苗與其他百日咳、白喉疫苗一起作為聯(lián)合疫苗（DTP）早已納入我國兒童計劃免疫。然而，在國家免疫計劃低覆蓋率，尤其是計劃免疫實施前出生的人群中會有破傷風的發(fā)生，許多育齡期婦女不能預防分娩相關的破傷風。另外，盡管已接受過基礎免疫，為了獲得持久的免疫力，還須加強免疫。除了注射疫苗外，人類防治破傷風主要是注射馬血清破傷風毒素（tetanus antitoxin, TAT）和人破傷風免疫球蛋白（human tetanus immunglobulin, TIG），由于前者系馬血清制品，常常引起過敏反應，為此，20世紀60年代歐美各國相繼研制出TIG用于臨床，并

9、逐漸取代TAT2。TIG系由供血漿者經(jīng)吸附破傷風疫苗免疫后采集抗-TT效價高的原料血漿制備。為了探討供血漿者進行破傷風疫苗免疫的影響，建立篩查符合標準的抗-TT原料血漿方法，筆者采用相同劑量不同免疫程序分別免疫符合要求的供血漿者，并將ELISA檢測方法篩查合格的血漿樣品與小鼠試驗法檢測結(jié)果進行復檢，現(xiàn)報告如下。   1  材料與方法   1.1  材料  吸附破傷風疫苗（0.5ml，含破傷風類毒素效價40IU，批號：20030701）由蘭州生物制品研究所提供，ELISA定量檢測破傷風抗體診斷試劑（批號：20060207，20

10、060705，20060819，20070109）由珠海海泰生物藥業(yè)有限公司提供，人破傷風免疫球蛋白標準品（10IU/ml，批號：001，中國藥品生物制品檢定所），抗-HCV、抗-HIV（）、HBsAg、梅毒等診斷試劑盒均由蘭州生物制品研究所提供，ALT試劑（自配），PCS-2型全自動血漿采集機（美國血液技術公司），MK3酶標儀，洗板機（芬蘭DENLEY公司）。   1.2  分組方法  將志愿供血漿者分成兩組（A組，B組），每組按各自的疫苗劑量和不同的免疫程序進行免疫。對那些無應答或抗-TT效價8IU/ml的供血漿者實施一次強化免疫。 

11、60; 1.3  原料血漿采集  按中華人民共和國藥典2005年版（三部）“血液制品原料血漿規(guī)程”要求采集。   1.4  檢測方法  初篩采用ELISA定量測定法，按診斷試劑盒說明書進行操作，在0160mIU/ml范圍繪制標準曲線，同時做20mIU/ml和40mIU/ml標準品對照3。超出標準曲線范圍的樣品進行100倍 稀釋，再次檢測其結(jié)果時乘以100。復檢按中華人民共和國藥典2005年版（三部）附錄XIF破傷風抗毒素效價測定法進行測定，并將其檢測結(jié)果與ELISA法檢測結(jié)果進行比較。   1.5

12、0; 判定標準  檢測結(jié)果至少達到0.10.2IU/ml（ELISA法評價）1的血樣常被認為對供血漿者具有保護作用；80IU/ml的血樣為高效價抗-TT原料血漿的供血漿者。            2  結(jié)果   2.1  相同劑量不同免疫程序免疫獲得的供血漿進行抗-TT效價分布  見表1，從表1可以看出，兩組間抗-TT效價分布百分比率有明顯差異。表1  相同劑量（40IU），不同免疫程序免疫供血漿者抗體效價分布 &#

13、160; 2.2  供血漿者持續(xù)供血漿后抗-TT變化  見表2，由表2可以看出，A組供血漿者在進行第5次供血漿時抗-TT8IU/ml的人數(shù)比例下降至8.82%，到第8次時下降至1.47%；B組抗-TT8IU/ml的供血漿者較A組下降趨勢更快，到第5次時下降為3.3%，第6次時已下降至零。表2  供血漿者持續(xù)獻血漿后抗-TT的變化   2.3  破傷風疫苗免疫供血漿者效果的比較  見表3，從表3可以看出，經(jīng)0、4周或0、8周免疫程序，40IU劑量免疫30天后，免疫效果比較明顯（所有供血漿者在免前檢測抗-TT效價達到0.1IU/

14、ml保護效價的甚少，幾乎為零），有98%以上的供血漿者具有預防破傷風的保護抗體。表3  TT免疫供血漿者效果比較   2.4  ELISA定量測定法與小鼠中和試驗檢測法結(jié)果比較  見表4，由表4可以看出，通過對血漿樣品、混合漿樣品和TIG半成品樣品的檢測，兩種檢測方法結(jié)果差異不明顯，比差范圍在80%88%之間。表4  ELISA法與小鼠中和試驗法 抗-TT效價測定結(jié)果比較 注：14為血漿單份樣品；5為血漿混合樣品；6為TIG樣品   2.5  破傷風疫苗全程免疫供血漿者抗-TT效價趨勢分析  見

15、圖1。從圖1可以看出，A組（0、4周程序免疫）供血漿者隨著采漿次數(shù)的增加，其血漿抗-TT效價下降呈平穩(wěn)趨勢；B組（0、8周程序免疫）供血漿者隨著采漿次數(shù)的增加，其血漿抗-TT效價第3次采漿時已開始下降（8IU/ml），到第6次時已降至2.1IU/ml，此時不得不進行加強免疫，1個月后其血漿抗-TT效價開始上升（8IU/ml），到第9次采漿時升至10IU/ml以上。3  討論   志愿供血漿者經(jīng)破傷風疫苗（40IU）基礎免疫后，絕大部分血漿抗-TT轉(zhuǎn)陽（約占98%以上），其中約15%20%供血漿者的血漿抗-TT效價能達到8IU/ml以上，其余供血漿者經(jīng)再次加強免疫后均可大大提高高效價血漿的比率，這一結(jié)果表明，無論從廣大供