細胞油紅O染色的操作步驟

1、細胞油紅O染色的操作步驟點擊次數(shù)：348 發(fā)布時間：2011-4-11、10%中性甲醛的配制 材料：中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶 稱取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中過夜才能溶解。配好的溶液1個星期內(nèi)有效，最好4度保存。  2、染色液的配制 材料：油紅染料 棕色可密封瓶 異丙醇 研缽 漏斗 定性濾紙 稱取預(yù)先研磨粉碎的0.5g油紅干粉，溶于少量異丙醇中，然后加異丙醇至100ml，棕色瓶密封(或錫箔紙包裹避光)4保存，為儲存液，可長期保存。用時取6ml加三蒸水4ml混勻，定性濾紙過濾，稀釋后數(shù)小時內(nèi)用完。3、培育載體 3毫升培育瓶。假如培育載體為塑料制品，

2、hoechst33342染核的話，塑料板自發(fā)熒光也為藍色，必需考慮。4、.染色對象 間充質(zhì)細胞脂肪誘導(dǎo)后不同時間段。5、留意事項：脂肪油紅染色，有的是動物/人體脂肪組織切片，或細胞爬片。各有操作差異。以下是各論壇方法小結(jié)，不全。 (1).完全成熟飽滿的脂肪細胞，簡潔裂開，脂滴泄漏，所以壓片，切片都要考慮到這個問題。 (2).細胞爬片細胞溶液脫落，特殊是脂滴大的。操作務(wù)要輕柔。不要把細胞沖掉。 (3).假如做脂肪組織冰凍切片，冰凍溫度比一般要低，切片厚度加厚。6、染色步驟： (1) 先當心輕緩倒去培育夜。 (2) 用pbs輕緩漂洗(不洗沒問題)。(3)加10%中性甲醛固定30min(實

3、際固定時間過夜都沒問題。固定液用95%酒精也可)。固定的是細胞膜。 (4) 稀釋油紅儲存液，油紅：去離子水3:2，濾紙過濾，室溫放置10min(除去一些雜質(zhì)，染色結(jié)果更清楚)。 (5)染色10min左右，加的體積掩蓋住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml(實際染色時間1小時都可以)。 (6)脫色，用75%酒精/60%異丙醇漂洗，除去多余的染料(實際用其他平衡液洗也沒問題，背景并不會殘留多少)。 (7) 復(fù)染，淡蘇木染色1/5分鐘，pbs漂洗(這一步不做也可，看試驗需要，并且蘇木素會把胞漿染紅，如要顯示核， hoechst33342也可以，濃度5微克/毫升染1

4、0分鐘即可把核染上)。 (8)甘油明膠封片(封片后可長期保存)。 (9)顯微鏡觀看。 三、顯示脂類的油紅法：（1）操作步驟：· 1、福爾馬林固定后的恒冷箱切片附貼于載片上或游離切片，厚5-10nm，2、60%異丙醇稍洗切片，3、油紅O液染5-15min，4、60%異丙醇洗去多余染液，5、自來水洗，6、蘇木素染細胞核2min，7、自來水洗，假如需要可分化，8、水洗至細胞核藍化5-10min，9、擦去多余水分，甘油明膠封固。 結(jié)果：脂類物質(zhì)顯示紅色，細胞核顯示藍色。（II）試劑的配制：油紅o（oil red o） 0.5g異丙醇（isopropanot） 100ml將異丙醇放入三角燒瓶，再加入油紅O，于水浴中漸漸加熱使之溶解，待至完全溶解后取出，冷卻至室