新輔助熱化療對乳腺癌微血管密度和血清VEGF的影響

1、新輔助熱化療對乳腺癌微血管密度和血清VEGF的影響作者：蔣金恒,包國強(qiáng),何顯力,高德明,馬慶久作者單位：第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科，陜西 西安 710033 【摘要】目的: 研究新輔助熱化療對乳腺癌患者腫瘤微血管密度(MVD)、血清血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)的影響. 方法： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)及酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)，觀察新輔助熱化療和新輔助化療后腫瘤MVD的變化,檢測乳腺癌患者接受新輔助熱化療和新輔助化療前后血清VEGF含量. 結(jié)果： 新輔助化療組與對照組相比，MVD明顯下降(47.4±13.3)個/HP vs (81.7±17.6)個/HP，P<

2、;0.05;新輔助熱化療組與新輔助化療組及對照組相比，MVD下降更明顯(26.8±5.9)個/HP vs (47.4±13.3)個/HP及(81.7±17.6)個/HP，P<0.05. 與對照組相比，新輔助化療和新輔助熱化療后血清VEGF含量均明顯降低(315±154) ng/L vs (156±53) ng/L，P<0.05;(307±156) ng/L vs (140±47) ng/L，P<0.05;新輔助熱化療與新輔助化療后VEGF含量變化兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 結(jié)論： 新輔助

3、熱化療和新輔助化療后乳腺癌患者M(jìn)VD及血清VEGF水平均明顯下降. 新輔助熱化療組較新輔助化療組MVD下降更為明顯. 【關(guān)鍵詞】 乳腺腫瘤,化學(xué)療法,輔助,腫瘤微血管密度;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 0引言 腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)與腫瘤血管形成密切相關(guān)1，腫瘤微血管密度(microvessel density, MVD)是衡量腫瘤血管形成程度的標(biāo)志. 而血管內(nèi)皮生長因子(vascuiar endotheliai cell growth factor，VEGF)在腫瘤血管形成中起重要作用2. 新輔助熱化療對乳腺癌患者血清VEGF含量與MVD的影響研究國內(nèi)報道甚少. 我們通過檢測乳腺癌患者新輔助熱

4、化療、新輔助化療前后血清VEGF及腫瘤組織MVD的變化，探討新輔助熱化療對乳腺癌血管生成的影響及在乳腺癌臨床治療中的意義. 1材料和方法 1.1材料選擇2004/2007經(jīng)我院病理檢查證實為晚期乳腺癌女性患者60例. 人VEGF ELISA試劑盒(森雄生物公司);CD34 mAb，免疫組化染色試劑盒，DAB染色劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司). 1.2方法 新輔助化療組：術(shù)前行新輔助化療方案，采用多烯紫杉醇+阿霉素+環(huán)磷酰胺方案，共完成2個周期治療; 新輔助熱化療組：術(shù)前行新輔助熱化療方案，其化療方案同新輔助化療組. 熱療采用脈沖聚焦微波加熱治療系統(tǒng)(南京啟亞醫(yī)療設(shè)備有限公司，脈沖峰值功率6

5、00032 000 W，工作頻率2.45 GHz，波長12 cm，溫度控制范圍(42.5±1.0). 熱化療于化療藥物開始輸注后0.51 h進(jìn)行，每次熱療60 min. 化療1個周期共聯(lián)合2次熱療，共完成2個周期治療;化療方案及周期同第1組; 對照組術(shù)前不接受任何治療.保存.表1乳腺癌3組臨床病理資料×3;30 mL/L H2O2去離子水封閉30 min. PBS振洗3 min×3;3 mol/L尿素消化30 min，檸檬酸修復(fù)，PBS振洗3 min×3;用濾紙將片子擦干后，置于濕盒內(nèi)，37正常血清封閉30 min;滴加一抗(3 mg/L)，放入冰箱4過

6、夜;d2，取出片子，37復(fù)溫30 min，PBS振洗3 min×3;滴加二抗，37于濕盒內(nèi)孵育30 min，PBS振洗3 min×3;滴加ABC復(fù)合物，37于濕盒內(nèi)孵育30 min，PBS振洗3 min×3;DAB顯色20 min，自來水充分沖洗，蘇木素淡染，乙醇逐級脫水，透明，封片. 結(jié)果判定(微血管定量方法)參照Weiderner的方法，在100倍光鏡下挑選微血管分布最密區(qū)域，200倍視野下計數(shù)5個不重復(fù)視野中被CD34染成棕色的血管數(shù)目，取其均值作為MVD. 微血管的判定不以是否形成管腔或管腔內(nèi)有無紅細(xì)胞為記數(shù)單位，而是以與鄰近的微血管明顯分離的染色陽性的單

7、個內(nèi)皮細(xì)胞簇均作為一個血管計數(shù)，凡管腔大于8個紅細(xì)胞，帶較厚肌層的血管均不計數(shù). 統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件對數(shù)椐進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，分析采用t檢驗. P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義. 2結(jié)果 2.1組織MVD計數(shù)免疫組化CD34染色，顯示三組乳腺癌組織切片中微血管均呈現(xiàn)不同程度的棕黃色(圖1). MVD數(shù)值分別為(81.7±17.6)個/HP，(47.4±13.3)個/HP和(26.8±5.9)個/HP，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05). 2.2血清VEGF含量結(jié)果顯示，血清VEGF含量對照組為(304

8、77;156) ng/L;新輔助化療組化療前為(315±154) ng/L，化療后為(156±53) ng/L(P<0.05). 新輔助熱化療組在熱化療前為(307±156) ng/L;熱化療后為(140±47) ng/L，新輔助熱化療前血清VEGF的含量明顯高于熱化療后血清VEGF的含量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05). 3討論 乳腺癌新輔助化療可以縮小腫瘤及淋巴結(jié)體積，使原發(fā)腫瘤及淋巴結(jié)降期，提高保乳率，改善癌旁浸潤情況，降低癌細(xì)胞活力消滅微轉(zhuǎn)移灶，提高可手術(shù)率，減少術(shù)中播散及術(shù)后轉(zhuǎn)移，消滅亞臨床病灶，減少復(fù)發(fā)的潛在危險. 腫瘤熱療是

9、利用物理能量在組織中積聚而產(chǎn)生熱效應(yīng),使腫瘤組織溫度上升到有效治療溫度,并維持一段時間,以殺死癌細(xì)胞,又不損傷正常細(xì)胞的一種治療方法2-3. 腫瘤新輔助熱化療即化療聯(lián)合熱療,可能成為臨床上一種新的腫瘤治療的方法. 實體腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴新生血管的形成，而MVD與腫瘤浸潤、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性密切相關(guān). MVD可作為判斷腫瘤預(yù)后的獨立指標(biāo). VEGF為特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、分裂，促進(jìn)新的血管生成，同時可引起細(xì)胞外基質(zhì)改變而有利干腫瘤細(xì)胞在合適的微環(huán)境形成新的轉(zhuǎn)移灶4-5. 我們檢測新輔助化療及新輔助熱化療前后的MVD值和血清VEGF含量，新輔助熱化療和新輔助化療

10、后患者M(jìn)VD值和血清VEGF水平較化療前顯著下降，而新輔助熱化療較之新輔助化療更能有效降低腫瘤血管密度及血清VEGF. 提示新輔助熱化療可能通過減少腫瘤的血管形成，破壞其血流供應(yīng)而達(dá)到抑制腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的作用. 其機(jī)制可能由于熱化療使腫瘤部位的熱量蓄積, 局部溫度高于周圍正常組織溫度, 使化療藥物的作用具有定向性. 熱化療可以使腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接增多，間隙減小，血管壁變厚;甚至可以導(dǎo)致新生血管只有完整的基膜而缺乏內(nèi)皮細(xì)胞，通過抑制腫瘤細(xì)胞合成與分泌VEGF，從而減少VEGF對血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激所引起的血管過度增生6. 研究結(jié)果顯示，新輔助熱化療可使乳腺癌MVD和血清VEGF含量下降，提示

11、其在乳腺癌臨床治療中可能具有重要意義. 但新輔助熱化療目前仍處在未成熟的研究階段,仍有大量問題有待于進(jìn)一步深入研究和解決. 例如: 熱療的劑量學(xué)、深部精確無損測溫、與化療達(dá)到最大協(xié)同作用的間隔時間和次序等，這方面的研究報道還相對較少，相信隨著臨床研究的深入,腫瘤熱化療在腫瘤綜合治療中將會越來越顯示出它的作用. 【參考文獻(xiàn)】 1 Nyberg P, Xie L, Kalluri R. Endogenous inhibitors of angiogenesisJ. Cancer Res, 2005, 65:3967-3979. 2 蔣東，鄭世營，陳鎖成,等. 全身熱療與腫瘤細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展J. 醫(yī)學(xué)綜述, 2008,14:51-52. 3 Falk MH, Issels RD. HypexthexmiinoncologyJ. Int J Hyperxthermia, 2001,17:1-18. 4 Bellon G, Martiny L, Robinet A. Matrix metallopmteinases and matrikines in angiogenesisJ. Crit Rev Oncol