流式細胞術_百替生物

1、 第二十三章流式細胞術Chapter 23 Flow Cytometry第一部分 教學內(nèi)容和要求一、目的要求·掌握:流式細胞儀分析和分選原理、數(shù)據(jù)的顯示與分析,流式細胞儀免疫分析;熟悉:流式細胞儀在免疫學中的應用;了解:流式細胞儀的組成及在免疫分析的質(zhì)量控制。二、教學內(nèi)容1。流式細胞儀的原理:流式細胞儀工作原理,細胞散射光信號測定,細胞熒光信號測定,細胞分選的原理2。數(shù)據(jù)的顯示與分析:參數(shù),數(shù)據(jù)顯示方式。3。流式細胞儀免疫分析:免疫檢測樣本的制備,常用的熒光染料與標記染色,流式細胞儀免疫分析的質(zhì)量控制。4.流式細胞術在免疫學中的應用:淋巴細胞及其亞群的測定,淋巴細胞功能測定,白血病細

2、胞免疫分型,腫瘤耐藥基因分析,AIDS病程分析,自身免疫性疾病相關HLA分析。第二部分 測試題一、選擇題(一單項選擇題(A型題1.流式細胞儀的單參數(shù)數(shù)據(jù)顯示方式是A.二維的散點圖B.等高線輪廓圖C.分布直方圖D.密度圖E.三維立體顯示2.關于前向散射光信號,正確的是A.反映細胞質(zhì)中的顆粒成分B.可排除各種碎片對被檢細胞的干擾C.用于區(qū)分淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞等D.細胞凋亡時,前向散射光信號變強E.反映細胞內(nèi)部結構的形態(tài)學改變3.關于流式細胞儀,錯誤的敘述是A.可同時測量同一細胞的多個參數(shù)B.采用List Mode數(shù)據(jù)貯存方式C.標準熒光微球和戊二醛固定的雞紅細胞是常用的質(zhì)控參考標準D.

3、只有一種數(shù)據(jù)顯示方式E.12min內(nèi)就能完成細胞大群體的定量分析4.分離外周血單個核細胞的常用方法是A.ELISAB.E花環(huán)試驗C.尼龍毛法E.聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法(二多項選擇題(X型題1.流式細胞儀的特點包括A.快速B.單細胞流C.單細胞檢測D.定量E.單細胞照明2.流式細胞儀常用的熒光染料有A.異硫氰酸熒光素B.藻紅蛋白C.PeCy5D.PeCy7E.ECD3.關于流式細胞儀的熒光標記染色,正確的是A.避免使用固定劑B.減少離心C.減少洗滌次數(shù)D.必須在細胞懸液中進行E.一般采用間接熒光免疫標記方法4.流式細胞儀的雙參數(shù)數(shù)據(jù)顯示方式有A.二維散點圖B.三維立體圖C.線性分布直方圖

4、D.對數(shù)分布直方圖E.等高線輪廓圖5.流式細胞術可用于A.檢測血清細胞因子水平B.檢測凋亡細胞C.白血病的免疫學分型D.檢測HLAE.T細胞檢測及其亞群分類6.檢測細胞可采用A.51Cr放法B.流式細胞術C.TUNEL法D.3H-TdR摻入法E.MTT法7.用于檢測T細胞免疫功能的試驗是A.淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗B.細胞毒試驗C.流式細胞術D.溶血空斑試驗E.結核菌素皮膚試驗8.從T細胞中分離CD4+T細胞可用A.磁珠分離法B.流式細胞術C.ELISPOTD.聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法E.TUNEL法9.檢測T細胞亞群可采用的方法是A.間接凝集試驗B.MTT法C.間接熒光免疫法E.沉淀試驗10.

5、流式細胞儀免疫分析的質(zhì)量控制A.儀器的質(zhì)控B. 免疫熒光對照C.雙熒光或多熒光分析中熒光色的標定D.試劑標準化E.操作標準化二、填空題1.流式細胞儀的組成包括_、_和_三部分。2.流式細胞儀的散射光參數(shù)包括 _和_。其中_信號反映細胞的大小,常用于排除樣品中各種碎片對被測細胞的干擾;_信號反映細胞內(nèi)部結構的形態(tài)學信息,常用于區(qū)分外周血樣品中的淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞。3. _和_組成細胞雙信號參數(shù)散點圖,是流式細胞分析中最常用的測量和顯示細胞的方式。4.能對免疫細胞和其他細胞進行快速準確鑒定和分類的技術是_,使用的儀器是_,主要試劑是_。三、名詞解釋1.流式細胞術(flow cytome

6、try,FCM2.細胞分選(cell sorting3.List Mode4.熒光補償技術(fluorescent compensation四、問答題1.簡述流式細胞儀的工作原理。2.論述流式細胞術在免疫學中的應用。3.簡述細胞分選的原理。第三部分參考答案與題解一、選擇題(一單項選擇題(A型題1.C2.B3.D4.E(二多項選擇題(X型題1.ABCDE2.ABCDE3.ABCD4.ABE5.BCDE6.BC7.ABCDE8.AB 9.CD 10.ABCDE二、填空題1.流動室與液流驅(qū)動系統(tǒng)激發(fā)光與光束成形系統(tǒng)細胞信號檢測與分析處理系統(tǒng)2.FS SS FS SS3.FS SS4.流式細胞術流式細

7、胞儀熒光標記的單克隆抗體三、名詞解釋1.流式細胞術:是指借助流式細胞儀,精確、快速地對生物細胞的理化特性和生物學特性進行多參數(shù)定量分析,并對特定細胞群體分選的新技術。2. 細胞分選:是指從細胞群體中將選定的細胞分離出來。3. List Mode方式:是指用表格將每一個被測細胞的眾多原始數(shù)據(jù)全部記錄下來,形成數(shù)據(jù)文件。4. 熒光補償技術:是指利用已知標準樣品或根據(jù)細胞樣品的生物學意義,合理設置各熒光信號之間的相互補償值。四、問答題1.流式細胞儀是一種在計算機技術支持下高度自動化的顯微熒光脈沖分光光度儀,可分為三個部分:(1細胞流動室及其液流驅(qū)動系統(tǒng):細胞樣品和包裹在外的鞘液在氣體正壓的驅(qū)動下一起

8、流經(jīng)流動室,其中的細胞一個一個排列成單行,逐個以相同的速度、相同的軌跡通過檢測區(qū),此為流式細胞儀的單細胞流技術;(2激發(fā)光及其光束成形系統(tǒng):流式細胞儀的激發(fā)光大多采用氬離子氣體激光器,也可采用半導體激光器。儀器中一般都采用兩塊相互垂直放置的柱面透鏡組成光束成形系統(tǒng),對激光束進行適當?shù)木劢?形成截面為橢圓形的照射光斑即檢測區(qū)。橢圓形光斑的檢測區(qū)能保證樣品中細胞是一個一個分別受到光照,并且每一受檢細胞都受到一致的光照激發(fā),此為流式細胞儀中的單細胞照明技術;(3細胞信號檢測與分析處理系統(tǒng):細胞受到激發(fā)光照射時,產(chǎn)生散射光和熒光信號。光電倍增管及其電子線路將每一細胞的光信號轉(zhuǎn)換為相應的電信號,后者再通

9、過模數(shù)轉(zhuǎn)換器( ADC 量化為數(shù)字信號,由計算機采集、分析、顯示與存貯等,此為流式細胞儀的單細胞檢測技術。2.(1淋巴細胞及其亞群的測定:通過FCM檢測淋巴細胞的CD分子,可鑒定淋巴細胞并計算出淋細胞各亞群的百分率;(2淋巴細胞功能測定:通過FCM檢測淋巴細胞的表面受體及各種細胞因子,可區(qū)分各種淋巴細胞,并推測其功能。FCM還可快速測定混合淋巴細胞培養(yǎng)、細胞介導細胞毒、細胞吞噬功能等;(3白血病細胞免疫分型:FCM 能快速、精確地分析白血病細胞系免疫表型的來源及分化階段,用于各種血液腫瘤的原發(fā)性診斷、鑒別、分型分期、療效觀察、殘存瘤細胞檢測、腫瘤復發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)、骨髓移植后的成功與再生檢測;(4腫瘤耐藥基因分析:FCM能快速檢測細胞P-gp表達,報告MDR并提示預測療效,及時更改治療方案;(5AIDS病程分析:通過FCM檢測Th細胞絕對計數(shù)、Th/Tc比值,可及時進行藥物治療干預和療法評估;(6自身免疫性疾病相關HLA分析:通過FCM檢測細胞某些HLA異常表達,可用于多種生理和病理狀態(tài)的研究。3. 細胞分選(cell sorting是指從細胞群體中將選定的細胞分離出來。細胞分選時,振蕩裝置充電產(chǎn)生每秒4萬次的振動頻率,使噴嘴射出一連串均勻的成千上萬個小液滴,流動