高白細(xì)胞性白血病的生物學(xué)特性研究

1、高白細(xì)胞性白血病的生物學(xué)特性研究 您正在瀏覽的臨床醫(yī)學(xué)論文是高白細(xì)胞性白血病的生物學(xué)特性研究【摘要】 本研究探討高白細(xì)胞性白血病(HAL)的生物學(xué)特點(diǎn)及其臨床意義。采用CD45/SSC雙參數(shù)散點(diǎn)圖設(shè)門，應(yīng)用三色流式細(xì)胞術(shù)，對(duì)48例HAL患者及73例NHAL患者骨髓標(biāo)本進(jìn)行免疫分型，并對(duì)其中74例進(jìn)行核型分析。結(jié)果表明：HAL組骨髓象中紅系比例明顯低于NHAL組，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P0.05);AML中HAL組CD14陽(yáng)性率明顯高于NHAL組，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P0.05);ALL中HAL組CD8陽(yáng)性率明顯高于NHAL組，而CD22，cCD79a明顯低于NHAL組，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(

2、P0.05);HAL緩解率低于NHAL。結(jié)論：HAL比NHAL骨髓受抑程度更重，AML中單核細(xì)胞性白血病發(fā)生高白細(xì)胞性白血病的可能性高，ALL中HAL比NHAL更易于表達(dá)T系抗原，HAL的白血病細(xì)胞較NHAL處于更早分化階段，同時(shí)HAL預(yù)后不佳。【關(guān)鍵詞】 高白細(xì)胞性白血病Biological Characteristics of Hyperleukocytic Acute LeukemiaAbstract The study was to investigate the biological characteristics of hyperleucocyte acute leukemia (

3、HAL) and its clinical significance. Immunophenotyping was performed in 48 HAL patients and 73 NHAL patients by three-color flow cytometry analysis using CD45/SSC gating，meanwhile the cytogenetic analysis was performed in 74 patients. The results showed that as compared with NHAL group，HAL group had

4、lower proportion of eryth-lineage in bone marrow (P0.05); in AML，the CD14 expression of HAL group was apparently higher than that of NHAL group (P0.05); in ALL，HAL group had higher expression of CD8 and lower expression of CD22，cCD79a compared with NHAL group (P0.05). The CR rate of HAL group was lo

5、wer than that of NHAL group. It is concluded that bone marrow inhibition of HAL group is more severe than that of NHAL group. In AML，monocytic leukemia is easier to become into HAL than other leukemias. In ALL，T-lineage antigens of HAL group are more easily expressed than those of NHAL group; the le

6、ukemia cells of HAL group are naiver than those of NHAL group，meanwhile the prognosis of HAL is poor.Key words hyperleucocyte acute leukemia; leukemia; immunophenotype急性白血病外周血象中白細(xì)胞計(jì)數(shù)超過(guò)100109/L時(shí)稱為高白細(xì)胞性白血病(hyperleukocytic acute leukemia，HAL)，約占急性白血病的5%-20%1，其起病急驟，進(jìn)展迅速，緩解率相對(duì)較低2，3，屬急性白血病中的高危類型。為進(jìn)一步了解其惡性

7、本質(zhì)，現(xiàn)對(duì)1組高白細(xì)胞性白血病患者的生物學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行研究，希望能為高白細(xì)胞性白血病的臨床治療及預(yù)后分析提供參考。材料和方法病例48例患者均為我院住院病人，均按我國(guó)AL診斷標(biāo)準(zhǔn)4明確診斷，以外周血WBC100109/L者作為研究對(duì)象。48例中男32例，女16例，年齡2-71歲，中位年齡23歲。AML 26例，其中M1 5例，M2 7例，M3 3例，M4 2例，M5 9例。ALL 22例，其中L1 3例，L2 19例。另選同期住院的73例非高白細(xì)胞急性白血病(non-hyperleukocytic acute leukemia，NHAL)患者作為對(duì)照組，其中男40例，女33例，年齡2-79歲，中位年

8、齡19歲。AML 41例，其中M1 8例，M2 16例，M3 9例，M4 2例，M5 6例。ALL 32例，其中L1 5例，L2 24例，L3 3例。形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色骨髓及外周血涂片經(jīng)瑞氏染色分類計(jì)數(shù)，經(jīng)髓過(guò)氧化物酶(MPO)，氯醋酸AS-D奈酚酯酶(CE)、酸性非特異性酯酶(ANAE)及糖原(PAS)染色檢查，采用FAB分類標(biāo)準(zhǔn)確定各例急性白血病的類型。免疫分型檢測(cè)取肝素抗凝骨髓液2 ml，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離獲取單個(gè)核細(xì)胞，采用直接免疫熒光技術(shù)三標(biāo)記法分析，以CD45/SSC雙參數(shù)散點(diǎn)圖設(shè)門，測(cè)定結(jié)果采用CellQuest軟件進(jìn)行分析。流式細(xì)胞儀為FACS Calibur，以FITC、

9、PE、PRECP作為熒光劑標(biāo)記抗體。單克隆抗體的選擇包括髓系相關(guān)的CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33、CD117、Mpo;T系相關(guān)的CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8;B系相關(guān)的CD10、CD19、CD20、CD22、cCD79a，干/祖細(xì)胞系的CD34、HLA-DR(以上試劑，儀器均由美國(guó)Becton Dickinson公司生產(chǎn))。結(jié)果判斷：通過(guò)CD45/SSC設(shè)門識(shí)別白血病幼稚細(xì)胞，分析計(jì)算該幼稚細(xì)胞群中各白血病相關(guān)抗原的陽(yáng)性率;除MPO10%為陽(yáng)性外，其他抗原陽(yáng)性率以20%計(jì)算為陽(yáng)性。細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)均采用骨髓細(xì)胞直接法，按常規(guī)收獲骨髓細(xì)胞制備染色體標(biāo)本進(jìn)行G顯

10、帶處理，根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN)的規(guī)定行核型分析。治療方案HAL組中12例曾進(jìn)行白細(xì)胞單采術(shù)，次數(shù)為1-3次，其中3例單采3次后WBC仍大于100109/L，其余白細(xì)胞增高均得到糾正。36例用羥基脲和(或)環(huán)磷酰胺預(yù)處理，其中4例至出院時(shí)WBC未降至50109/L以下，其余在3-14天內(nèi)WBC小于50109/L，中位時(shí)間為5天。HAL組中，33例進(jìn)行聯(lián)合化療，NHAL組中，67例進(jìn)行聯(lián)合化療。AML中除M3用維甲酸和(或)亞砷酸治療外，其余主要以DA或IA方案。ALL主要以DVCP或DVLP方案化療。療效判定按全國(guó)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)4。HAL組化療后6例至出院(死亡)時(shí)始終處于骨髓受抑

11、階段，其余病人骨髓受抑中位時(shí)間為10天(5-15天)，NHAL組化療后骨髓受抑中位時(shí)間為10天(3-18天)，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，2檢驗(yàn)。結(jié)果外周血象及骨髓象HAL組治療前白細(xì)胞計(jì)數(shù)中位值為146.7109/L(100.0-563.3)109/L，NHAL組為10.13109/L(0.6-86.7)109/L，兩組比較差異有顯著性(P0.05);HAL組血小板計(jì)數(shù)中位值為40109/L(8-338)109/L，NHAL組為37109/L(6-666)109/L，兩組比較差異無(wú)顯著性(P0.05)。骨髓象中原始+幼稚細(xì)胞數(shù)，HAL組中位值為84.5%(50.5%

12、-99.0%)，NHAL組為83.0%(21.5%-97.5%)，兩組比較差異無(wú)顯著性(P0.05);紅細(xì)胞比例HAL組中位值為1%(0.5%-13.0%)，NHAL組為3.25%(0.5%-48.5%)，兩組比較差異有顯著性(P50%。NHAL組中，除CD14外，其余抗原陽(yáng)性率均50%。淋系抗原中，HAL組及NHAL組中僅見CD4表達(dá)陽(yáng)性率50%，分別為88.9%及100%。所有AML中，26例HAL及41例NHAL，髓系抗原陽(yáng)性率最高者皆為CD33(92.3%，97.6%)，而CD13、CD15、CD117、Mpo陽(yáng)性率均大于50%;HAL組CD14陽(yáng)性率(30.8%)明顯大于NHAL組(

13、4.9%)，差異具有顯著性(P50%(61.5%，51.2%)外，其余均50%。HAL和NHAL組髓系相關(guān)抗原中，均為CD13陽(yáng)性率最高(52.6%，50%)。干/祖細(xì)胞系抗原中，兩組均為HLA-DR陽(yáng)性率(63.2%，91.7%)高于CD34(57.9%，70.8%)。HAL中無(wú)1例L3;NHAL中3例L3均表達(dá)B系抗原CD10，CD19(100%)，2例表達(dá)CD22，cCD79a(66.7%);無(wú)1例表達(dá)T系抗原;髓系抗原中僅見1例表達(dá)CD33(33.3%)。 干/祖細(xì)胞系的抗原中，HLA-DR陽(yáng)性率(100%)高于CD34(66.7%)。所有ALL中，HAL組T系抗原陽(yáng)性率最高者為CD5

14、，CD7(40.9%)，NHAL組則為CD4(21.9%)。B系抗原在兩組均為CD19陽(yáng)性率最高，分別為77.3%，81.3%，另HAL中CD10陽(yáng)性率50% (59.1%)，NHAL中CD10，CD22，cCD79a50%。髓系相關(guān)抗原中，HAL組CD13陽(yáng)性率最高，為50%，NHAL組CD33則為最高，但也僅40.6%。干/祖細(xì)胞系抗原中，兩組均為HLA-DR陽(yáng)性率(59.1%，87.5%)高于CD34(54.5%，71.9%)。另外，HAL組CD8陽(yáng)性率明顯高于NHAL組，而CD22，cCD79a陽(yáng)性率明顯低于NHAL組，且差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P0.05)。ALL中，HAL與NHAL

15、組抗原表達(dá)情況與CR的關(guān)系見表2。Table 2. Relationship between antigen expression and CR in ALL(略)HAL的核型特點(diǎn)26例AML高白細(xì)胞性白血病患者中，10例做過(guò)染色體核型分析，其中6例為正常核型，2例放棄治療，1例死亡，3例完全緩解。其余4例均為染色體易位，3例為t (15;17)(q22;q11)，1 例完全緩解，2例未緩解;1例為t(8;21)(q22;q22)，放棄治療。41例非高白細(xì)胞性白血病患者中，30例做過(guò)核型分析，其中13例為正常核型，11例完全緩解，2例未緩解。6例伴有染色體易位，其中3例為t(8;21)(q22

16、;q22)，均達(dá)完全緩解;1例為t(15;17)(q22;q11)，完全緩解;2例為t(9;22)(q34;q11)，1例完全緩解，1例未緩解。另1例為del(17)(q25)，未達(dá)完全緩解，1例為dup(1)(q32-41)，完全緩解。其余9例為數(shù)目異常，其中除1例放棄治療，1例+21號(hào)染色體患者未緩解外，均達(dá)完全緩解。22例ALL高白細(xì)胞性白血病患者中，13例做過(guò)核型分析，其中6例為正常核型，1例死亡，1例放棄，其余4例均未緩解。3例為染色體易位，分別為t(11;14)(p13;q11)，t(2;16)(p13;q22)，t(9;22)(q34;q11)，均未完全緩解。另4例為染色體數(shù)目異

17、常，均完全緩解。32例非高白細(xì)胞性白血病患者中，21例做過(guò)核型分析，其中15例為正常核型，1例放棄，11例完全緩解，3例未緩解。1例伴染色體易位，為t(9;22)(q34;q11)，未緩解。其余5例為染色體數(shù)目異常，均達(dá)完全緩解。討論HAL屬急性白血病中的高危類型，易合并顱內(nèi)出血、梗死、ARDS等危及生命的并發(fā)癥;化療過(guò)程中大量白血病細(xì)胞死亡，易致“腫瘤溶解綜合癥”，組織凝血因子大量釋放，導(dǎo)致DIC發(fā)生及一系列代謝異常，從而加重患者病情，故HAL早期病死率較高3，預(yù)后差。本組資料中，26例AML高白細(xì)胞性白血病患者中M5 9例，發(fā)生率為34.6%;而NHAL的41例AML中M5僅為6例，發(fā)生率

18、為14.6%，提示M5型發(fā)生高白細(xì)胞性白血病可能性大，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義，國(guó)內(nèi)亦未見相關(guān)報(bào)道。在血象與骨髓象檢查中，HAL與NHAL在外周血血紅蛋白量、血小板計(jì)數(shù)及骨髓中原始細(xì)胞+幼稚細(xì)胞數(shù)方面均無(wú)顯著差異，但HAL組骨髓中紅系比例明顯低于NHAL組，提示HAL骨髓受抑程度較NHAL為重。HAL免疫學(xué)特點(diǎn)尚未引起其他人注意，通過(guò)CNKI檢索，1997年至今國(guó)內(nèi)尚無(wú)人報(bào)道。AML中，無(wú)論是HAL還是NHAL，髓系抗原表達(dá)陽(yáng)性率最高均為CD33、CD13均高于文獻(xiàn)中Drexler5總結(jié)的758例AML中的表達(dá)率(81%，84%)，但HAL和NHAL之間其表達(dá)并無(wú)明顯差異。所以這兩種抗原作為髓系

19、的特異性抗原較為可靠，但在HAL與NHAL的比較上沒有意義。CD14是髓系單核細(xì)胞相關(guān)性抗原，且被認(rèn)為屬預(yù)后較差的免疫表型，國(guó)內(nèi)外報(bào)道在AML中的表達(dá)率約為20%左右5，在所有67例AML中，其表達(dá)陽(yáng)性率為14.9%，本研究與此報(bào)道較為一致。但在HAL中，其陽(yáng)性率高達(dá)30.8%，高于NHAL組的4.9%，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義，與前述M5型發(fā)生高白細(xì)胞性白血病可能性大剛好對(duì)應(yīng);即使單獨(dú)在M4，M5兩型中比較，CD14陽(yáng)性率在HAL組也高于NHAL組，與前文所述HAL預(yù)后不佳亦剛好相符。ALL中，無(wú)論是HAL組還是NHAL組，淋系相關(guān)抗原中陽(yáng)性率最高的均為CD19，CD10，此2種抗原均為B系

20、抗原。從表1、表2也可看到B系抗原在2組中陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于T系抗原，說(shuō)明ALL中，B-ALL的比例高，與文獻(xiàn)6，7報(bào)道一致，但就在HAL與NHAL兩組之間的比較來(lái)說(shuō)，B系抗原的表達(dá)并無(wú)明顯差異。另外，因?yàn)锳LL-L1，HAL組主要表達(dá)T系抗原，而NHAL則主要表達(dá)B系抗原，是否提示，L1中T-ALL發(fā)生高白可能性高于B-ALL，但因病例數(shù)較少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。HAL中CD8陽(yáng)性率明顯高于NHAL組，而CD8是特異性的T細(xì)胞表面標(biāo)記;另HAL中CD22，cCD79a的陽(yáng)性率明顯低于NHAL組，而CD22，cCD79a均為較成熟的B細(xì)胞標(biāo)記。以上兩者綜合起來(lái)，說(shuō)明HAL比NHAL更易于表

21、達(dá)T系抗原;而且HAL中，白血病細(xì)胞較NHAL組處于更早分化階段。Ferrare等8對(duì)417例AML及370例ALL進(jìn)行免疫分型，AML中系列專一性表達(dá)為65%，ALL為85%;交叉表達(dá)在AML中有31%，ALL有15%，其余為“裸細(xì)胞型”。但在本研究資料中，HAL組與NHAL組系列專一性表達(dá)均低于此報(bào)道，且HAL組更為明顯，這可能與檢測(cè)方法陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)差異有關(guān)。雖然HAL組系列專一性表達(dá)率低于NHAL組，但2組差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而交叉表達(dá)中，多數(shù)是伴T系抗原表達(dá)，且多為CD4陽(yáng)性，而CD4在M5中的陽(yáng)性率在HAL組高達(dá)88.9%，在NHAL組更達(dá)100%，與王興兵等研究結(jié)果一致9;若將CD

22、4不包括在T系抗原中，則HAL組僅3例伴T系抗原表達(dá)，NHAL組也從26例減至11例，故CD4作為T系的特異性抗原應(yīng)有所保留。但是即使不將CD4包含在T系抗原中，HAL與NHAL組伴T系抗原表達(dá)者差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ALL中，專一表達(dá)淋系抗原比例也明顯低于上述報(bào)道，和AML組相同，HAL組系列專一性表達(dá)者比例亦低于NHAL組，但2組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在髓系抗原中，HAL組CD13陽(yáng)性率最高，NHAL組CD33陽(yáng)性率最高，但這2種抗原在2組中的表達(dá)差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AML中，HAL組專一表達(dá)髓系抗原CR率高于交叉表達(dá)者;ALL中專一表達(dá)B系抗原與伴髓系抗原表達(dá)者CR率相當(dāng)，但有T系抗原表達(dá)者

23、無(wú)1例達(dá)完全緩解，提示AML中HAL患者專一表達(dá)緩解率高;而ALL中無(wú)T系抗原表達(dá)緩解率高，但因病例數(shù)較少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。據(jù)文獻(xiàn)10報(bào)道，在AL細(xì)胞遺傳學(xué)分析中，預(yù)后好的核型有t(8;21)，inv(16);其次為t(15;17)和正常核型。預(yù)后較差的不良核型有-5/5q-，-7/7q-，inv(3q)，11qabn，17qabn/I(17q)，del(20q)，完整的8，11，13，14號(hào)染色體三體，復(fù)雜的核型異常及del(16)(q22)等。在本研究中，無(wú)論是HAL組還是NHAL組，均未見與上述報(bào)道相關(guān)的不良核型，但即使同為預(yù)后較好的核型，HAL組的CR率亦低于NHAL組。26例AML高白細(xì)胞性白血病患者中，14例經(jīng)過(guò)聯(lián)合化療，7例達(dá)到完全緩解，緩解率為50