腎衰康灌腸液對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠保護(hù)作用的研究

1、腎衰康灌腸液對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠保護(hù)作用的研究         【摘要】  目的 觀察腎衰康灌腸液對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠的影響。方法 采用“單腎切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠腎衰模型。28d后，治療組大鼠每天用高、中、低劑量的腎衰康灌腸液，尿毒清組用20%尿毒清混懸液灌胃。60d后收集尿液，處死大鼠，取血、留取腎組織，測(cè)定血Ca2+ 、P3+及血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、中分子物質(zhì)（MMS）和24小時(shí)尿蛋白定量、尿Ca2+ 、P3+，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果 腎衰康灌腸液對(duì)慢性腎衰竭大鼠的血Ca2+ 、P

2、3+及Scr、BUN和24小時(shí)尿蛋白定量、尿Ca2+ 、P3+有不同程度的改善。結(jié)論 腎衰康灌腸液對(duì)大鼠慢性腎衰竭有一定的保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】  腎衰康灌腸液；大鼠；慢性腎衰   ABSTRACT：Objective To observe the effect of Shenshuaikang Guanchangye on chronic renal failure rats. Methods The method of single kidney nephrectomy with gavage adenine was used to establishe th

3、e model of chronic renal failure (CRF) in rats. 28 days later，the rats were administered Shenshuaikang guanchangye or niaoduqing . 60 days later, the rats were killed and the levels of blood creatinine(Scr), urea nitrogen(BUN), calcium ion (Ca2+),phosphorus ion (P3+) and MMS, urine Ca2+, P3+, and 24

4、hour urine protein were determined and analyzed using spss system. Results Shenshuaikang guanchangye could significantly decrease the levels of blood Scr, BUN and P3+, increase the content of Ca2+. Conclusion Shenshuaikang guanchangye has protective effect on CRF rats.   KEY WORDS：Shenshua

5、ikang guanchangye; Rat; Chronic renal failure   慢性腎功能衰竭(chronic renal failure ,CRF ) 是指所有原發(fā)或繼發(fā)性慢性腎臟疾病所致的進(jìn)行性腎功能損害所出現(xiàn)的一系列癥狀或代謝紊亂的臨床綜合征。因腎臟不能維持其排泄代謝廢物、調(diào)節(jié)水鹽和酸堿平衡、分泌和調(diào)節(jié)各種激素代謝等基本功能,從而出現(xiàn)氮質(zhì)血癥、代謝紊亂和各系統(tǒng)受累等一系列臨床癥狀的綜合征。近年來(lái)我國(guó)CRF的發(fā)病率隨著社會(huì)老齡化、高血壓病、糖尿病等疾病的逐年增多，而呈現(xiàn)出明顯上升的趨勢(shì)。CRF屬臨床難治性疾病，大部分病人最后往往發(fā)展為尿毒癥而需依賴于血液

6、透析或腎移植延長(zhǎng)病人的生命,但是因?yàn)樵O(shè)備和費(fèi)用等條件的限制,尚不能全面普及。中藥灌腸法近年來(lái)在緩解CRF癥狀、保護(hù)腎功能、延緩病情發(fā)展方面取得了一定的成就。腎衰康灌腸液由大黃、黃芪、丹參、紅花組成，具有清熱解毒、益氣利尿、活血化瘀的作用。本實(shí)驗(yàn)采用“單腎切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠腎衰(CRF)模型1，研究其對(duì)慢性腎衰竭大鼠的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。    1  材料與方法   1.1  動(dòng)物與分組   健康雄性Wistar大鼠70只，體重200±20 g(武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供)。隨機(jī)

7、分為正常組、假手術(shù)組、CRF模型組、尿毒清組及腎衰康高、中、低劑量組，每組10只。   1.2  藥物與試劑   腎衰康灌腸液，海南天元制藥廠（批號(hào): 20070617）；腺嘌呤，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司（批號(hào): 20070925）；尿毒清，廣州康臣藥業(yè)有限公司，（批號(hào): 20060303）   1.3  CRF大鼠模型制備   大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，除正常組外，假手術(shù)組和模型組大鼠行左腎全切除術(shù)。大鼠經(jīng)10%水合氯醛  (0.15mL/100g)腹腔注射麻醉，取俯臥位將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)

8、上，背部手術(shù)區(qū)常規(guī)備皮，酒精消毒，以肋脊角為標(biāo)志作左側(cè)背部斜切口，于脊柱旁開(kāi)0.5cm處，切開(kāi)皮膚。分離腰大肌，進(jìn)入后腹膜，找到腎臟，充分暴露左側(cè)腎臟后，用蚊式彎止血鉗在腎門(mén)下夾閉腎蒂，確認(rèn)腎動(dòng)脈、靜脈和輸尿管均包括在內(nèi)后，用4號(hào)絲線在鉗夾處結(jié)扎。暫不剪斷結(jié)扎線頭，用剪刀剪斷結(jié)扎線上部腎蒂，摘除腎臟然后清理腹腔，提起未剪斷的腎蒂結(jié)扎線頭，并將結(jié)扎的腎蒂放入腹腔，確認(rèn)無(wú)出血后剪斷結(jié)扎線頭。觀察腎蒂殘端無(wú)滲血，關(guān)閉腹腔，1號(hào)線分層縫合肌肉和皮膚。術(shù)后1周大鼠傷口愈合，正常組、假手術(shù)組大鼠用生理鹽水灌胃，其余各組大鼠每天以200mg·kg-1·d-1劑量的腺嘌呤混懸液灌胃，連續(xù)2

9、8d。   1.4  給藥方法   尿毒清組大鼠灌胃給藥，劑量為2.1 g·kg-1·d-1，腎衰康高、中、低劑量組給腎衰康，劑量分別為10， 6，2 g·kg-1·d-1，1次/d，連續(xù)給藥60天。正常組、假手術(shù)組、CRF模型組給等體積生理鹽水。   1.5  指標(biāo)測(cè)定   大鼠連續(xù)給藥60d后，各組大鼠分別置代謝籠收集24h尿液，自動(dòng)生化分析儀(Beckman,美國(guó))測(cè)定24h尿蛋白及尿鈣(Ca2+) 、尿磷(P3+)含量。   大

10、鼠稱重，禁食12h，眼眶取血56 ml，3000rpm離心20 min，分離血清，自動(dòng)生化分析儀(Beckman,美國(guó))測(cè)定血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、Ca2+、P3+及中分子物質(zhì)(MMS)。   1.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析   采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并用q檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。            2  結(jié)  果   2.1  腺嘌呤對(duì)大鼠血及尿生化指標(biāo)的影響 

11、;  由表1可見(jiàn)，大鼠給予腺嘌呤后，血Scr、BUN及尿量、24 h尿蛋白含量均明顯升高，與正常對(duì)照組比較，差異具高度顯著性(P0.01)。而大鼠在給予腺嘌呤28d后，體重則顯明減輕，表明腺嘌呤CRF模型是成功的。表1  腺嘌呤對(duì)大鼠血及尿生化指標(biāo)的影響與正常對(duì)照組比較，*P0.01   2.2  腎衰康灌腸液對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響   2.3  腎衰康灌腸液對(duì)大鼠尿量及24小時(shí)尿生化指標(biāo)的影響   模型組大鼠24h尿量、24h尿蛋白及尿Ca2+均顯著升高，而24h尿P則顯著降低，與正常對(duì)照組

12、比較，差異具高度顯著性(P0.01)。大鼠在給予腎衰康灌腸液后，高、中、低3個(gè)劑量均可部分恢復(fù)腺嘌呤所致大鼠24h尿量及24h尿蛋白、尿Ca2+、尿P3+的改變，與模型組比較，差異具顯著性或高度顯著性(P0.05，P0.01)。見(jiàn)表3。表3  腎衰康灌腸液對(duì)大鼠對(duì)大鼠24小時(shí)尿量及尿生化指標(biāo)的影響（與正常對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01；與模型組比較，#P0.05，#P0.01    3  討  論   中醫(yī)臨床強(qiáng)調(diào)辨證論治，但符合中醫(yī)辨證要求的慢性腎衰竭“病證結(jié)合”動(dòng)物模型很少，目前僅有腺嘌呤誘發(fā)大鼠慢性腎

13、衰竭的動(dòng)物模型、腎切除結(jié)合服用丙基硫氧嘧啶制作的慢性腎衰竭模型兩種。用大鼠單腎切除術(shù)加腺嘌呤灌胃法建立改良的腺嘌呤大鼠慢性腎衰竭模型3,4，該模型的特點(diǎn)是:由于腺嘌呤直接引起腎小管間質(zhì)損害，導(dǎo)致腎小管間質(zhì)纖維化，引起大鼠慢性腎衰竭;腺嘌呤按大鼠體重采用混懸液灌胃法造模，避免了在采用腺嘌呤飼料喂養(yǎng)法時(shí)大鼠因食量不同而致腺嘌呤用量的差異，且單腎切除后實(shí)驗(yàn)周期短，模型較穩(wěn)定，腺嘌呤用量減少因而對(duì)其他器官的損害小。   慢性腎功能衰竭是多種腎臟疾病的終末階段,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)證明,慢性腎功能衰竭時(shí)通過(guò)腎臟排泄的尿素氮和肌酐明顯減少,而通過(guò)腸道排泄的部分明顯增加,最多可占機(jī)體排出總量的3

14、0%。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,慢性腎功能衰竭以濕濁內(nèi)阻、瘀毒留滯為主,應(yīng)以瀉濁排毒、通下瀉濁、活血化瘀、清熱解毒為原則。目前已有研究者采用中藥灌腸療法治療慢性腎功能衰竭,并取得較好的效果。我們選用腎衰康灌腸液對(duì)CRF大鼠進(jìn)行治療，結(jié)果顯示腎衰康灌腸液能顯著改善腺嘌呤CRF大鼠模型血、尿各項(xiàng)生化指標(biāo)，表明腎衰康灌腸液對(duì)CRF具有較好的治療作用。同時(shí)，我們注意到，用腎衰康灌腸液治療CRF，不僅能降低BUN、Scr，而且能在一定程度上糾正鈣磷代謝紊亂，促進(jìn)氮質(zhì)排泄，改善尿毒癥的合并癥。目前認(rèn)為，分子量在5005000之間的MMS，作為尿毒癥中毒本源性物質(zhì)，現(xiàn)已引起了普遍關(guān)注。MMS的不同組分具有各不相同的生物學(xué)作用，如抑制紅細(xì)胞生成、抑制血紅蛋白合成、抑制體內(nèi)多種酶的活性等。這些生物作用在CRF的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。本研究表明腎衰康灌腸液也具有降低MMS的作用，從而降低機(jī)體的損傷程度【參考文獻(xiàn)】  1趙宗江，魏晨，楊美娟，等.溫脾湯對(duì)腺嘌呤性慢性腎衰竭大鼠腎功能的保護(hù)作用J.