血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法分析

1、血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法分析關(guān)鍵詞 血吸蟲病；免疫學(xué)檢驗(yàn)；細(xì)胞 在血吸蟲病的免疫學(xué)診斷中，除試用過幾乎所有的各種免疫學(xué)檢驗(yàn)方法外，還有以血吸蟲尾蚴和蟲卵作為抗原的尾蚴膜試驗(yàn)和環(huán)卵沉淀試驗(yàn)。敏感性、特異性較高且使用廣泛的主要的試驗(yàn)方法有皮內(nèi)試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。 1 資料與方法 1.1 一般資料 為型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。當(dāng)經(jīng)皮內(nèi)注入血吸蟲抗原時，抗原與相應(yīng)IgE抗體結(jié)合，引起肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞脫顆粒，釋放組織胺使毛細(xì)血管擴(kuò)張，血管壁通透性增強(qiáng)，出現(xiàn)丘疹和紅暈等反應(yīng)。成熟蟲卵內(nèi)毛蚴的分泌排泄物具有良好的抗原性，它從蟲卵內(nèi)滲出后；如與血吸蟲感染者的血清作用時，可在蟲卵周圍形

2、成特異性沉淀物。用可溶性血吸蟲卵抗原致敏的綿羊紅細(xì)胞與患者血清中的相應(yīng)抗體，可呈現(xiàn)凝集反應(yīng)。同間接ELISA，用日本血吸蟲卵可溶性抗原包板，檢測血清標(biāo)本中的抗體。 1.2 方法 有2種。一種為18 000成蟲干粉冷熱浸抗原，另一種為13 000新鮮成蟲勻漿抗原。按無菌操作用結(jié)核菌素注射器，26號皮試針頭于受試者前臂屈側(cè)面注入血吸蟲抗原0.03 ml。亦可用一直徑0.5 cm的印章在前臂做一印記，注入抗原布滿整個圓面積，注射量相當(dāng)于0.03 ml。15 min后觀察結(jié)果，測量丘疹的最大直徑，凡等于或大于0.8 cm即為陽性反應(yīng)1。 國內(nèi)有成品供應(yīng)。 國內(nèi)有相應(yīng)的供應(yīng)。操作方法：嚴(yán)格按試劑盒說明書

3、操作。用微量滴管加4滴（25 l/滴）0.9%氯化鈉溶液于U型微量血凝板第一排、第二孔內(nèi)，第三孔空白，第四孔加1滴。第一孔內(nèi)加待檢血清，混勻，從中吸取血清1滴加入第二孔內(nèi)，充分混勻后吸出2滴，于第三孔和第四孔各加1滴，在第四孔混勻后棄去1滴，使第三孔和第四孔血清稀釋度為15和110。將凍干致敏紅細(xì)胞試劑按說明書用蒸餾水稀釋后；用定量吸管吸取致敏紅細(xì)胞懸液，于第三孔和第四孔各加1滴（25/l），立即旋轉(zhuǎn)震搖2 min，室溫下靜置1 h左右，觀察結(jié)果。判讀標(biāo)準(zhǔn)同一般間接血凝試驗(yàn)，以血清大于或等于110稀釋出現(xiàn)陽性反應(yīng)判為血吸蟲病患者。 包被抗原，國內(nèi)有成品供應(yīng)。其余試劑同一般ELISA。操作方法：

4、同間接ELISA，原則上用13 000稀釋的1%日本血吸蟲可溶性蟲卵粗抗原包被聚苯乙烯板，每孔200 l，置4過夜，洗滌后，分別加用吐溫-PBS作1200稀釋的血清標(biāo)本，陰、陽性參考血清每孔200 l。每個標(biāo)本至少作雙份。對照組不加血清，僅加PBS吐溫，保溫洗滌后，加適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)記抗人IgG，每孔200 l。再經(jīng)保溫洗滌后，按常規(guī)加底物顯色后，用酶標(biāo)比色計(jì)，讀取A492值。以4份鄰苯二胺（OPD）底物及1份2 mol/L硫酸的混合液校正零點(diǎn)3。 2 結(jié)果 加入蟲卵數(shù)量要適當(dāng)，蟲卵過多或過少對反應(yīng)結(jié)果都有一定影響。計(jì)算蟲卵時，均不計(jì)未成熟卵和破卵。檢驗(yàn)每批血清標(biāo)本，應(yīng)同時做一陽性血清對照。本試

5、驗(yàn)可用于滴血濾紙代替血清進(jìn)行反應(yīng)；但將血滴洗脫時，血液被稀釋反應(yīng)強(qiáng)度因而下降。在我國一般不推薦干血濾紙方法乙目前有采用熱處理超聲干卵，PVC薄膜片環(huán)卵反應(yīng)以及雙面膠紙條環(huán)卵反應(yīng)等。 3 討論 皮內(nèi)試驗(yàn)的臨床意義：本試驗(yàn)具有較高敏感性。糞檢陽性者皮試陽性率95%左右，健康人的假陽性反應(yīng)為2%3%。與肺吸蟲的交叉反應(yīng)為7%15%，兒童有時出現(xiàn)假陰性反應(yīng)。本試驗(yàn)一般作為一種普查過篩方法，陽性者再做進(jìn)一步的檢查。對低年齡組人群進(jìn)行皮內(nèi)試驗(yàn)可檢查有無新感染，和用以考核防治效果。臨床上對無血吸蟲病史的疑似血吸蟲患者，可先用皮內(nèi)試驗(yàn)作為輔助診斷，如皮內(nèi)試驗(yàn)陽性再考慮進(jìn)一步確診?；颊咧斡?，在較長時間內(nèi)皮內(nèi)試

6、驗(yàn)始終保持陽性反應(yīng)，因此該法不能用于考核療效。環(huán)卵沉淀試驗(yàn)的臨床意義：患者陽性率平均為97.3%（94.1%100.0%），假陽性率平均為3.1%（2.5%5.6%），對華支睪吸蟲病和絲蟲病患者血清有0.5%嚴(yán)重的交叉反應(yīng)，肺吸蟲患者的交叉反應(yīng)為6.4%。患者接受有效治療后，環(huán)卵反應(yīng)強(qiáng)度逐漸下降。在流行區(qū)，人群環(huán)卵反應(yīng)陽性率的變化可作為評價治療效果，但反應(yīng)陰轉(zhuǎn)需時較長。 間接血凝試驗(yàn)的臨床意義：本法敏感性在93%左右，假陽性率約為2%，肺吸蟲病患者血清可出現(xiàn)交叉反應(yīng)，治療后本法陰轉(zhuǎn)亦較緩慢。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的臨床意義：糞檢蟲卵陽性者的檢出率為97%100%，正常人假陽性率為2%3%。與一般常

7、見寄生蟲無明顯交叉反應(yīng)。用本法檢測曼氏血吸蟲患者時，發(fā)現(xiàn)與旋毛蟲有明顯交叉反應(yīng)。 檢測血吸蟲的各種試驗(yàn)成為臨床輔助診斷的有效手段，在流行病學(xué)調(diào)查中尤具重要作用。 參考文獻(xiàn) 1鄒安琪,周東偉,江志群,等.腦血吸蟲病的免疫診斷與治療J.江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2001,45(1):116-117. 2孫駿謨,田志雄,張?jiān)邬i,等.腦血吸蟲病CT分型探討J.臨床放射學(xué)雜志,1999,17(9):523-525. 3吳文澤,杜新華.螺旋CT延遲重復(fù)掃描對腦血吸蟲性肉芽腫的診斷價值(附49例分析)J.實(shí)用放射學(xué)雜志,2002,17(7):574-575. 4趙純明,況小波.非限鹽結(jié)合中藥治療晚期血吸蟲病難治性腹腔積液的療效觀察J.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,7(26):27.