鴨H5亞型高致病性禽流感疫苗研究進展及其效率影響因素.docx

1、鴨H5亞型高致病性禽流感疫苗研究進展及其效率影響因素蔣文明，陳繼明(中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島266032)摘要：鴨在H5亞型高效病姓禽流感的流行中發(fā)揮重要作用，成功技制鴨H5亞型高致病性禽流感對根除諼搞在家禽中的流行和人類健康具有重要的意義。本文對當前鴨H5亞型高致病性禽流感疫苗使用和研究進展，以及影響疫苗效率的因素(疫苗類型、鴨的品種、免疫程序、疫苗的抗原匹配枚、佐劑、免疫覆蓋率)進行了綜述.關鍵詞：餡；高玫病性禽流感；H5；免疫接種中圖分類號：S852.65文獻標識碼：A文章編號：1005-944X(2015)12-0049-04VaccinesAgainstDuckH5Sub

2、typeHighlyPathogenicAvianInfluenzaandFactorsInfluencingItsEfficiencyJiangWenming.ChenJiming(ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter,Qingdao,Shandong266032)Abstract:DomesticducksplayanimportantroleintheepidemiologyofH5NIhighlypathogenicavianinfluenza(HPAI)viruses.Consequently,successfulcontroloverH5N1

3、HPAIinducksisimportantfortheeradicationofthediseaseinpoultryandforpreventinginfectionsinhumans.HerewereviewedthecurrentsituationandprogressesonduckH5N1HPAIVvaccinesandthefactorsthatinfluencetheefficiencyofvaccines,includingtypesofvaccines,duckspecies,vaccinationschedules,homologybetweenvaccineandcha

4、llengevirus,adjuvants,andvaccinationcoverage.Keywords：duck：highlypathogenicavianinfluenza；H5：vaccination水禽是禽流感病毒(AvianinfluenzaVirus,Al)的主要天然儲存庫。大多數的禽流感病毒可以通過自然或試驗感染鴨，包括高致病性禽流感病毒(Highlypathogenicavianinfluenzavirus,HPAIV),然而，目前關于鴨對AIV感染后免疫反應的知識仍十分有限。H5HPAIV對鴨致病性的差異會直接影響到對該病的監(jiān)測和控制，因為人們很難識別那些無癥狀或輕微癥狀的

5、感染鴨，導致病毒傳播到其它易感家禽，并可能威脅到人類健康?？紤]到H5HPAIV在世界某些地區(qū)的水禽中廣基金項目：科技基礎性工作專項(2012FY111000),青島市科技計劃(14-2-4-105-jch)通訊作者：陳繼明泛存在，因此，為控制H5HPAIV的傳播，降低鴨感染病毒的風險至關重要。在有效控制H5HPAI措施中，除了生物安全措施，免疫接種是一個可以幫助控制H5HPAI的有力工具。1鴨H5HPAI疫苗研究進展1.1新型疫苗臨床上，鴨使用的大多數疫苗是用自然分離的或反向遺傳產生的低致病性禽流感病毒制備的油乳劑滅活疫苗。在預防和控制家禽H5HPA1方面，傳統(tǒng)的滅活疫苗是有效的。然而，疫情仍

6、然在家鴨中不斷發(fā)生。2014年以來，英國、韓國、日本、美國、中國等多個國家相繼發(fā)生鴨H5亞型禽流感疫情。免疫接種的一個新途徑是使用新型病毒載體疫苗，如痘病毒載體，它在北京鴨和番鴨上表現出良好的免疫原性，而且還可以進行1日齡接種。除了痘病毒疫苗，新型疫苗如鴨腸炎病毒(Duckenteritisvirus,DEV)或新城疫病毒(Newcastlediseasevirus.NDV)載體疫苗，也在鴨上進行了評估試驗。Liu等將H5N1病毒的HA基因插入DEV基因組中，構建了重組病毒。鴨免疫攻毒試驗表明，重組體與DEV活疫苗有類似的保護效果，單一劑量免疫3天后就可以誘導針對致死DEV攻毒和致死H5N1H

7、PAIV攻毒的完全保護。結果表明，重組DEV適用于雙價弱毒活疫苗，可以快速和完全保護鴨免受DEV和H5N1HPAIV的攻擊。2006年以來，我國開發(fā)了表達H5N1禽流感病毒HA基因的重組雞NDV,制作NDV和H5N1病毒的雙價疫苗。Ferreira等的一項研究表明，重組NDV疫苗可以誘導11日齡的騾鴨產生體液和細胞免疫反應，H5N1HPA1攻毒后可以獲得完全的臨床保護。但是，也發(fā)現母源抗體會抑制機體對疫苗的免疫反應。12標記疫苗為區(qū)分免疫鴨與感染鴨，應當考慮在血清學監(jiān)測中使用DIVA(DifferentiationofInfectedfromVaccinatedAnimals)策略。一種方法是

8、在疫苗中加入外源抗原，用作免疫接種的陽性標記，如使用破傷風類毒素(TT)標記的H6N2禽流感疫苗兩次免疫后，可以產生高滴度的TT特異性抗體，并可以維持19個周。滅活H6N2疫苗插入TT后，沒有干擾H6或TT的血清陽轉，表明TT可能是-個高度適合的鴨禽流感疫苗的外源標記?；诒磉_H5HA抗原的重組桿狀病毒亞單位禽流感病毒疫苗和帶有標記抗原(TT)的滅活H5N2禽流感疫苗，可以保護幼鴨。2影響鴨疫苗效率的因素影響鴨H5HPAIV疫苗效率的因素很多，包括疫苗類型、鴨的品種、免疫接種程序(接種口齡、接種劑量、有效HA抗原量)、攻毒病毒以及實驗環(huán)境等。針對這些因素的研究和提高對H5HPA1的控制有著重要

9、意義。在大多數情況下，接種疫苗的鴨子可以獲得保護和減少排毒。如果疫苗與流行毒的抗原性匹配良好，免疫方法正確，免疫禽群的排毒量會大大降低，不足以感染接種或未接種疫苗的禽類。2.1疫苗類型臨床上，家鴨使用的大多數疫苗是油乳劑滅活疫苗。由反向遺傳生產的滅活疫苗Re-1,含有A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)的NA基因和修飾的HA基因，能夠保護鴨不出現臨床癥狀，并減少排毒。Re-1疫苗誘導北京幼鴨和番鴨產生低水平到中等水平的抗體滴度，免疫2周后攻毒可以保護它們不發(fā)病，但不能阻止排毒。研究結果表明，單一疫苗接種劑最不足以減少H5N1HPAIV的傳播，因此，加強免疫接種是必需的。Va

10、nderGoot等向的一項研究也證明鴨接種兩次全病毒滅活疫苗可以獲得更好的保護。2.2鴨的品種北京鴨是H5N1HPAI疫苗效率評估研究中使用較多的實驗動物，其它如美洲家鴨、麻鴨、騾鴨、綠頭鴨則相對較少。不同品種的鴨對免疫接種的應答不同，因此試驗條件不相同時很難對結果進行比較。使用禽痘病毒載體疫苗研究顯示，北京鴨和番鴨對疫苗接種存在差異。免疫番鴨的排毒期可長達19天，而北京鴨在任何時間點都沒有檢測到排毒。當感染H5N1HPA1V時，番鴨比其他品種的鴨，如北京鴨、綠頭鴨、康貝爾鴨等表現出更嚴重的臨床癥狀，騾鴨似乎也比番鴨更耐受H5N1病毒感染，表明它們在先天性免疫應答和適應性免疫應答方面存在差異。

11、因此，在實踐中應當考慮不同種類的鴨子對H5N1HPAIV的致病性不同和對免疫接種的應答差異。不管滅活疫苗還是活疫苗，都應當特別關注番鴨，可能需要更多的加強免疫才能獲得與其他鴨子相同水平的保護。2.3免疫接種程序為了探索更有效的接種方法，研究者在北京鴨和番鴨上分別試驗了三種不同的免疫程序，前兩種方法是在1天和14天或7天和21天接種兩個劑量的疫苗，第三個程序是在14天時接種一個劑量的疫苗。結果發(fā)現7天和21天時接種能獲得最好的保護。原因可能是7天時鴨子體內的母源抗體會降低，免疫系統(tǒng)也趨于成熟，所以此時的免疫反應較好。在1天時免疫2個劑量的疫苗，雖然只產生較低的抗體反應，但免疫鴨沒有發(fā)病和死亡。在

12、北京鴨上使用全病毒滅活疫苗和/或禽痘重組病毒疫苗，評估不同免疫接種程序的效率同。研究表明，多種試驗的免疫接種程序都可以提供完全的保護，沒有出現臨床癥狀和排毒。然而，禽痘病毒載體疫苗首免、滅活疫苗加強免疫的鴨子，誘導的抗體應答最廣，表明這種首免加強免疫的策略可以誘導針對H5的最佳免疫力。此外，該免疫接種程序在1日齡試驗鴨上也能誘導很好的免疫力。2.4疫苗和攻毒病毒之間的同源性HA蛋白序列決定了病毒與疫苗之間的同源性。雖然遺傳和抗原距離之間有一定相關性，但也有可能僅僅一個氨基酸導致的特定遺傳差異就會導致抗原性的明顯不同閔。己經發(fā)現流感的抗原距離與HI滴度的對數呈線性相關，這一理論是構建抗原圖譜的基

13、礎。HI試驗中當抗原差異2個以上滴度時，人流感疫苗就需要更新。因為禽和人類在免疫接種中有很多差異，還不清楚這個標準是否適用于禽流感疫苗。大多數疫苗研究中使用的疫苗，與攻毒病毒都有較高的同源性。對遺傳距離較大疫苗的有效性研究較少。Beato等1,01使用H5N2病毒制備的疫苗，與H5N1攻毒病毒HA1蛋白同源性為89%,攻毒后沒有分離到任何病毒。另一項研究中使用H5N2疫苗株，其HA1蛋白與攻毒的H5N1HPAIV同源性為84%,鴨免疫2周后不僅防止嚴重的發(fā)病和死亡出現，也顯著減少了排毒和傳播"J由于試驗設計、疫苗、攻毒病毒不同，從這些研究中很難得出明確的結論。當前在雞上使用疫苗的情況

14、表明同源疫苗免疫可以獲得最好的效果，疫苗與攻毒毒株的距離越遠，保護效果越差。在鴨上接種疫苗也可能出現這種情況。2.5佐劑高效的疫苗不僅需要良好的抗原，也需要良好的佐劑來增強抗原的免疫原性。目前己經開發(fā)了多種肉流感疫苗，并在雞上進行了優(yōu)化，但在鴨子上可能還不是最優(yōu)的。使用三種不同的佐劑(礦物油、MontanideISA70MVG、MonUnideISA206VG)制備疫苗，免疫SPF鴨和雞，發(fā)現三種佐劑誘導的抗體滴度水平相當。另一種增強疫苗免疫原性的方法，是在疫苗中使用細胞因子等免疫刺激分子。Qian等構建了一個共同表達H5N1HPA1V的HA基因和雞1L-6基因的重組禽痘病毒(rFPV-AIH

15、5AIL6),并在鴨上評估其免疫反應。與單純表達HA基因的重組禽痘病毒疫苗相比，rFPV-AIH5AIL6疫苗可誘導更高的抗AIVHI抗體反應，增強淋巴細胞增殖反應，免疫保護效果更好。雞IL-6可能是一個有效的佐劑，增強了禽痘病毒載體AIV疫苗在鴨上的免疫原性。Ya。等咧構建了編碼H5亞型HA與CD154(CD40L)融合的嵌合蛋白DNA疫苗，并在北京鴨上評估其免疫原性和保護效果。該疫苗可以誘導針對不同遺傳譜系的H5HPAIV的保護，但也存在一些缺陷，如需要多個劑量的免疫，因此目前還不適用于臨床使用。一些方法可以改善疫苗的免疫應答，如當番鴨免疫重組禽流感H5滅活病毒疫苗時，同時飼喂蘇菲葡聚糖(

16、一種增強免疫應答的多糖)，也可以增強免疫反應。2.6免疫覆蓋率對于H5HPAI的防控，充分接種足夠數量的鴨子來維持“群體免疫力"是必需的。當免疫鴨不能限制在一個生物安全的位置時，問題就變得復雜。一些國家經常在沒有生物安全措施的開放水域飼養(yǎng)鴨，導致H5HPAI的疫苗接種覆蓋率較差，因此大量的鴨了對病毒易感，可以作為病毒儲存庫傳播H5HPAIVo實際生產中，蛋鴨和種鴨在幼齡時接種過疫苗，但成年鴨子常常沒有進行足夠的加強免疫。以肉類消費為目的水禽常常也不進行免疫接種。因此，實際生產中免疫接種可能永遠不會覆蓋所有的易感禽類，導致疫苗接種的效果大大降低。3小結疫苗免疫接種在H5HPAI的防控中

17、發(fā)揮了重要作用。然而，由于免疫中存在實際困難，以及H5病毒快速的抗原漂移，致使家禽疫情仍有發(fā)生。臨床和實驗室評估結果表明，攻毒病毒、鴨的品種、免疫程序、疫苗是否正確使用、疫苗和流行毒之間的抗原同源性、疫苗中病毒抗原量、佐劑、是否加強免疫接種、免疫覆蓋率等因素，都可能影響到H5疫苗免疫接種的效果，甚至造成免疫失敗。做好H5HPAI的有效防控，除了開發(fā)有效的疫苗接種策略，如適合大規(guī)模疫苗接種的疫苗外，還應建立有效的控制程序，包括免疫后監(jiān)測、嚴格的檢疫、動物移動控制、增加生物安全、消除被感染動物和全面的公眾教育等一系列綜合措施。參考文獻：1 BublotM,Richard-MazctA,Chanav

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