致病性阿米巴原蟲疫苗研究進展.docx

1、文章編號:16732995(2019)050351_04致病性阿米巴原蟲疫苗研究進展王寧寧化府韓漫漫制曲壽月位府姜曉明3®時文艷2®馮憲敏2.®金丹件（1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院j吉林延吉133002!2.吉林醫(yī)藥學(xué)院:吉林吉林13201313.北華大學(xué)檢驗學(xué)院:'吉林吉林132013）摘要：阿米巴原蟲在自然界廣泛分布祐可通過糞一口途徑、黏膜直接接觸等多途徑進行傳播的可產(chǎn)生特殊的酶類侵入并寄生在人體M由于早期診斷不及時、缺乏有效抗阿米巴感染的藥物、難以阻斷傳播途徑府所以預(yù)防至關(guān)重要用因此研發(fā)抗阿米巴原蟲感染的疫苗對疾病的預(yù)防與傳播具有重要意義用關(guān)鍵詞：溶組織阿米巴

2、。棘阿米巴§疫苗研究中圖分類號：R53文獻標志碼：A1溶組織內(nèi)阿米巴原蟲疫苗溶組織內(nèi)阿米巴是腸道寄生蟲n通過受污染的水和食物擴散h感染人體并導(dǎo)致阿米巴病甘溶組織阿米巴病常見于衛(wèi)生條件差、缺乏潔凈水和營養(yǎng)不良的發(fā)展中國家口i成為主要的腹瀉疾病之一i也是發(fā)展中國家兒童死亡的主要原因：約90%的感染無明顯癥狀A(yù)其余10%表現(xiàn)為急性腹瀉、痢疾、阿米巴結(jié)腸炎和阿米巴肝膿腫（ALA）等疾病；臨床上常規(guī)應(yīng)用硝基咪哇類衍生物治療溶組織內(nèi)阿米巴感染取得一定療效月但在發(fā)展中國家和地區(qū)。由于藥物昂貴、不良反應(yīng)多且不易獲得K使感染不能得到及時控制I丐因此開發(fā)溶組織內(nèi)阿米巴疫苗至關(guān)重要Jl.l半乳糖凝集素疫苗

3、候選物溶組織內(nèi)內(nèi)阿米巴具有獨特的毒力特性彳使其能夠適應(yīng)腸道內(nèi)不斷變化的環(huán)境并操縱宿主免疫監(jiān)視系統(tǒng)#其感染發(fā)生的關(guān)鍵在于原蟲與結(jié)腸黏液層的黏附結(jié)合J機體結(jié)腸的黏液層由MUC2黏蛋白組成i形成宿主機體防御的第一道屏障!這一過程足由原蟲表面半乳糖卞一乙?；鵳-半乳糖胺凝集素（galactoseNacetylDgalactosamineinhibitablelectirrGallectin）介導(dǎo)的i結(jié)合黏蛋白的半乳糖和N_乙酰半乳糖胺殘基高親和力結(jié)合N研究發(fā)現(xiàn)有幾種不同的溶組織內(nèi)阿米巴蛋白可作為潛在的疫苗H包括Gal/基金項目：吉林省科技廳國際合作項目（20160414050GH）j吉林省教育廳“十三

4、五”科學(xué)技術(shù)項目（JJKH20180823KJ）!吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目（201740）.作者簡介：王寧寧（1993-）-女（漢族）i碩士研究生.通信作者：馮憲敏（1976）；女（漢族）-教授博士.通信作者：金丹（1972-）1女漢族X教授i博士.GalNAc特異性凝集素和富含絲氨酸的蛋白質(zhì)#以及富含29kDa半胱氨酸的抗原目溶組織內(nèi)阿米巴疫苗研究最廣泛的抗原是GaFlectinfGaClectin是260kDa異源二聚體蛋白it具有較高的免疫原性I)由一個重亞基(170kDa(HgL)和一個輕亞基(31/35kDa-LgL)組成:'二者通過二硫鍵i分別與150kDa中間亞基非共價結(jié)

5、合iGallectin在寄生蟲黏附MUC2黏蛋白和靶向細胞中發(fā)揮主要作用彳導(dǎo)致接觸依賴性殺傷和吞噬作用°"因而成為重要的疫苗候選分子JGaFlectin可誘導(dǎo)樹突狀細胞成熟并促進Th1細胞釋放白細胞介素一12和廠干擾素81!Petri等采用純化的天然Gallectin作為抗原i在沙鼠模型4*引發(fā)了86%的抗ALA保護作用H盡管取得一定陽性數(shù)據(jù)彳但分離純化出天然抗原仍是一個復(fù)雜性的難題鑒于此iSoong等口。1采用170kDa亞基富含半胱氨酸區(qū)域的重組形式aa758_1134-'作為抗溶組織內(nèi)阿米巳的亞單位疫苗被證明是有效的i并命名為LC3H研究發(fā)現(xiàn)ALA患者血清中I

6、gA抗體與LC3區(qū)域具有高親和力i可抑制寄生蟲對倉鼠卵巢細胞的黏附作用K證明抗體可通過阻止溶組織內(nèi)阿米巴對腸上皮細胞的黏附而起作用jGuo等口門利用GalGalNAc凝集素衍生的疫苗免疫小鼠r通過過繼轉(zhuǎn)移實驗證明n這種凝集素疫苗保護是由t細胞介導(dǎo)的R而了一干擾素是機體抵抗阿米巴感染的因素LecA是位于重鏈亞基的富含半胱氨酸區(qū)域內(nèi)的第5781154個氨基酸片段它是黏附阻斷抗體的主要靶標J鑒于此，'Gu。等口2】用從溶組織內(nèi)阿米巴分離的天然Gal/GalNAc凝集素和重組亞基“LecA”分別進行免疫接種#免疫2周后。用滋養(yǎng)體對小鼠進行腦內(nèi)攻擊f結(jié)果表明二者均具有免疫保護性寸使用天然凝集素對

7、小鼠腸道感染和腦感染的保護性分別為84%和100%ifLecA試驗中分別為91%和34%月并在接受免疫接種的小鼠糞便中可檢測到抗凝集素IgA：'Barroso等口們開發(fā)了一種純化方法A通過優(yōu)化密碼子的方法制備高度純化的未標記的LecAf以其免疫CBA小鼠N可有效阻斷溶組織內(nèi)阿米巴對盲腸的侵襲沖1.2溶組織內(nèi)阿米巴多絲氨酸蛋白溶組織內(nèi)阿米巴多絲氨酸蛋白（serinerichentamoebahistolyticaprotein-SREHP）由大量的絲氨酸殘基、8肽和12肽等多個保守序列組成實驗證明SREHP可作為黏附素成為溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體的化學(xué)引誘物J分別用重組SREHP/麥芽糖融合

8、蛋白（組1）、重組麥芽糖融合蛋白/磷酸鹽緩沖鹽水（MBPPBS）（組2）免疫沙鼠！組1沙鼠產(chǎn)生針對天然SHEHP的抗體并且對重組SREHP產(chǎn)生了遲發(fā)型超敏反應(yīng)f對腹腔內(nèi)注入滋養(yǎng)體的沙鼠產(chǎn)生了64%和100%抗ALA保護j但是在MBPPBS免疫對照中未觀察到保護作用，證明了SREHP分子具有作為預(yù)防阿米巴感染的疫苗的潛力購11.3溶組織內(nèi)阿米巴29kDa抗原除GaClectin和SREHP外i溶組織內(nèi)阿米巴29kDa抗原（Eh29）也被認為是抗溶組織內(nèi)阿米巴疫苗的主要靶蛋白FEH29是一種烷基氫過氧化物還原酶H參與由微生物或免疫細胞分泌的活性氧的解毒#研究表明:接種針對EH29的疫苗,54%的倉

9、鼠免受ALAC15；隨后使用與CTB偶聯(lián)的Eh29可刺激機體產(chǎn)生抗EH29特異性IgA和IgG抗體尤其對內(nèi)膜阿米巴病具有顯著的保護作用口6斗1.4溶組織內(nèi)阿米巴硫酸肝素結(jié)合蛋白和30kDa膠原結(jié)合蛋白疫苗最近新發(fā)現(xiàn)用于溶組織內(nèi)阿米巴疫苗設(shè)計的蛋白質(zhì)靶標包括硫酸肝素結(jié)合蛋白（HSBP）和一個30kDa膠原結(jié)合蛋白（CBP30）：Kaur等口門從溶組織內(nèi)阿米巴中分離出與宿主肝素硫酸鹽蛋白結(jié)合的HSBPsi具有良好的免疫原性K初次接種就可刺激豚鼠產(chǎn)生抗HSBPsIgG和IgA的抗體B特別是分泌型IgA抗體）1在隨后的攻擊感染實驗中抗體達到峰值N表明建立了免疫記憶N另有研究者使用與克氏錐蟲熱休克蛋白7

10、0kDa部分融合的重組CBP30免疫倉鼠#與未接種組相比A單獨接種重組CBP30或CBP30融合蛋白的倉鼠ALA形成減少70%1.5溶組織內(nèi)阿米巴DNA疫苗DNA疫苗的研發(fā)迅猛發(fā)展月將編碼特定目的抗原的DNA序列導(dǎo)入細菌質(zhì)粒中B并轉(zhuǎn)化至宿主細胞S目的基因表達并產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)K而后被宿主細胞識別刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體口9；DNA疫苗己被證明可誘導(dǎo)強烈的體液免疫和細胞免疫彳并且在許多動物模型中對病原體賦予了保護作用$一些優(yōu)化策略也可用于改進DNA疫苗K刺激機體產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答并抵抗寄生蟲感染2?！縥Gaucher等舊門以溶組織內(nèi)阿米巴GaClectin重亞基為靶點f并對其編碼基因的密碼子進行優(yōu)化

11、彳構(gòu)建了新型的抗溶組織內(nèi)阿米巳的DNA疫苗N該DNA疫苗在小鼠體內(nèi)刺激產(chǎn)生了Th1型Ga凝集素特異性細胞免疫應(yīng)答i并可有效抑制滋養(yǎng)體在體外對靶細胞的黏附作用孑2棘阿米巴疫苗棘阿米巴是一種機會致病性阿米巴原蟲t其生活史簡單。包括包囊和滋養(yǎng)體兩個階段月棘阿米巴主要感染抵抗力低下的人群*通過破損的皮膚、損傷的眼結(jié)膜、泌尿生殖道等侵入并寄生在人體用主耍侵犯眼部和腦部組織B引起致盲性角膜炎和棘阿米巴腦炎N棘阿米巴性角膜炎己成為人類嚴重的致盲性角膜病之一用病情頑固、治療棘手且預(yù)后不良#發(fā)生本病的危險因素主要有配戴角膜接觸鏡、眼部外傷、接觸污水及機體免疫力低下等匚曰I由于病變早期無明顯臨床癥狀N診斷困難導(dǎo)致

12、誤診并加劇病情惡化M最終只能通過手術(shù)摘除眼內(nèi)容物來治療嚴重影響病人的預(yù)后#因此預(yù)防棘阿米巴感染就尤為重要月棘阿米巴滋養(yǎng)體對角膜上皮的黏附是由廿露糖結(jié)合凝集素（mannosebindinglectinMBL）介導(dǎo)的無Garate等"們設(shè)計了一組對照實驗f分別用MBP聯(lián)合載體B以及僅用載體免疫接種倉鼠用可有效抑制滋養(yǎng)體對角膜上皮細胞的黏附#從而提供對棘阿米巴感染的保護#此外彳有研究表明適應(yīng)性免疫應(yīng)答的補體固定抗體。不能破壞棘阿米巴滋養(yǎng)體或包囊寸而經(jīng)黏膜免疫刺激產(chǎn)生的分泌性IgA抗體巾具有殺死滋養(yǎng)體并能阻止其黏附到眼表面的作用沖但當滋養(yǎng)體與角膜上皮黏附結(jié)合后再免疫接種E則無法發(fā)揮抗感染作用

13、C25l因此i'適應(yīng)性免疫應(yīng)答可以阻止感染過程中的第一步巾但棘阿米巴原蟲一旦進入伯膜就不會起作用iAlizadeh等ms和研究發(fā)現(xiàn)甘露糖誘導(dǎo)的細胞病變蛋白（MIP133蛋白）對角膜上皮細胞具有細胞病變效應(yīng)并且在體外降解膠原蛋白#是引發(fā)角膜疾病所必需的沖并且它可能在棘阿米巴角膜炎的致病級聯(lián)反應(yīng)的后續(xù)步驟中發(fā)揮重要作用用因此成為重要的疫苗候選分子？研究表明'用MIP'133對倉鼠進行黏膜免疫3艮淚中產(chǎn)生抗_MIP_133SIgA抗體i可有效阻斷中國倉鼠角膜的酶降解mij上述研究為抗阿米巴感染的疫苗帶來了希望J盡管這些研究提出了疫苗研發(fā)的靶蛋白彳但還需要進一步的研究來闡明這些

14、蛋白在疾病中的發(fā)病機理和/或寄生蟲代謝中的作用H此外i尚需要更多的免疫試驗來尋找適合動物模型的最佳疫苗方案f參考文獻：1MONDALDi'HAQUER:SACKRB(etal.Attributionofmalnutritiontocausespecificdiarrhealillness:evidencefromaprospectivestudyofpreschoolchildreninMirpurfDhakaBangladeshJ.AmJTropMedHyg-2009-80(5) :824"826.E2HIENBT;，TRANGT-SCHEUTZFetal.Diarrhoe

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