針刺百會、大椎對老年性癡呆大鼠認(rèn)知行為及腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶的影響

1、    針刺百會、大椎對老年性癡呆大鼠認(rèn)知行為及腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶的影響作者：趙立剛 馬莉 程為平 吳茜 鄭祖艷 梅晨健 作者單位：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，黑龍江 哈爾濱 150040【摘要】 目的 探討針刺百會、大椎對AD大鼠認(rèn)知行為及腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶(AChE)含量的影響。方法 選用純系健康雄性Wistar大鼠52只，隨機分為假手術(shù)組、模型組、針刺組和西藥組。采用-淀粉樣蛋白向海馬CA1區(qū)定向注射制作AD模型。針刺組選用“百會”、“大椎”穴進行治療。治療前后檢測各組大鼠的穿梭箱實驗成績和腦組織內(nèi)AChE的含量。結(jié)果 針刺模型大鼠的“百會”

2、、“大椎”穴可以明顯減少AD大鼠在穿梭箱實驗中的電擊次數(shù)和電擊時間(P<0.05)，非常顯著降低腦組織內(nèi)AChE含量(P<0.01)。結(jié)論 采用針刺的方法可明顯改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，并能減少腦內(nèi)AChE的含量?！娟P(guān)鍵詞】 針刺療法;癡呆/老年性;認(rèn)知行為;乙酰膽堿酯酶老年性癡呆，即阿爾茨海默病(AD)是一種以老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)為主要病理改變的進行性神經(jīng)變性疾病1，其病因及發(fā)病機制尚不清楚。迄今尚缺乏療效肯定的藥物治療方法，目前試用的藥物中尚不能改變疾病的進展。同時為了減少各種治療藥物的毒副作用，臨床中我們采用針刺的方法治療本病，取得了較好的療效。為了進一步探討針刺治療AD

3、的機制，本課題采用顱內(nèi)注射法制作AD模型進行動物實驗研究，針刺百會、大椎穴，治療前后進行多項指標(biāo)檢測，以驗證針刺方法的有效性和可行性。1 材料與方法1.1 材料和設(shè)備 選用純系健康Wistar雄性大鼠52只，1820月齡，體重(500±20) g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，室內(nèi)常溫下配料喂養(yǎng)，自由飲食水。乙酰膽堿酯酶(AChE)測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。大鼠程控穿梭箱(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所DCS-2型);腦立體定位儀(NARISHIGE SN-2型);電動離心機(北京醫(yī)用離心機廠 LD5-2型);電熱恒溫水浴箱(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠RF-540型);電熱

4、恒溫培養(yǎng)箱(中國廈門醫(yī)療電子儀器HWB-2型);電動玻璃勻漿機(寧波新芝科學(xué)儀器研究所DY89-1型);分析振蕩器(江蘇泰縣醫(yī)療器械廠FZQ-2型);托盤式扭力天平(上海第二天平儀器廠TN-100B型);722光柵分光光度計(上海第二分析儀器廠)。1.2 方法2 結(jié)果2.1 穿梭箱實驗結(jié)果 見表1。各組術(shù)前(治療前)電擊次數(shù)，電擊時間比較無顯著差異(P>0.05)，提示術(shù)前各組行為學(xué)測試結(jié)果大致相等。治療前后模型組數(shù)據(jù)比較有非常顯著差異(P<0.001)，提示造模成功。治療后，兩治療組與假手術(shù)組比較有顯著差異(P<0.05)。治療后，針刺組與西藥組比較無顯著性差異(P>

5、0.05)。兩治療組與模型組比較有非常顯著差異(P<0.01)，說明針刺和西藥對AD大鼠均有改善作用。表1 各組大鼠行為學(xué)結(jié)果比較(略)與治療前比較：1)P<0.001;與治療后假手術(shù)組比較：2)P<0.01;與模型組比較：3)P<0.012.2 生化指標(biāo)檢測 治療后假手術(shù)組的AChE含量為(0.157 8±0.004 3) mol/ml，模型組的含量為(0.465 3±0.057 1) mol/ml，針刺組為(0.235 6±0.041 5) mol/ml，西藥組為(0.298 4±0.040 5) mol/ml。模型組與其他各

6、組比較，AChE含量升高(P<0.001)，提示造模成功。針刺組和西藥組與模型組比較，AChE含量降低(P<0.01)。提示兩種治療方法均有效，但兩組之間比較無顯著性差異(P>0.05)。3 討論A在腦內(nèi)的纖維狀沉積是AD患者大腦中主要的病理變化4。近年來許多學(xué)者致力于尋找和研究AD動物模型，取得了很大的進展5。Giovannelli等給大鼠基底核注射A-(140)和A-(2535)淀粉樣多肽，結(jié)果在注射部位有剛果紅染色陽性的物質(zhì)積聚，基底核膽堿能神經(jīng)元減少，膽堿?；D(zhuǎn)移酶ChAT免疫活性下降與乙酰膽堿(ACh)釋放減少相平行，大鼠的認(rèn)知功能也發(fā)生障礙6。林煜等7選擇海馬CA

7、1區(qū)進行A微量注射，病理學(xué)觀察顯示注射區(qū)中心為剛果紅染色陽性的A核，其外是受損的神經(jīng)元伴大量小膠質(zhì)細胞浸潤，最外層為反應(yīng)性星形膠質(zhì)細胞包繞。這與典型SP的構(gòu)成基本一致。Y型迷宮檢測顯示模型大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力明顯減退。本實驗正是采用此種方法，較好地模擬了AD的行為學(xué)和病理學(xué)等方面的特征及對生化酶學(xué)產(chǎn)生的影響。經(jīng)臨床驗證，針灸療法對AD的智能及社會活動功能康復(fù)有積極作用，其療效肯定。針灸單穴及復(fù)方治療本病在古代文獻已有記載。難經(jīng)·二十八難云：“督脈者上致風(fēng)府，入屬于腦?！卑贂痛笞稻鶎俣矫}穴位，百會為“三陽五會”，大椎為“諸陽之會”，為手足諸陽之會。督脈與腦密切相關(guān)，督脈通于腦。中醫(yī)學(xué)

8、認(rèn)為腦為髓海，其氣血上沖于蓋(百會)，下在風(fēng)府。AD的病機為氣血兩虧，肝腎不足或氣滯血瘀、痰阻脈絡(luò)而導(dǎo)致氣血不能上養(yǎng)腦竅，進而髓海失聰所致。針刺百會、大椎可以激發(fā)經(jīng)氣，疏通經(jīng)絡(luò)，使腦髓的氣血之榮養(yǎng)而復(fù)聰8。周莉等9觀察到針刺百會、大椎可提高人的即時記憶能力及小鼠的學(xué)習(xí)成績和記憶再現(xiàn)能力，故針刺百會可通督醒腦。膽堿酯酶是膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的水解酶，直接參與自主神經(jīng)功能調(diào)節(jié)、肌肉運動、大腦思維、記憶等重要功能。目前已公認(rèn)，學(xué)習(xí)記憶與中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)關(guān)系極為密切。資料表明，慢性酒精中毒大鼠記憶功能的降低與ACh缺乏有關(guān)10。在中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)中，ACh起著非常重要的作用。中樞膽堿能通路是構(gòu)成

9、學(xué)習(xí)記憶的重要通路，而ACh是其中重要的神經(jīng)遞質(zhì)。它是由膽堿乙?；负铣?，膽堿酯酶分解，通過ACh受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。學(xué)習(xí)記憶的生理過程極其復(fù)雜，而且需高級整合，而ACh作為進行及維持高級神經(jīng)功能的一種重要介質(zhì)，在記憶、思維和智能中起著不可替代的作用。另有一項研究證實，慢性應(yīng)激大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙的同時，海馬ChAT活性降低，ACh含量下降11。近年來研究表明，AD病人腦組織中膽堿乙?；富钚悦黠@降低，膽堿酯酶活性顯著升高，造成ACh含量不足，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶及認(rèn)知功能下降甚至智力喪失12。且已有實驗證實，在AD發(fā)病過程中，大腦組織中的神經(jīng)遞質(zhì)明顯減少，尤其是大腦皮層的A

10、Ch及單胺類遞質(zhì)與血管性癡呆的智力下降密切相關(guān)13。因此通過檢測治療前后腦組織中AChE含量，即可推測出ACh的含量，從而判斷AD大鼠的智能及記憶損害程度。在本實驗結(jié)果表明，針刺AD大鼠的“百會”、“大椎”穴，可能有清除自由基，促進細胞代謝作用，從而降低AChE含量，改善大腦的學(xué)習(xí)記憶功能?！緟⒖嘉墨I】1 王維治.神經(jīng)病學(xué)M.北京：人民衛(wèi)生出版社,2001：249-54.2 劉 建,劉春麗.老年期癡呆的辨證論治初探J.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1996;15(6):2-4.3 林文注.實驗針灸學(xué)M.上海：上海中醫(yī)學(xué)院出版社,1989:87.4 姜招峰.-淀粉樣蛋白、氧自由基和腺苷及其受體的相互作用J.

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