骨康防治去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究

1、    骨康防治去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究        摘要目的探討補(bǔ)腎活血類中藥骨康口服液對(duì)去勢(shì)大鼠所造成的骨質(zhì)疏松的影響。方法通過切除大鼠卵巢造成絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型，觀察了中藥骨康口服液不同劑量對(duì)造模大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用及其對(duì)去勢(shì)大鼠股骨骨生物力學(xué)的影響，并與尼爾雌醇作陽性對(duì)照。結(jié)果中藥骨康中、低劑量的去勢(shì)大鼠股骨扭轉(zhuǎn)試驗(yàn)最大扭矩高于模型組(P0.05)，中、低劑量組股骨BMD、BMC高于模型組(P0.05)。股骨BMD值與股骨最大扭矩值呈直線相關(guān)(r=0.7415，

2、P0.01)。結(jié)論推測(cè)骨康可能能提高去勢(shì)大鼠骨的骨礦含量及骨密度，并促進(jìn)去勢(shì)大鼠骨結(jié)構(gòu)的再建，改善骨的內(nèi)部構(gòu)造，從而提高大鼠骨的機(jī)械性能。關(guān)鍵詞骨康口服液去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥生物力學(xué)中醫(yī)療法 An experimental study of Gukang for osteoporosis in ovariectomized female ratsShao Min,Du Ying,Zhuang Hong et al.The Affiliated Orthopedic-Traumatological Hospital,Guangzhou Traditional Chinese Medical Uni

3、versity,Guangzhou 510240,ChinaAbstract Objective To evaluate anti-osteoporotic effect of Gukang oral liquid (GOL) in ovariectomized female rats.Methods Ninety rats were randomly allocated to six groups:model group,three Gukang groups (with high,moderate and low dosages,respectively) and nilestriol g

4、roup.Results Torsion moment arm(M),bone mineral density(BMD) and bone mineral content(BMC) were higher in GOL groups with moderate and low dosages than that in model group (P0.05).The BMD was linearly related to the torsion moment arm with the coefficient of 0.7415(P0.01).Conclusion GOL can promote

5、the BMD and BMC in rats with osteoporosis.It can also promote the restructuring of bone trabecula and improve the bone mechanical function in rats with osteoporosis.But the effect of GOL at high dosage was not obvious,which should be further studied.Key words Gukang oral liquid Ovariectomized rats O

6、steoporosis Biomechanics Traditional Chinese medicine絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是老年女性常見病、多發(fā)病，它嚴(yán)重地威脅著老年人的身體健康，由此引起的骨折不但給本人造成極大痛苦，而且給社會(huì)及家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)和生活負(fù)擔(dān)。中藥骨康為我院的中藥制劑，主要由補(bǔ)骨脂、淫羊藿、肉蓯蓉、黃芪、丹參等組成，該藥在臨床和動(dòng)物試驗(yàn)方面都顯示了較好的效果13。本試驗(yàn)采用切除大鼠卵巢造成絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型，旨在觀察骨康對(duì)去卵巢大鼠骨骼的影響，并與尼爾雌醇對(duì)照，以進(jìn)一步探討其作用機(jī)理。1材料和方法1.1材料1)藥物骨康口服液由廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬骨傷科醫(yī)院制劑室提供，方中各藥物

7、的產(chǎn)地、用藥部位及炮制方法均有嚴(yán)格控制。尼爾雌醇由上海華聯(lián)制藥有限公司提供，批號(hào)：961001，尼爾雌醇為國(guó)產(chǎn)長(zhǎng)效口服雌三醇衍生物，有文獻(xiàn)證明每周每100g體重0.15mg可防止卵巢切除大鼠的骨丟失4。戊巴比妥鈉由佛山市化工廠提供，批號(hào)：860001。2)動(dòng)物選用4月齡雌性SD大鼠90只，體重200220g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2實(shí)驗(yàn)方法1)造模方法5各組大鼠均以3%戊巴比妥鈉按1ml/kg體重腹腔注射麻醉后，正常對(duì)照組行假手術(shù)，其余各組大鼠均從背側(cè)入路行完整雙側(cè)卵巢摘除術(shù)。2)飼養(yǎng)及給藥途徑將60只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F六組，每組10只，依次分別為正常對(duì)照組、

8、模型組、骨康高、中、低劑量組和尼爾雌醇組。術(shù)后第3天開始給藥，正常對(duì)照組、模型組每天以蒸餾水6ml/kg灌胃，骨康高、中、低劑量組每天分別給予高、中、低劑量骨康口服液灌胃，濃度分別為每ml含生藥6.6g、3.3g、1.65g。尼爾雌醇組給予尼爾雌醇1mg/kg灌胃，使用前配成混懸液(濃度為0.167mg/ml)，1次/周，其余時(shí)間給予蒸餾水6ml/kg灌胃。所有大鼠均在同等條件下喂養(yǎng)，自由攝水，控制食量。3)觀察指標(biāo)以上各組在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取雙側(cè)股骨，徹底剔除軟組織。用美國(guó)HOLOGIG公司QDR2000型雙能X線吸收儀，變異系數(shù)(CV)1.0%，測(cè)量雙側(cè)股骨BMD及BMC。取左側(cè)股骨，用牙托粉

9、包埋股骨兩端。用SWD-10型萬能材料試驗(yàn)儀(長(zhǎng)春試驗(yàn)儀器研究所生產(chǎn))進(jìn)行股骨扭轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)，觀察各組大鼠股骨最大扭矩及扭轉(zhuǎn)剛度的變化。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并運(yùn)用方差法進(jìn)行分析，顯著性差異用t檢驗(yàn)。BMD值與股骨最大扭矩用相關(guān)回歸分析。2結(jié)果表1表明，服用中、低劑量骨康口服液及尼爾雌醇防治的去勢(shì)大鼠骨密度均高于模型組，差異有顯著性(P0.05)；表2表明服用中、低劑量骨康口服液及尼爾雌醇防治的去勢(shì)大鼠骨礦含量均高于模型組，差異有顯著性(分別P0.01和P0.05)；表3表明服用中、低劑量骨康口服液防治去勢(shì)大鼠股骨的最大扭矩優(yōu)于模型組，差異有顯著性(分別P0.01和P0.05)

10、，而尼爾雌醇組未見明顯改善(P0.05)。相關(guān)回歸分析顯示BMD與股骨最大扭矩之間呈直線相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.7415(P0.01)。說明中藥骨康中、低劑量能提高去勢(shì)大鼠的骨礦含量和骨密度，同時(shí)能改善其骨組織的生物力學(xué)性能。表1骨康口服液對(duì)去勢(shì)大鼠BMD變化的影響(灌胃三個(gè)月)()(n=10)組別右股骨左股骨A0.23±0.03*0.22±0.02*B0.17±0.05#0.17±0.04#C0.18±0.02#0.19±0.02*#D0.21±0.05*#0.20±0.02*#E0.23±0.02*0.2

11、2±0.02*F0.22±0.04*0.21±0.04*方差分析P0.05P0.05表2骨康口服液對(duì)去勢(shì)大鼠BMC變化的影響(灌胃三個(gè)月)()(n=10)組別右股骨左股骨A0.09±0.01*0.09±0.01*B0.07±0.02#0.07±0.02#C0.07±0.01#0.07±0.01#D0.08±0.05*#0.08±0.02*#E0.09±0.01*0.09±0.01*F0.09±0.02*0.08±0.01*#方差分析P0.01P0

12、.01表3骨康口服液對(duì)去勢(shì)大鼠左側(cè)股骨生物力學(xué)指標(biāo)的影響(灌胃三個(gè)月)()(n=8)組別M(N.m)K(N.m/du)A0.74±0.09*0.49±0.05B0.55±0.05#0.48±0.04C0.57±0.06#0.48±0.07D0.64±0.04*#0.51±0.09E0.72±0.08*0.51±0.08F0.57±0.05#0.49±0.07方差分析P0.01P0.05注：各組與B組比較，*P0.05，與B組比較，*P0.01；與A組比較，#P0.05，與A組

13、比較，#P0.01。表3中M為最大扭矩，代表股骨被扭斷時(shí)所需要的最大力矩；K為扭轉(zhuǎn)剛度，代表平均每個(gè)扭轉(zhuǎn)角度平面上股骨所能承受的最大力矩。3討論骨是由羥基磷灰石和膠原纖維組成的復(fù)合材料，從生物力學(xué)的角度來看，骨組織是雙相性的組合材料；從功能上看，骨的最重要機(jī)械性能是其強(qiáng)度和硬度。骨的內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化，影響著骨的抗折能力6。骨質(zhì)疏松時(shí)，骨密度明顯降低，其最初表現(xiàn)在松質(zhì)骨骨量減少，隨后皮質(zhì)骨骨量減少，皮質(zhì)骨變薄，骨髓腔增大，骨總量的減少使骨的強(qiáng)度和剛度減弱，導(dǎo)致骨抵抗外力作用的能力下降。去勢(shì)大鼠60天時(shí)股骨骨礦含量明顯下降7，故本試驗(yàn)采用去勢(shì)動(dòng)物模型觀察中藥骨康防治效果，服用中藥骨康口服液的中、低劑

14、量組大鼠BMD和BMC高于模型組，并能提高去勢(shì)大鼠的股骨生物力學(xué)性能。同時(shí)本研究結(jié)果顯示，BMD值與股骨扭轉(zhuǎn)試驗(yàn)中最大扭矩之間有較高相關(guān)性(r=0.7415)。推測(cè)中藥骨康可能促進(jìn)骨礦在骨的沉積，從而提高BMD及BMC，而且可能促進(jìn)骨結(jié)構(gòu)的再建，改善骨的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，從而提高大鼠骨的彈性變形能力，使骨組織的承載能力增強(qiáng)。這也證明了骨的力學(xué)強(qiáng)度取決于骨礦物質(zhì)含量與骨的內(nèi)部構(gòu)造。本試驗(yàn)中骨康高劑量組效果較差，而中、低劑量組效果較好，可能是中藥復(fù)方骨康濃度過高彌散度差影響其吸收有關(guān)，另外中藥復(fù)方藥物間的相互作用，也會(huì)影響其有效成分的濃度，高劑量組藥物間的相互作用很可能使其有效成分反而下降，其具體機(jī)理還有

15、侍于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，骨康中、低劑量或許更接近于最佳有效防治劑量，故其防止骨量丟失的效果較好。最后中藥防治骨質(zhì)疏松與補(bǔ)腎中藥能提高大鼠體內(nèi)性激素的水平有密切關(guān)系，文獻(xiàn)表明中藥能提高雌性大鼠血清E2和T的含量8。骨質(zhì)疏松相當(dāng)于祖國(guó)醫(yī)學(xué)中“骨痿”、“骨痹”的范疇，中醫(yī)認(rèn)為腎虛、脾虛、血瘀為本癥病機(jī)，中藥骨康以“腎主骨”理論為指導(dǎo)，針對(duì)其“多虛多瘀”之病機(jī)特點(diǎn)而組方的，全方以淫羊藿、肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂補(bǔ)腎壯骨為君，黃芪等健脾益氣為臣，丹參等活血通絡(luò)為使而組成。骨組織的韌性是衡量骨發(fā)生骨折所需能量大小的指標(biāo)，韌性對(duì)于骨組織來說是非常重要的，因?yàn)橐桓g性較高的骨能較好的抵抗骨折的發(fā)生9。隨

16、著年齡的增長(zhǎng)，骨的膠原纖維減少，骨中的羥基磷灰石含量相對(duì)增加，骨的脆性增高，骨韌性下降，這是老年人較年青人容易發(fā)生骨折的重要原因。同時(shí)，這說明骨的韌性和骨礦含量在防治骨質(zhì)疏松中具有重要的意義。本試驗(yàn)顯示服用中、低劑量骨康口服液防治的去勢(shì)大鼠骨的骨礦含量和骨的韌性優(yōu)于模型組，在提高骨質(zhì)疏松大鼠骨礦含量和骨密度的同時(shí)，可改善骨質(zhì)疏松大鼠骨的韌性和抗扭轉(zhuǎn)效能。這對(duì)于骨質(zhì)疏松癥治療具有重要的意義。證明了中醫(yī)“腎主骨”理論的科學(xué)性，提示中醫(yī)補(bǔ)腎活血法在防治骨質(zhì)疏松及其骨折方面具有良好的前景。雖然本試驗(yàn)探討了BMD值與股骨力學(xué)性能之間的關(guān)系，但關(guān)于骨礦含量、骨密度與股骨力學(xué)性能之間的關(guān)系以及離體股骨掃描的

17、準(zhǔn)確性還有待進(jìn)一步的研究與證實(shí)。國(guó)家中醫(yī)藥管理局科研基金重點(diǎn)課題(95B3211)作者單位：510240廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬骨傷科醫(yī)院參考文獻(xiàn)1劉慶思，李小儂，徐敏.密骨煎防治去卵巢大鼠骨丟失的雙能X線掃描觀察.廣州中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，11(4)：223-225.2劉慶思，陳仲澤，李小儂.骨康膠囊治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥65例療效觀察.新中醫(yī)，1995，10：31.3馮新送，邵敏，黃宏興.中藥骨康對(duì)去勢(shì)大鼠骨生物力學(xué)的影響.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，15(3)：211-212.4劉宏偉，楊式之，徐克慧.尼爾雌醇預(yù)防大鼠卵巢切除后骨質(zhì)疏松.華西醫(yī)大學(xué)報(bào)，1993，24(1)：40-44.5李青南.仙珍骨寶對(duì)去勢(shì)大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)影響的藥效學(xué)研