清潔驗證相關知識

1、清潔驗證相關知識1 .清洗操作規(guī)程的要點1.1. 拆卸應在設備的清潔規(guī)程中規(guī)定一臺設備需要拆卸的程度，大多數(shù)設備，如大容量注射劑的灌裝機、固體制劑一步制粒機等在清潔前需要預先拆卸到一定程度，小針的灌裝機則幾乎可以說是完全拆卸。應有書面的、內(nèi)容清晰完整的拆卸指導，最好附有示意圖，以使操作人員容易理解。1.2. 預洗/檢查預洗的目的是除去大量的（可見的）殘留產(chǎn)品或原料，為此后的清潔創(chuàng)造一個基本一致的起始條件。由于清潔規(guī)程往往不是專用的，它需要適用于生產(chǎn)多種產(chǎn)品和濃度或劑量規(guī)格的通用設備，以簡化管理及操作，因此需要進行預洗。預洗的作用是確立一個相對一致的起始點，以提高隨后各步操作的重現(xiàn)性。預洗所用水

2、質(zhì)不必苛求，通常飲用水或經(jīng)一定程序凈化（如過濾）的飲用水已經(jīng)足夠，使用水管或手持高壓噴槍以新鮮的流水沖洗設備以除去殘留物。對于殘留物物理性質(zhì)差異較大的情況，有的企業(yè)希望制定一份產(chǎn)品與預洗參數(shù)如水溫、壓力、時間等一一對應的對照表，由操作人員按實際產(chǎn)品選擇參數(shù)。這種方法在實施時并不十分理想。由于操作人員的素質(zhì)及習慣，從一大堆方案中去選擇應當采用的方案反而容易造成差錯，比較簡單而切合實際的方法是讓操作者檢查是否還有可見的殘留物，讓他們持續(xù)噴洗設備直至可見殘留物消失，以此作為預洗的終點。因此操作者判斷預洗完成與否的標準必須盡可能的明確，特別是應檢查的部位。例如可在規(guī)程中作出這樣的規(guī)定，用熱的飲用水持續(xù)

3、噴淋機器的所有表面，使所有可見的殘留顆粒消失，特別注意檢查不易清潔的部位。1.2清洗參數(shù)清洗程序的操作參數(shù)（如清潔劑種類、濃度、接觸時間、殘留物的特性、污染條件），還包括清洗設備的特性，自動化的清洗路徑，清潔環(huán)境的順序，每步的流速，在投入使用前都需要確認。清潔程序每一步均包含4個參數(shù)，分別是時間、動作、濃度及溫度。這四個參數(shù)是互相聯(lián)系的，且會對清潔周期中的每一階段的成功存在直接關系，比如通過對清潔劑的加熱以提高去污能力。作為清潔參數(shù)的變量需要確定，清潔參數(shù)的可接受范圍作為清潔程序開發(fā)工作的一部分進行建立。1.2.1. 時間被定義為清洗步驟的時間的長短，在一個清洗步驟中，可以采用兩種方式來進行定

4、義和測量：直接法與間接法，直接法時可使用作為控制系統(tǒng)中的計時器測量時間。也可以通過間接法測量時間，例如在淋洗時，有時通過測量體積來代替測量時間，因為通過體積和流速可以確定時間。對于最終淋洗水，普遍會增加測試要求，如電導率。1.2.2. 動作被定義為清潔劑的流體動作。如浸泡，洗滌，沖擊，湍流。攪動能夠提高清潔劑的有效性和清潔工藝的效果。典型的手工清洗包括浸泡和擦洗，以達到清潔效果。自動清潔程序通常采用沖擊流或湍流作為清潔動作。清潔程序需明確清潔動作流速是清潔劑和清洗水在流經(jīng)設備時的重要參數(shù)，應該在清潔工藝的每個步驟中規(guī)定流速并進行確認。噴淋裝備要具有最大和最小流量的要求，管道的淋洗流速要確保形成

5、湍流。1.2.3. 清潔劑的濃度直接影響清潔程序是否能夠成功，化學清洗劑可以是濃縮型的稀釋后使用。清潔效果與清潔劑的濃度有關系，清潔劑使用太少可能達不到清潔效果，使用太多來自清潔劑的殘留可能難以去除，并需要使用大量的淋洗。通常，對于堿性清潔劑達到最佳清潔效果的方法可以是在攪拌狀態(tài)下提高溫度或延長湍流淋洗周期的時間。化學清洗劑在采購和處置方面，均會產(chǎn)生不小的資金投入，因此確定正確的濃度以保證清潔效果是極為重要的。清潔劑添加的自動系統(tǒng)，必須具有可重現(xiàn)性。不管采用何種添加方式，確認清潔劑濃度有助于證實該方式的一致性。對于自動清潔程序，電導率測試是最容易測試強堿或強酸清潔劑濃度的方式。應能夠通過清潔劑

6、的化學組成在線測試出清潔劑濃度的異常變化，例如一些清潔劑添加系統(tǒng)以體積進行控制并采用電導率測試作為確認方法。當電導率超出預設值時，就會報警，允許的范圍需來自清潔程序開發(fā)的數(shù)據(jù)。1.2.4. 溫度清潔程序中不同步驟的最佳溫度范圍會有所不同，初始清潔劑典型的溫度為室溫，目的是最大程度的去除變性或降解產(chǎn)物和最大程度的稀釋產(chǎn)物。清潔劑經(jīng)過加熱以提高效果，最終清洗水可通過高溫以加快干燥速率和提高任何工藝及清潔劑殘留的溶解性。1清潔驗證主計劃所有驗證活動應有計劃，清潔驗證計劃的要求應在主計劃或類似文件中規(guī)定和記錄，藥品生產(chǎn)清潔驗證主計劃的內(nèi)容原則上可能是相同。計劃應描述職責、清潔驗證計劃和清潔驗證的實施情

7、況。最好有一個詳細的清潔驗證主計劃，該計劃在整個廠區(qū)驗證主計劃中有所描述，清潔驗證主計劃可能包含所有內(nèi)容。還有一種方法是準備一個概述版的清潔驗證主計劃，再準備一個清潔驗證執(zhí)行或項目計劃，詳細說明清潔驗證的要求。應當定期審核和更新這些實際存在的文件，定期編寫計劃報告，總結計劃執(zhí)行過程中的重要活動。計劃應說明清潔驗證程序的每個重要方面，主計劃的構成及所需提供的適當細節(jié)取決于特定設施的實際操作，主計劃的構成包括但不限于以下主題。1.1 目的清潔驗證主計劃有助于公司管理層了解驗證活動所涉及時間、人員的安排，以及進行相關確認與驗證活動的必要性，有助于驗證團隊成員了解各自的職責，此外讓參與這個項目的人員以

8、及檢查人員能夠從全局了解該工廠所使用的驗證方法和所有的驗證活動。1.2 范圍清潔驗證主計劃包括驗證的一般原則，可接受標準計算，分組（矩陣）和最差條件產(chǎn)品評估等方面的規(guī)定。1.3 職責規(guī)定對驗證過程中各部門的職責進行詳細規(guī)定與描述。1.4 產(chǎn)品與設備分組（矩陣）和最差條件產(chǎn)品評估通常情況下一條生產(chǎn)線會同時生產(chǎn)多個品種，每個品種由活性成分和輔料組成，在清潔驗證中不必為所有殘留物制定限度標準并一一檢測，因為這是不切實際且沒有必要的。在一定意義上，清潔的過程是個溶解的過程，因此通常的做法是從各組分中確定最難清潔的物質(zhì)，作為目標化合物即驗證對象，目標化合物一般要考慮其特性，如：溶解性風險毒性、藥理o難于

9、清洗，如對設備表面材質(zhì)有一定附著力o配方中包含難以清洗的油脂、色料或矯味劑的產(chǎn)品（顏色、香味與味道）o生產(chǎn)量高的品種（生產(chǎn)頻率高的產(chǎn)品相應的清洗頻率高）o清洗過程如果使用清洗劑，則其殘留物也應視為標記物同一工序使用到的設備可能會有很多種，對于同一類型的設備，可以考慮對其分組并同時進行驗證。對于設備分組，以形式和功能為標準定義分組原則，對設計和功能相似，大小不同的設備可以分為一組。1.5 殘留限度的計算和可接受標準化學殘留可接受限度清潔劑殘留的確定微生物水平的確定如何確定殘留物限度是一個相當復雜的問題，企業(yè)應當根據(jù)其生產(chǎn)設備和產(chǎn)品的實際情況，制定科學合理的，能實現(xiàn)并能通過適當?shù)姆椒z驗的限度標準

10、。目前企業(yè)普遍接受的限度標準基于以下原則：以目檢為依據(jù)的限度；化學殘留可接受限度；微生物殘留可接受限度。1.5.1. 以目檢為依據(jù)的限度目檢要求不得有可見殘留物，在每次清洗完后都要求進行檢查并對檢查結果進行記錄，此項檢查應該作為清潔驗證接受限度的第一個接受標準。1.5.2. 化學殘留可接受限度計算化學殘留可接受限度有兩種方法，生物活性限度（最低日劑量的1/1000）和濃度限度（10ppmb在考慮可接受殘留限度時，綜合考慮兩種方法，選擇最嚴格的標準作為清潔驗證最終標準。 采用健康基礎數(shù)據(jù)的可接受標準在可以獲得可接受日暴露水平（ADE）或允許日暴露量（PDE）值時，最大允許殘留（MACO）應基于A

11、DE計算。MACO計算的原則是基于ADE/PDE值，計算允許從上一個產(chǎn)品帶入下一個產(chǎn)品中的殘留量。根據(jù)以下公司計算ADE值或PDE值，將結果用于MACO值的計算：ADE=NOAELXBW/（UFcXMFXPK）根據(jù)以下公式從ADE值計算MACO值：MACO=ADEpreviousxMBSnext/TDDnextADE可接受日暴露水平MACO允許最大殘留：從上一產(chǎn)品帶入下一產(chǎn)品的最大可接受量BW平均成人體重UFc組分不確定因子：反映單個變量之間、不同品種差異、亞急性折算為急性外推、最低可見損害作用水平到無可見損害作用水平的推斷，數(shù)據(jù)完整性等補償因素的綜合系數(shù)MF修正因子：用于表達未被其它因子覆蓋

12、的不確定因素MBSnext下一產(chǎn)品的最小批量TDDnext下一產(chǎn)品的標準治療日服用劑量 生物活性的可接受限度：最低日治療劑量的1/1000根據(jù)藥物的生物學活性數(shù)據(jù)-最低日治療劑量（MTDD）確定殘留物的限度是制藥企業(yè)普遍采用的的方法。一般取最低日治療劑量1/1000為殘留物限度，可以可編輯范本認為即使存在很大個體差異，該殘留量也不會對人體產(chǎn)生藥理反應。因此高活性、敏感性的藥物宜使用本法確定殘留物限度。一般表面計算公式如下：L1/1000=MTDa/1000乂Nb/MDDbXSbMTDa清洗前產(chǎn)品最小日給藥劑量中的活性成分含量Nb清洗后產(chǎn)品的批量MDDb清洗后產(chǎn)品的最大日給藥劑量的活性成分含量S

13、b清洗后產(chǎn)品活性成分含量的百分比(%，W/W) 濃度限度：十萬分之一(10ppm)在下一個產(chǎn)品中的殘留物數(shù)量級別應不超過十萬分之一(10ppm),該限度依據(jù)分析方法客觀能達到的能力而制定的，從控制微生物污染及熱原污染角度上看，也比較安全。一般除非是高活性、高敏感性的藥品，該限度的安全性是足夠的。從殘留物濃度限度可以推導出設備內(nèi)表面的單位面積殘留物濃度(表面殘留物限度)，假設殘留物均勻分布在設備內(nèi)表面上，在下批生產(chǎn)時全部溶解在產(chǎn)品中。設備下批產(chǎn)品的生產(chǎn)批量為B(kg),因殘留物濃度最高為10X106即10mg/kg,則殘留物總量最大為10B(mg);單位面積殘留物的限度為殘留物總量除以測量的與產(chǎn)

14、品接觸的內(nèi)表面積，設設備總內(nèi)表面積為SA(cm2),則表面殘留物限度L=10B/SA(mg/cm2)。為確保安全，一般應除以安全因子F,則L=10B/(SAXF)(mg/cm2)計算接受殘留限度需考慮的要素如下表表2-9-1計算接受殘留限度考慮因素影響因素最小日治療劑量/毒性溶解度批量最大日治療劑量接觸產(chǎn)品的面積難清洗位置取樣面積清洗前產(chǎn)品VV清洗后產(chǎn)品VV設備VV取樣方法V清洗劑VV1.5.3.微生物限度清洗的微生物驗證可以和清洗的化學驗證同步進行，微生物的特點是在一定環(huán)境條件下會迅速繁殖，數(shù)量急劇增加。而且空氣中存在的微生物能通過各種途徑污染已清潔的設備。設備清洗后存放的時間越長，被微生物

15、污染的幾率越大。因此,企業(yè)應綜合考慮其生產(chǎn)實際情況和需求，自行制定微生物污染水平控制的限度及清洗后到下次生產(chǎn)的最長貯存期限1.5.4.殘留溶劑的限度標準藥品生產(chǎn)和清潔中可能用到除水外的有機溶劑，ICH在殘留溶劑指南中將溶劑分為3個級別一類溶劑因其具有不可接受的毒性或?qū)Νh(huán)境造成公害，第一類溶劑在制藥生產(chǎn)中不應該使用，如必須使用時按下表對殘留進行控制，其名稱如下表：2-9-2第一類溶劑濃度限度溶劑濃度限度(ppm)備注溶劑濃度限度(ppm)備注苯2致癌物四氯化碳4毒性及危害環(huán)境1,2-二氯乙烷5毒性1,1,1-三氯乙1500危害環(huán)境1,1-二氯乙烯8毒性烷二類溶劑由于其毒性在制劑中應予限制，并嚴格

16、限制允許的每日攝入量，其名稱如下表:2-9-3第二類溶劑濃度限度溶劑最大允許攝入量mg/d濃度限度(ppm)溶劑最大允許攝入量mg/d濃度限度(ppm)乙月青4.1410甲醇30.03000氯苯3.63602-甲氧基乙醇0.550氯仿0.660甲基.基酮0.550異丙基苯0.770甲基環(huán)己烷11.81180環(huán)己烷38.83880甲基異基酮4545001,2-二氯乙烯18.71870N-甲基-叱咯烷酮5.3530二氯甲烷6.0600硝基甲烷0.5501,2-二甲氧基乙烷1.0100叱噬2.0200N,N-一甲基乙酰胺10.91090劃、碉1.6160N,N-二甲基甲酰胺8.8880四氫吠喃7.2

17、7201,4-二吸烷3.8380四氫恭1.01002-乙氧基乙醇1.6160甲苯8.9890乙二醇6.26201,1,2-三氯乙烯0.880甲酰胺2.2220二甲苯21.72170己烷2.9290第三類溶劑第三類溶劑屬于低毒，對人體危害很小，其名稱如下表:表2-9-4第三類溶劑濃度限度乙酸內(nèi)酮苯甲醴1-醇乙酸酯叔基甲基醴二甲基業(yè)碉乙醇乙酸乙酯乙醴甲酸甲酯甲酸庚烷乙酸異酯乙酸異丙酯乙酸甲酯3-甲基-1-醇甲基乙基酮2-甲基-1-丙醇戊烷1-戊醇1-丙醇2-丙醇乙酸丙酯三乙胺2-丁醇ICH殘留溶劑指南規(guī)定，一類、二類溶劑僅在不可替代的情況下用于藥品生產(chǎn)，但不能用作清潔劑。在無法避免時，三類溶劑可作

18、為清潔劑，其在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留濃度不應超過初始溶劑濃度的0.5%。1.6 最難清潔部位和取樣點設備最難清潔部位一般是根據(jù)生產(chǎn)經(jīng)驗及風險評估進行確定，考慮到在線清洗無法覆蓋的區(qū)域及手工清洗中無法拆卸的部件表面，另外對于設備中不同組成部分，使用到的不同材質(zhì)，需要對其進行綜合考慮，確認設備最難清潔部位。確定最難清潔部位首先可以作為設備設計時的參考，其次能進一步確認清潔驗證中取樣點，但這個過程僅適用于淋洗法取樣的方式。1.7 清潔驗證取樣方法確認清潔難消證取樣方法確認可以參見2.9.5.2節(jié)取樣方法驗證。1.8 清潔驗證主計劃其他內(nèi)容還包括不局限于以下內(nèi)容包括不局限于如下內(nèi)容清潔驗證時間計劃表

19、清潔驗證日常監(jiān)測/維護要求參考文件附錄風險評估風險評估貫穿于產(chǎn)品整個生命周期，同樣適用于清潔驗證過程，合理運用風險評估在清潔驗證中能達到如下目的：1. 選出清潔驗證目標產(chǎn)品，有效的減少清潔驗證工作量，提高清潔驗證的適用性；2. 選出合適的清潔劑，更加高效且節(jié)省成本的達到清洗目的；3. 選出合適的檢測方法，如專屬性與非專屬性的方法分別適用于不同的工藝與設備；4. 選出取樣點位置并選擇合理的取樣方法，從而更高效的開展清潔驗證。清潔和清潔驗證可以從相關的工藝系統(tǒng)知識，污染物和設備清潔輔助系統(tǒng)中進行風險評估、確認。這些系統(tǒng)要進行設計審核，然后根據(jù)相關的可接受標準確認，證明已經(jīng)達到系統(tǒng)的相關要求。在清潔

20、驗證執(zhí)行的過程中，有很多影響清潔驗證不成功的因素，每個因素都存在著不同的潛在的風險，必須對每個因素進行充分的分析、評估，確保清潔驗證順利地進行，下圖用魚骨圖分析確認所有的影響因素。壞堵方注AMX預防不成功的清潔驗證HVAC的磬別'分析方法培調(diào)環(huán)境溫濕度取樣方法經(jīng)驗前希設缶林在條件油洗SOP的TAC,T拙心其他干優(yōu)清法劑/分新清治設備清潔工具/版樣生產(chǎn)談落水的質(zhì)埼設備核監(jiān)次%材質(zhì)/殘留物回愎奉實敦/設備形狀/''、之光駕qMP制弱拔才材料闌展設篇圖2-9-3風險評估魚骨圖1環(huán)境環(huán)境因素對清潔驗證的影響至關重要，一個良好的環(huán)境能夠保證清潔驗證順利的進行。環(huán)境因素嚴重影響著清

21、潔驗證過程中的微生物殘留項目，不同級別的環(huán)境有不同的微生物和塵埃粒子要求，在進行清潔驗證之前，必須確保HVAC的性能確認已完成，環(huán)境的溫濕度已經(jīng)符合要求。特別是對清潔后的設備的儲存條件，清潔后的設備必須儲存在干燥的環(huán)境中，需要進行干凈設備保留時間和臟設備保留時間的驗證，而這兩個時間驗證主要是針對微生物殘留限度，因為環(huán)境因素如不能被有效控制，必定導致清潔驗證失敗。2方法清潔驗證執(zhí)行之前，必須完成與清潔驗證相關的分析方法和取樣方法驗證以及所有相關設備的清潔SOP。在設備清潔SOP中必須清楚的描述T.A.C.T(Temperature,Action,Concentration,Time)參數(shù)，確保清

22、潔規(guī)程的可操作性。3 人員對于參與的清潔驗證的相關人員，特別是與清潔驗證相關設備清潔的操作人員，必須對相關的清洗規(guī)程進行嚴格的培訓，保證設備清洗的一致性，必要時在清潔驗證過程中可以采用不同的班組人員對設備進行清洗，從而證明清潔SOP的耐用性。執(zhí)行清潔驗證的人員必須全部通過清潔驗證方案的培訓，在執(zhí)行過程中，盡量選用有經(jīng)驗的人員，尤其是取樣操作人員，必須通過回收率實驗的培訓，否則不能進行取樣操作。4 材料為了使設備的清洗達到一定的潔凈度，設備的清洗必須嚴格選用清潔劑和清潔工具，清潔劑必須采用成分單一和制藥行業(yè)允許的清潔劑，而且在清潔驗證執(zhí)行的過程中要測定清潔劑殘留，清潔工具一定要選擇沒有任何脫落物

23、質(zhì)的清潔工具，重要的清潔工具的變更可能導致清潔程序重新驗證。設備清洗所采用水的質(zhì)量對于最終可接受標準的制定有著很大的影響，不同的水質(zhì)清潔代表著不同的潔凈要求，比如注射用水一般都是無菌制藥廠房中進行，而純化水對設備的清潔一般都在非無菌制藥廠房中進行，所以最終清潔用水的質(zhì)量好壞決定著清潔驗證微生物限度制訂原則。藥品生產(chǎn)過程中，每個公司的每個車間都會有很多品種和劑型藥品，由于在清潔驗證過程中，要耗費大量的人力和物力，我們不可能針對每個品種都要單獨的進行清潔驗證，為了降低成本和將復雜的清潔驗證簡單化，我們需要對車間所有的品種和劑型進行分組分類，從中選擇最差條件的產(chǎn)品進行清潔驗證。5 測量清潔驗證過程中

24、涉及的所有的設備的儀器儀表必須進行校準，確保獲得數(shù)據(jù)的準確性?？紤]不同人員操作的差異性，取樣操作應經(jīng)過嚴格培訓并能嚴格遵守規(guī)程的人員進行，同時為保證樣品具有較好的重現(xiàn)性，取樣操作應由完成回收率實驗的人員進行操作。棉簽使用前用取樣溶劑預先清洗，以防止纖維殘留在取樣位置表面。不同材質(zhì)的回收率實驗在此方案進行前必須完成，應由同一人至少進行3次操作，應大于或等于50%，三次結果的RSD應不大于20%，為確保產(chǎn)品的安全性，在計算殘留量時應以最低的回收值代入，即算得最大可能殘留量。對于不同材質(zhì)的回收率結果進行對比，為最大程度地降低污染的風險，采取回收率最低的材質(zhì)作為最終回收率。6 設備制藥生產(chǎn)中每個公司有

25、不同的劑型，每個劑型使用的設備也各不相同，又存在著不同的產(chǎn)品，在清潔驗證的執(zhí)行過程中，不可能對每個產(chǎn)品的設備鏈進行驗證，如果一個公司某劑型的產(chǎn)品非常多，那么清潔驗證周期會很長，浪費大量的人力和物力資源。所以我們會根據(jù)產(chǎn)品使用的設備鏈和產(chǎn)品的相似性對設備鏈進行分組驗證，對于同一類別的設備鏈，只需要選擇最差條件設備鏈驗證，只要最差條件設備鏈通過驗證，那么其余的設備鏈也就不需要進行驗證了，大大減輕了清潔驗證的負擔。制藥生產(chǎn)過程中，由于設備的種類非常多，每個設備都有不同的幾何形狀，所以設備取樣點的選擇是非常重要的，所選擇的取樣點必須有很強的代表性，最終取樣點結果的合格證明該設備的清洗程序是適用的。因為

26、在清潔驗證過程中主要的目的是證明上批產(chǎn)品的活性成分對下批產(chǎn)品沒有造成污染，所以對于有些沒有接觸到活性成分的設備，我們可以適當?shù)刂贫ㄆ錅y試項目，并不是所有的測試項目都是一成不變的清潔驗證相關的分析方法清潔驗證相關的分析方法一般包括分析方法驗證與取樣方法驗證，清潔驗證中選擇一個合適的分析方法是非常必要的，適當?shù)姆治龇椒☉軌虺浞謾z測相關殘留物?？梢詮姆治鼋Y果中得出什么結論也很重要（例如檢測的是產(chǎn)品還是清潔劑，結果是否合格），檢測結果決定了清潔方法是否可行或需要進一步改進。本章討論的內(nèi)容是怎樣選擇一個合適的測試方法，包括適用性和化學與微生物測試方法的信息，以及測試方法的驗證分析方法驗證1 .專屬性專

27、屬性是指其他物質(zhì)存在干擾的情況下，被分析物能準確可靠檢測的能力。對于清潔驗證來說，干擾物包括降解物、輔料、取樣溶劑、取樣棉簽、清潔劑等干擾。2. 準確度準確度也稱為真實度，指真實值或認可的參考值與測量值之間的相近程度，一般用回收率表示，綜合回收率要求不低于75%，回收率的RSD要求不大于10%，將測定的回收率中最低值作為校正因子f，樣品的測定結果除以校正因子表示樣品的實際量。3. 精密度指在規(guī)定條件下對均質(zhì)樣品多次取樣進行一系列檢測結果的接近程度，精密度可從三個層次考查：重復性、中間精密度、重現(xiàn)性，精密度考察應使用均質(zhì)的、可信的樣品，如果得不到，可人為配制樣品溶液進行研究。4. 線性分析方法的

28、線性是指在給定的范圍內(nèi)，檢測結果與樣品中被分析物的濃度（量）成比例關系的能力。范圍指能達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被測物的高、低限濃度或量。可編輯范本5. 范圍分析方法的范圍是指樣品中被分析物的較高濃度和較低濃度的一個區(qū)間，并已證實在此區(qū)間內(nèi)，該方法具有合適的準確性、精密度和線性。濃度范圍應達到殘留物限度的50%150%。6. 檢測限與定量限檢測限是指樣品中的被分析物能被檢測到的最低量，定量限是指能定量檢測樣品中被分析物的最低量。檢測限和定量限可采用直觀評價和信噪比的方法，或者采用響應值的標準差和斜率的方法進行驗證。7. 耐用性耐用性是指試驗參數(shù)適當?shù)陌l(fā)生細小改變時，測

29、量保持不受影響的能力，可用于說明正常使用時的可靠性。耐用性測試是在改變其分析參數(shù)的條件下，分析方法的適用性，以HPLC方法為例典型變化的參數(shù)如下：流動相PH值變化流動相組分變化柱溫和流速變化8. 溶液穩(wěn)定性樣品在分析前放置于一定的儲存條件下，可能會發(fā)生降解和變化，在這些情況下，需要考察被分析物的穩(wěn)定性。使用同一份溶液，測定其預先選定的時間間隔里結果的差異，以此分析樣品的穩(wěn)定性。9. 系統(tǒng)適用性定量檢測時應制備2份對照品，對照品一致性檢查不大于5%,對照品的RSD不超過10%。表1檢驗方法中限度檢查和定量檢查需驗證的參數(shù)檢查方法參數(shù)限度檢查法定量檢查法專屬性VV精密度XV線性/范圍XV準確度VV

30、檢測限和定量限檢測限驗證定量限驗證樣品溶液的穩(wěn)定性系統(tǒng)適用性V（一份標準品）V（兩份標準品作平行樣）取樣回收率研究取樣回收率研究通常需要證明采用適當?shù)姆治龇椒ê腿映绦?，可充分測量或量化設備表面的殘留物。這些研究為殘留物測量的取樣以及分析方法建立提供了科學依據(jù)。它的目的是建立一個可重現(xiàn)的設備表面回收率。以下探討三種類型的取樣回收率：擦拭取樣回收率，淋洗取樣回收率以及“目檢”回收率。對于擦拭以及淋洗取樣而言，回收率研究可以作為分析方法驗證的一部分，或者一旦確定分析方法能夠檢測溶液中殘留物，可單獨進行研究。取樣回收率研究是實驗室研究，需要不同被取樣設備材質(zhì)（如不銹鋼、玻璃、PTFE以及EPDM）試

31、樣，并在上面涂布待檢測殘留物。1.擦拭法回收率擦拭回收率研究中，將已知濃度的殘留物溶液均勻涂布在材質(zhì)試樣上，自然晾干，采用一定的擦拭方法進行取樣，選用合適的溶劑提取棉簽上的殘留，然后檢測提取液中殘留物的數(shù)量?；厥樟颗c材質(zhì)試樣上的加入量之比就是取樣百分回收率。由于擦拭屬于人工操作，通常每人需要重復三次回收率研究。每個殘留物和表面類型的組合至少需要兩個人進行擦拭回收率研究。研究建立的回收率可以通過不同的方式定義，但通常定義為任意一個擦拭取樣人員的最低平均回收率。一個可接受的拭子回收率取決于如何進行拭子回收率試驗。如果在回收率研究確認取樣方法時，沒有對殘留限度或分析結果進行修正，回收率通常要求70%

32、或更高。如果回收率用于修正殘留物限度或分析結果，回收率一般要達到50%或以上。.2.淋洗法回收率淋洗法回收率研究同擦拭回收率相似，將目標殘留物溶液涂布在材質(zhì)試樣上自然晾干。對于擦拭取樣的回收率，必須嚴格執(zhí)行預定擦拭步驟。與之相反對于淋洗取樣，無法在實驗室中準確地重復淋洗步驟了提取取樣的特殊情況）。然而在實驗室中模擬淋洗程序是可行的。在可能的情況下，模擬淋洗的條件應該同實際的設備淋洗條件相同，包括淋洗溶劑以及淋洗溶劑溫度的選擇。其他情況下，應該選擇與設備淋洗相同或最差的淋洗條件，例如回收率研究中溶劑量與被取樣表面積之比應該同設備淋洗時相同或更低。3. 目檢回收率這個過程實際上是確定一個定量的“目

33、視檢測限”，如果目檢只是作為擦拭或沖洗取樣的補充，則可以但不要求確定“目視檢測限”。指定觀察條件下的目視檢測限可以通過在設備材質(zhì)試樣上涂布不同濃度（醫(yī)g/cm2）的殘留物來確定。并需要一組訓練有素的觀察者來確定表面殘留物明顯可見時的最低殘留水平。目視檢測限的意義在于，如果在清潔驗證方案中，在同樣（或更嚴格）的觀察條件下確定設備表面已目檢潔凈，則可認為實際殘留水平低于目視檢測限。適當?shù)挠^察條件包括距離，光照以及觀察角度。目視檢測限取決于殘留物性質(zhì)，表面性質(zhì)（例如，不銹鋼對PTFE）以及觀察者的視力。文獻報道的典可編輯范本型的目視檢測限是1-4dg/cm2o對于目視檢測限，不需要確定回收率。該研究

34、的目的是確定殘留物明顯可見時的一個殘留物水平，這樣目視潔凈的任何表面上殘留水平都低于目視檢測限。4. 生物負載及內(nèi)毒素取樣回收率對于微生物取樣，不適合進行回收率研究以確定表面回收率，原因之一是微生物檢測的計數(shù)問題通常以“菌落形成單位”進行計數(shù)而不是單個微生物。第二個原因是在一個標準的取樣回收率研究中，當材質(zhì)試樣晾干時微生物會死亡或失去生存能力。第三個原因是不清楚選用哪種微生物進行回收率研究。第四個原因是通常生物負載限度已明顯低于可能影響產(chǎn)品質(zhì)量或工藝性能（如在線滅菌）的水平，因此即使回收率低（<50%），不引入回收因子也不會影響產(chǎn)品質(zhì)量和/或工藝性能。1 .清潔驗證方案參照物質(zhì)或最難清潔

35、物質(zhì)、最難清潔部位和取樣部位，如何制訂驗證的合格標準即最大允許殘留清潔驗證方案必須符合一般驗證方案的共性要求。驗證方案中最關鍵技術問題為如何確定限度，用什么手段能準確地定量殘留量，這包括取樣方法和檢測方法的開發(fā)和驗證。般藥品都由活性成分和輔料組成。對于復方制劑，含有多個活性成分。所有這些物質(zhì)的殘留物都是必須除去的。在清潔驗證中是否需要為所有殘留物都制定限度標準一一檢測呢？這是不切實際且沒有必要的。在一定的意義上，清潔的過程是個溶解的過程，因此通常的做法是從各組分中確定最難清潔（溶解）的物質(zhì)，以此作為參照物質(zhì)。通常相對于輔料，人們更關注活性成分的殘留，因為它可能直接影響下批產(chǎn)品的質(zhì)量、療效和安全

36、性。因此活性成分的殘留限度必須作為驗證合格的標準之一。如當存在兩個以上的活性成分時，其中最難溶解的成分即可作為最難清潔物質(zhì)論處。以復方18氨基酸注射液為例，它有18種氨基酸，均為活性成分。其中最難溶解的為胱氨酸，僅微溶于熱水，因此可將其作為最難清潔物質(zhì)。這樣一來，清潔驗證就找到了殘留的“參照物”而不用考慮其他易溶解組分。1.2 最難清潔部位和取樣點取樣點應包括各類最難清潔的部位，及各種材質(zhì)的全面考慮。1.3 清潔驗證方案清潔驗證方案可用多種格式，其共同要求要素包括如下內(nèi)容： 目的明確待驗證的設備和清潔方法。 清潔規(guī)程待驗證的清潔方法的SOP即清潔規(guī)程應當在驗證開始前確定下來，在驗證方案中列出清

37、潔規(guī)程以表明清潔規(guī)程已經(jīng)制定。可編輯范本 驗證人員列出參加驗證人員的名單，說明參加者所屬的部門和各自的職責，對相關操作人員的培訓要求。 確定參照物和限度標準在本部分應詳細闡述確定參照物的依據(jù)，確定限度標準的計算過程和結果。一般可將相關設備列表，計算總表面積，特殊表面面積；將相關產(chǎn)品列表，列入主要活性成分及其相關物理化學性質(zhì)，MTDD值等，確定參照物質(zhì)，計算限度標準。 檢驗方法學本部分應說明取樣方法、工具、溶劑，主要檢驗儀器，取樣方法和檢驗方法的驗證情況等。 取樣要求用示意圖、文字等指明取樣點的具體位置和取樣計劃，明確規(guī)定何時、何地、取多少樣品，如何給各樣品標記。這部分的內(nèi)容對方案的實施和保證驗

38、證結果的客觀性是至關重要的。 可靠性判斷標準在本部分應規(guī)定為證明待驗證清潔規(guī)程的可靠性，驗證試驗須重復的次數(shù)，一般至少連續(xù)3次試驗，所有數(shù)據(jù)都符合限度標準方可。2 .清潔驗證狀態(tài)的維護清潔驗證完成后該清潔方法即生效，清潔方法即進入維護與再驗證階段，企業(yè)應當對清潔驗證狀態(tài)進行持續(xù)維護，保證清潔方法持續(xù)可靠。在日常生產(chǎn)過程中對清潔方法進行監(jiān)控的目的是進一步考察清潔程序的可靠性，對于手工清洗過程來說，監(jiān)控尤其重要，因為其重現(xiàn)性很在程度上取決于人員的培訓和操作人員的實際操作技能。監(jiān)控辦法為在日常清潔時，定期進行抽樣檢測，確認清潔過程的有效性與操作的重現(xiàn)性。通過日常監(jiān)控數(shù)據(jù)的回顧，以確定再驗證的周期。2.2變更管理當已經(jīng)驗證的設備、清潔程序有任何變更以及產(chǎn)品處方、增加新產(chǎn)品等可能導致清潔規(guī)程或設備的變更，應組織相關人員對變更情況進行評估，確定是否需要進行再驗證，當發(fā)生下列情形之一時，須對清潔程序進行再驗證。 清潔程序變化時 清潔劑變化時 設備有重大變更時 增加相對更難清洗的產(chǎn)品時2.3清潔方