放線菌形態(tài)的觀察實驗報告

1、 山東大學(xué)實驗報告 2017年11月13日 _ _科 目：微生物學(xué)實驗 題 目： 放線菌的形態(tài)觀察 姓 名：丁志康一、 目的要求 1.學(xué)習(xí)并初步掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。 2.初步了解放線菌的形態(tài)特征。二、 基本原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的基內(nèi)菌絲（簡稱“基絲”），基絲生長到一定階段還能像空氣中生長出氣生菌絲（簡稱“氣絲”），并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生

2、。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。為了觀察放線菌的形態(tài)特征，人們設(shè)計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持住放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征。本試驗介紹其中幾種常用方法。1.插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。2.玻璃紙法：玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然

3、后將放線菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長狀態(tài)，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。3.印片法：將要觀察的放線菌的菌落或菌苔， 先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲的形態(tài)、孢子的排列及其形狀等。方法簡便、但形態(tài)特征可能有所改變。 （*本次試驗采用插片法）三、 器材1、菌種：青色鏈霉菌，弗氏鏈霉菌。2、培養(yǎng)基 ：高氏I號培養(yǎng)基。3、儀器及其他用具：經(jīng)滅菌的平皿、玻璃紙、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片，接種環(huán)，接種鏟，石碳酸復(fù)紅染液，顯微鏡等。四、 操作步驟a) 倒平板：取融化并冷卻至大

4、約50的高氏號瓊脂約20mL倒平板，凝固待用b) 接種：用接種環(huán)挑取菌種斜面培養(yǎng)物（孢子）在瓊脂平板上劃線接種c) 插片：以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約45°角插入瓊脂內(nèi)（插在接種線上），插片數(shù)量可根據(jù)需要而定。d) 培養(yǎng)：將插片平板倒置，28培養(yǎng)，培養(yǎng)時間根據(jù)觀察的目的而定，通常35d。e) 鏡檢：用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，然后將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢。（*觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，再換高倍鏡觀察；若要用油鏡觀察，需將有菌的一面朝下，并用膠紙將蓋玻片固定在載玻片上再觀察）五、 觀察結(jié)果1、實驗照片弗氏鏈霉菌（40×10）

5、 弗氏鏈霉菌（100×10，示孢子絲）弗氏鏈霉菌（100×10，示氣絲） 青色鏈霉菌（100×10，示未成熟孢子絲）六、 思考題1、試比較三種培養(yǎng)和觀察放線菌方法的優(yōu)缺點。答：插片法的操作最為簡便，且可以看到菌體在不同的時期菌絲的形態(tài)特產(chǎn)，一次性插入的玻片數(shù)可多至六七片，可供觀察的次數(shù)較多；玻璃紙法也可以看到菌體不同生長時期的形態(tài)特征，但不方便分次取出觀察，通常只能整張紙取出觀察，次數(shù)較少；印片法可用于觀察放線菌的孢子和孢子絲，且方便染色，染色之后觀察也更加清晰，但是看到的孢子絲常常為斷裂狀態(tài)，并不是原生狀態(tài)，也很難觀察到氣絲和基絲。2、玻璃紙培養(yǎng)和觀察法是否還可

6、用于其他類群微生物的培養(yǎng)和觀察？為什么？答：可以。因為玻璃紙是一種對于生物沒有毒害作用的半透膜，將它貼在培養(yǎng)基上后營養(yǎng)物質(zhì)可以通過玻璃紙讓生長在其上的微生物吸收成長，所以玻璃紙法廣泛應(yīng)用于多種放線菌和霉菌的培養(yǎng)與觀察。3、鏡檢時，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？答：看顏色，氣絲的顏色較暗，而基絲比較透明；看位置，基絲通常分布在蓋玻片插入端的下部，而氣絲則在插入端的上部；看形態(tài)，基絲通常分支更多，往往不斷分支并與其他基絲纏繞呈網(wǎng)狀，而氣絲分支數(shù)更少，兩個分支間的菌絲長度更長，看上去也比基絲更稀疏。七、 培養(yǎng)基的配制可溶性淀粉 20g硝酸鉀晶體 1g氯化鈉晶體 0.5g磷酸氫二鉀粉末 0.5g硫酸鎂晶體 0.5g硫酸亞鐵晶體 0.01g瓊