薄層色譜技術(shù)

1、1. 薄層色譜技術(shù) 概 述 中藥是祖國醫(yī)藥寶庫的重要組成部分，是祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)賴以防病治病的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣直接關(guān)系到人民用藥的安全和有效。在檢驗中藥真?zhèn)畏矫嫱ǔ２捎玫臋z測手段有形態(tài)鑒別、理化鑒別和光譜色譜分析等。而作為色譜技術(shù)一個分支的薄層色譜由于其獨具的長處而被廣泛應(yīng)用于中藥分析。層鑒別作為法定的檢驗項目是各級藥品檢驗部門和藥品生產(chǎn)、經(jīng)營部門的質(zhì)檢人員檢驗中藥的強制性檢驗項目。在可預(yù)見的將來，薄層色譜技術(shù)仍將是中藥鑒別最主要的手段之一 。 無須贅言，如同其它色譜技術(shù)一樣，一個樣品分析結(jié)果好壞，取決于能否得到一個分離度和重現(xiàn)性良好的色譜。為了更好地執(zhí)行國家藥典中藥薄層鑒別項目，中藥

2、檢驗室基本設(shè)備和配套和檢驗人員操作技術(shù)的規(guī)范化是獲得較高質(zhì)量的薄層色譜最基本的要求。 薄層色譜分析與其他色譜分析相比，其顯著不同之一是得到的圖譜是直觀性很強的圖象。一個比較復(fù)雜的中藥薄層色譜，尤其是成分未明而斑點較多的薄層色譜往往是很難用文字描述的；何況藥典正文因體例的限制，也不可能作過多的文字敘述。 關(guān)于同一品種的藥材商品的個體差異，如何判斷的問題。在實際的樣品分析中，的確存在著由于商品個體差異，致使薄層色譜難以和對照藥材和色譜完全吻合。其實，在藥材的形態(tài)鑒別中，這是司空見慣的問題，只要鑒別特征可靠，基礎(chǔ)工作比較扎實，一般不會由于個體之間的形態(tài)差異而無法判斷。因為同一品種的不同個體雖然有差異

3、（即使對照藥材也有這個問題），但是既然是同一品種，也必然存在著共性特征。外在的形態(tài)是如此，反映內(nèi)在成分的色譜也是如此。譬如有無牲成分就是共性，如黃連均含小檗堿，小檗堿的有無固名可以作為黃連真?zhèn)舞b別的依據(jù)，但小檗堿未必就是黃連的問題。所以觀察完整的色譜結(jié)合特征成分的辨認，就進一步提高了鑒別的準確度；經(jīng)過比較，取大同棄小異，做出合理的判斷。對于分布地區(qū)廣泛，商品規(guī)格較多的品種，需要反復(fù)比較；有些品種個體之間成分變異較大，需要做大量的基礎(chǔ)研究，掌握規(guī)律，方可設(shè)立對照藥材，不能一蹴而就，所以藥典中并非所有的品種都設(shè)有對照藥材。在中藥制劑中，由于制備工藝的不同或成分之間的相互干擾，圖譜常常不能與原藥材的

4、色譜完全吻合，這就是更需要分析人員有較強的判斷能力 -器材與操作薄層板 可用預(yù)制板或手工自制板，目前最常用的仍然是手工自制板。用于制備薄層板的玻璃要求表面光潔、平整，最好使用厚薄12mm的優(yōu)質(zhì)平板玻璃，普通玻璃一般不宜制作薄層板，玻璃板需洗凈至不掛水，晾干，貯存于干燥潔凈處備用。玻璃板反復(fù)使用時，應(yīng)注意經(jīng)常用洗液及堿液清洗，保持玻璃板面的光潔是保證薄層板質(zhì)量的最起碼要求，如選用預(yù)制板應(yīng)注意生產(chǎn)廠家提供的有關(guān)參數(shù)，經(jīng)挑選，試用是否符合要求。 涂布器 應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。涂層的工具有手工、半自動、全自動薄層涂布器。 點樣器材 最常用也最方便的是定量點樣毛細管（微升

5、毛細管），規(guī)格有0.5ul、1.0ul、2.0ul、5.0ul、10ul等多種。選用時要求標示容量準確，管端平整光滑，管壁潔凈，液流通暢，無堵塞，無污染。也可使用色譜用的微量移液管或薄層用微升注射器。 為了提高點樣效率，還可以選用點樣輔助設(shè)備，如點樣支架，半自動或自動點樣器。先用點樣器材和輔助設(shè)備應(yīng)注意器材本身的質(zhì)量，依賴劣質(zhì)的器材不能保證點樣的質(zhì)量。一般的概念定性鑒別沒有定量的要求，但為了對樣品在定性鑒別時能同時給以“量化”評價，點樣要求最好還是用定量的點樣器材。 展開箱（層析缸） 應(yīng)當用薄層色譜專用的展開箱，展開箱有水平式及直立式兩種類型；日常用的最多的是直立式展開箱，它又分為平底展開箱和

6、雙槽展開箱。雙-槽展開箱具有節(jié)省溶劑、便于平衡、可控制展開箱內(nèi)的濕度等優(yōu)點，推薦使用此種展開箱。水平式展開箱需要使用預(yù)制板或“加固”的自制板（如加羧甲基纖維素鈉），用水平式展開箱還可以從薄層板的兩側(cè)向中間展開，這樣可使一塊薄層板所承受的樣品個數(shù)比常規(guī)上行展開的薄層板增加一倍，但是由于展距短（約5cm），所以適合于高效預(yù)制板。 用不合規(guī)格的玻璃器皿，如生物標本缸等不能保證展開的質(zhì)量。 顯色與檢測儀器 載有樣品的薄層板展開后，有的需要用某些試劑（如顯色劑）使之顯色。涂布顯色劑的方法有噴霧法及浸漬法。噴霧用的噴霧瓶應(yīng)能在一定壓力下使試劑噴成均勻的細霧狀。浸漬法用的浸漬為特制的扁平玻璃槽，使用時，將展

7、開后的薄層板平穩(wěn)垂直地放入浸漬槽中一至數(shù)秒鐘后取出，揩凈薄層板背面殘余的試劑（需要時加熱）使之顯色。通常使用最多的仍然是噴霧法。 觀察薄層色譜用的紫外燈裝有長波段（365nm）和短波段（254nm）紫外光管兩種。前者用于觀察具有熒光的色譜，后者一般用于觀察硅膠GF254板在熒光背景下熒光淬滅斑點。選用紫外光應(yīng)注意熒光管的功率和濾光片的規(guī)格。 薄層掃描不僅可供薄層色譜的原位定量測定，薄層掃描圖對定性鑒別也能提供有用的信息。 薄層板的制備 除另有規(guī)定外，將1份吸附劑加適量的水（如1份硅膠G一般加3份水），在研缽中用杵沿一個方向小心研磨至成均勻的有適當粘稠度的膠漿，立即傾入涂布器中，均勻地向前推進涂

8、布在玻璃板上；或按照不同涂布器的規(guī)定操作涂布；涂布好的薄層板于室溫下在水平臺上晾干，再在規(guī)定的溫度（一般為105110）下烘約30分鐘活化，貯于干燥器中備用。應(yīng)當注意的是不同廠家或不同批號的硅膠G質(zhì)量不一，要求的加水量和研磨時間的長短有所不同，如加有其它改性劑更是如此，宜在操作中細心體會。薄層的厚度一般為0.20.3nm，由于國產(chǎn)商品硅膠的顆粒大小分布較寬（1040um），特別用顆粒較粗的硅膠，涂布的太薄反而降低分離能力，所以有的品種（如人參）要求用0.5mm厚的薄層板。薄層板一般要求新鮮制備，當天使用。使用前應(yīng)在反射光和透射光下檢查板面是否均勻；板面不均勻、有氣泡或有麻點、破損或已污染如灰塵

9、日光下檢查、纖維紫外光燈下檢查者應(yīng)棄去不用。 點樣 除加有規(guī)定外，按規(guī)定用微升毛細管（或其它符合要求的點樣的工具）分別吸取供試液或?qū)φ找?，以垂直的方向小心接觸薄層板面，做點狀點樣或條帶狀點樣。點樣基線與底邊距離，相距11.5cm，高效板810mm.，圓點直徑一般不大于3mm,高效板一般不大于2mm。如點樣量較大或為了改善分離度，也可點成510mm狹細的窄長條帶，高效板為48mm（長度視情況而不同），點樣時須注意盡量不要損傷薄層板面，如條帶點樣，應(yīng)注意條帶的均勻；預(yù)制板或加固的自制板，用專門的條帶點樣器械（如噴霧狀條帶點樣器），可保證點樣的質(zhì)量。點間距離可視斑點擴散情況以相鄰斑點不相干擾為宜，一

10、般不少于8mm,高效板不少于5mm. 點樣后的薄層板置入加有展開劑的展開箱（層析缸）中，密閉，上行展開，薄層板浸入展開劑中的深度一般要求溶劑的液面距原點約0.51cm，展開至815cm(高效板58cm)后，立即將薄層板取出，晾干，以備檢測。如規(guī)定在展開前需將展開箱用展開劑或規(guī)定的溶劑預(yù)平衡者，可在雙槽展開箱的一側(cè)加入適量的溶劑，密閉放置1530分鐘后，再將薄層板放入展開箱中展開。一般可將薄層板置于展開箱中一起飽和。 展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù)使用。展開劑如需分層，則按要求放置分層后分取需要的一相（上層或下層），備用。 檢測 色譜斑點本身有顏色者可直接在日光下觀察可見光譜，斑點在紫外光激發(fā)

11、下可發(fā)射熒光者，可直接在紫外光燈下觀察熒光色譜；需加試劑方能顯色或發(fā)射熒光者，則需將試劑均勻噴灑于薄層板面，直接觀察或加熱顯色后觀察。用浸漬法，板面顯色均勻是其優(yōu)點，但有的樣品經(jīng)試劑浸漬后，斑點容易被浸潤擴散，或產(chǎn)生拖尾。加熱顯色者須注意加熱時間和溫度，尤其含羧甲基纖維素鈉的薄層板，加熱溫度過高或加熱時間過長，容易引起板面的焦化，如用硫酸等顯色劑，更易造成板面的炭化而影響顯色的效果（需要加熱顯色的將薄層板放在烤箱下層）。有的成分加試劑后，如揮發(fā)油成分經(jīng)香草醛硫酸顯色，加熱溫度和時間長短不同或放置時間不同無援可能使斑點的顯色有所改變。 有的品種可熏以試劑或試液的蒸氣（如碘蒸氣、氨蒸氣）顯色。 必

12、要時，可進行薄層掃描，掃描圖譜不僅用于定量測定，對于定性鑒別也很有用。 小結(jié) 1. 羧甲基纖維素鈉水溶液的配制：一般為0.5%的羧甲基纖維素鈉，由于羧甲基纖維素鈉比較難溶，可將其煮沸或靜置幾天使其溶解。使用前將溶液過濾，這樣鋪的板麻點比較少。2. 固定相和流動相混合：先調(diào)好濃度，混合液大致混勻后，將研磨棒拿起一定高度，若液體流下成線，則濃度適中，反之則太稀。調(diào)好濃度后研磨15-20分鐘，在再超聲15-20分鐘。研磨時要勻速。3. 鋪板時要勻速，鋪得快則板厚，鋪得慢則較薄。4. 展開劑如果需要分層，最好分久一些（20分鐘以上，宮炎平則需要1小時以上），這樣展開的效果會比較好。配制時要看清楚所需的

13、溫度，是要上層還是下層。例如復(fù)方丹參片鑒別展開劑需要10度以下分層，展開劑放到展開缸中后需放置10分鐘使溫度達到室溫再展開。5. 點樣的大小需要經(jīng)驗來掌握，有的需要很小，例如咳特靈片的鑒別；有的要一針到底；如宮炎平的鑒別；比較稠的需要點成條帶狀防止拖尾。必要的時候可以點一個小的圓點，再點一個條帶狀的點。-影響薄層色譜分析的主要因素常規(guī)薄層色譜由于同板同時可以檢測多個樣品，分析時間短，固定相（吸附劑）價廉，即用即棄，不必擔心樣品中雜質(zhì)的污染，檢測不受溶劑的干擾，色譜的直觀性強等優(yōu)點而在中藥分析方面被廣泛使用。另一方面因為它是一種“敞開系統(tǒng)”的色譜技術(shù)，與柱色譜的區(qū)別之一是除材料及器材以外，外界環(huán)

14、境條件對被分離的物質(zhì)的層析行為影響很大，分離機制也很復(fù)雜；其次是由于分析的全過程是橫向的離線多步驟操作，所以操作技巧也明顯的影響色譜質(zhì)量；因而薄層色譜，尤其是常規(guī)薄層色譜，又被視為是一種較難駕馭的技術(shù)。為了充分發(fā)揮薄層色譜技術(shù)在中藥分析方面的優(yōu)勢，提高色譜的分離度和重現(xiàn)性，注意控制影響色譜質(zhì)量的因素是非常重要的。以下所述的幾個方面不僅對定量分析是必須注意的問題，對提高定性分析的質(zhì)量也是不可忽視的。 樣品的預(yù)處理及供試液的制備 一般認為薄層色譜所用的固定相（薄層板）可即用即棄，不怕供試液中雜質(zhì)的污染，因而樣品無需凈化精制，這是問題的一個方面；在實踐中，由于中藥的成分復(fù)雜，未知成分多，供試液中溶出

15、的物質(zhì)較多，其中既有欲測成分也有其他“雜質(zhì)”，常常由于相互干擾或背景污染而難以得到滿意的分離效果，甚至難以辨認，尤其是成方制劑更是如此。這是問題的另一方面，所以在許多情況下為了得到一個重要的有時甚至是關(guān)鍵的步驟。制備樣品供試液得以凈化，往往是一個重要的有時甚至是關(guān)鍵的步驟。制備樣品供試液所用的溶劑一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸點適中，而對于中藥材又常常希望將成分盡可能多的被提取出來，所以最常被選用的是甲醇或乙醇，因此欲測成分和許多其它“雜質(zhì)”均被提取出來，供試液的凈化就顯得更為必要。例如：復(fù)方丹參中的三七的鑒別。 樣品供試液凈化的方法： 1、單一溶劑萃取法，如浙貝母、平貝母、華山參、

16、洋金花等均利用在堿性介質(zhì)下用氯仿或苯將其生物堿有選擇地萃取出而舍棄其它成分。 使試液得以凈化。 2、分段萃取法，如龍膽瀉肝丸先用正已烷萃取，供當歸鑒別用；繼用丙酮萃取，供用以鑒別馬兜鈴酸（關(guān)木通）；最后用甲醇萃取再經(jīng)氧化鋁小柱甲醇洗脫，以鑒別龍膽苦甙，是利用了各自不同的溶解度，有不同極性的溶劑分段萃取，達到樣品供試液凈化的目的。 3、液液萃取法。 4、固液萃取法，如八珍丸、牛黃上清丸、烏雞白鳳丸、導(dǎo)赤丸等均先用硅藻土研勻，在固態(tài)下用溶劑萃取，以去除蜜糖的干擾。嚴格地講，這仍屬于單一黨課萃取。真正的固液萃取是固定相為固態(tài)，如將樣品的水提液（固定相）加入硅藻土小柱中使之成為“固態(tài)”，再用適當?shù)娜軇?/p>

17、（移動相）通過硅藻土小柱萃取，萃取液再經(jīng)濃縮等處理后作為供試液。用固液萃取或洗脫的方法制備樣品是色譜分析常用的方法，目前常用的還有化學(xué)鍵合相小柱以及硅膠小柱、氧化鋁小柱，如青葉膽、黃芪、斷血流、烏雞白鳳丸（芍藥甙）、龍膽瀉肝丸、參苓白術(shù)散（人參與甘草）、首烏丸（補骨脂）等。此外，益母草是用活性炭和中性氧化鋁小柱，國公灑（辛弗林）用陽離子交換樹脂柱。用氧化鋁須注意顆粒不可堿度粗或太細（一般可用100200目），活性能保持在23級，用適當?shù)牟Ａ≈ㄈ?ml及10ml注射針筒）裝填。氧化鋁吸附力較強，選用時應(yīng)有針對性。 薄層色譜的上樣技術(shù) 上樣（點樣）是薄層色譜分析的第一步，也是非常關(guān)鍵的一步。蛇

18、既關(guān)系到通融得到可以重現(xiàn)的有良好分離度的薄層色譜，也關(guān)系到定量測定結(jié)果的準確，因為不良的上樣是最主要的誤差來源。 1、薄層板的原點位置對樣品容積的負荷量是極為有限的，如上樣容積過大將明顯降低分離效率。中藥供試液中一般被測成分與“雜質(zhì)”共存，尤其是被測成分含量較低而其他干擾物質(zhì)較為大量時，常常習慣于或不得不加大點樣的容積，另一方面也是由于對上樣容積超負荷的嚴重后果認識不足?，F(xiàn)代商品預(yù)制板硅膠顆粒細（常規(guī)預(yù)制板1112um，高效預(yù)制板57um）而均勻，明顯提高了分離的效率，對上樣的要求更高了。如常規(guī)預(yù)制板展距100mm，原點直徑3mm，展開后如斑點直徑擴散到6mm，則斑點容量或稱分離數(shù)SN=10，

19、而用高效預(yù)制板原點直徑1mm，展開50mm，斑點直徑如擴散為2mm，則SN=50。但如果上樣量不適當?shù)丶哟?，如在高效板上原點直徑點成3mm，展開50mm后斑擴散為4mm，結(jié)果SN=6，即使用延長展距至100mm，SN也僅僅達到11，還可能達到15。由此可見即使用高質(zhì)量的薄層板，如上樣容積不適當?shù)丶哟?，分辨率也同樣不會得到提高。這就是為什么要求點樣原點直徑應(yīng)盡量小于3mm的原因。 2、溶解樣品的黨課均有不同程度的洗脫力，所以在上樣的同時，樣品在原點位置就呈環(huán)形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，即所謂“上樣環(huán)形色譜效應(yīng)”如樣品在溶劑中溶解度度很大，原點將變成空心圈，這種效應(yīng)對隨后的線性展開造成很

20、不利的影響。所以原則通過上應(yīng)選擇對被測成分可以溶解但溶解度不是很大的溶劑，中藥成分復(fù)雜，難以兼顧，不可能面面俱到，通常在欲測成分不甚清楚或欲測成分覆蓋的極性范圍很寬的情況下，寧愿選擇溶解“范圍”較寬的溶劑，如甲醇、乙醇等。有的品種欲測成分明確，如苦參、貝母中的生物堿、白術(shù)中的蒼術(shù)酮等可有針對性地選擇溶劑。有的品種選用了乙醚，由于乙醚沸點很低，最終的供試液則需要低溫揮去乙醚后，改用其他合適的溶劑制成。 3、供試液的溶劑在原點的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑極性與展開劑的溶劑極性相差較大時更為明顯；再者，親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)境）對色譜質(zhì)量的影響也可可

21、低估因此上樣時同步干燥或上樣后繼后干燥以除去原點殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，以免遇熱不穩(wěn)定的成分的破壞或促進硅膠有催化作用的活性表面起固態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品中某些成分的變性。 4、上樣裝置（微升毛細管或色譜注射器）對薄層的機械損傷對色譜質(zhì)量尤其是對定量分析將帶來災(zāi)難性的影響。特別是已載有樣品的硅膠表面顆粒被劃傷和刮除后果就更嚴重。一個壁厚0.02mm外徑0.3mm的注射針頭在薄層表面施加5g的機械力，表面局部承受的壓力為30巴，足以造成硅膠薄層表面的損傷，對棉布較軟的硅膠G薄層板損傷更嚴重。對如硅膠G這種軟板雖然劃傷表面難以避免（所以不太適合定量分析），但點樣時小心操作把損傷降

22、低到最低限度還是可以做到的。近年來上樣器械和上樣技術(shù)的不斷更新和改進已恰外樣質(zhì)量得到很大的提高。 提高上樣操作水平是獲得高質(zhì)量的色譜關(guān)鍵之一，一個組簡單的樣品的鑒別比較容易，一般只要在同一薄層板上供試樣品與對照品在相同位置上顯相同的斑點就基本上達到目的。但成分復(fù)雜的中藥材樣品的鑒別除檢出特定成分以外，常常需要以整個色譜與對照藥材的色譜作比較，甚至要依靠薄層“指紋圖譜”才能達到準確鑒別的目的。因此高質(zhì)量的上樣不僅是定量分析的需要，也常常是定性分析的要求。 -吸附劑的活性與相對濕度對薄層色譜的影響 吸附劑的活性是由表面能與表面積決定的。表面能越大，單位重量的表面積（比表面積）越大，吸附力越大，即活

23、性越高，反之，吸附力越小，活性越低。如硅膠之所以有吸附力，是由于其表面含眾多的硅醇基，硅醇基的活潑羥基及游離羥基與極性化合物或不飽化合物形成氫鍵所致。活潑型及游離型的硅醇基數(shù)目決定著硅膠的活性。硅醇基是親水基團，很容易吸附水而成為水合硅醇基而失去活性。自制的薄層板在105110烘干，就是使水合硅醇基變?yōu)橛坞x硅醇基而活化；反之，活化后的硅膠薄層板可以吸附大氣中的水蒸氣分子而降低活性。也就是說硅膠表面吸附水分的作用是可逆的，在不同的相對濕度下，可以達到不同程度的吸附平衡，在相對濕度改變的情況下會重新達到新的吸附平衡，而不論在此以前硅膠板是處于何種相對濕度狀態(tài)。在日常實踐中，當活化后的硅膠（或氧化鋁

24、）薄層板從干燥器中取出，從準備點樣到展開前，薄層板是暴露在實驗室的大氣中，薄層板的活性就取決于實驗環(huán)境的相對濕度。其他條件相同的情況下，相對濕度對色譜質(zhì)量的影響是很明顯的。通常認為薄層色說的重現(xiàn)性差，薄層板處在不同的相對溫度下操作是主要原因之一。 有些樣品的成分和所選用的展開劑對相對溫度有較寬的適應(yīng)能力，即對相對濕度的要求不甚嚴格，大致在相對濕度30%70%下得到相當穩(wěn)定的色譜。有的樣品在環(huán)境條件（溫度和相對濕度）恰好適合的情況下，似乎不必控制條件也能把試驗做好，但為了不同實驗室之間及不同季節(jié)均可重現(xiàn)試驗結(jié)果，應(yīng)盡可能在相對濕度可控的條件下展開為宜。至少必須記錄試驗時實際的相對溫度。 相對溫度

25、的控制方法，可在雙槽展開箱的一側(cè)槽中加入適當濃度的硫酸，將點樣后的薄層板放入另一側(cè)槽中，密閉放置1530分鐘，再加展開劑展開；另一種方法是在預(yù)先準備好條件控制箱（狀如平臥式展開箱，內(nèi)盛適當濃度的硫酸，或用大小適宜的干燥器）內(nèi)進行。 控制相對濕度用的硫酸溶液如表1相對濕度 硫酸（ML） 水（ML） 32% 68 100 42% 57 100 58% 39.5 100 65% 34 100 72% 27.5 100 88% 10.8 100 硫酸D=1.86（）溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用 薄層色譜與柱色譜的區(qū)別之一就是溶劑的蒸氣在相在展開箱中也參與色譜展開而形成三維的層析過程。展開箱的氣體空間在層

26、析過程中起著重要的作用。 通常所謂的“展開箱飽和”應(yīng)嚴格區(qū)分以下幾種情況： 5、展開箱飽和：是指展開前及展開中溶劑系統(tǒng)中所有組分在展開箱的整修氣體空間達到平衡，即達到飽和狀態(tài)；但在日常的實踐中，較少需要在“飽和”狀態(tài)下展開，而只需用展開劑（或規(guī)定的溶劑）的蒸氣在展開箱中預(yù)平衡一定的時間，即本書中所稱的“預(yù)平衡”。 6、預(yù)吸附：通常是指薄層板的干燥板面（即未被溶劑濕潤的部分）對展開箱空間氣體分子任何程度的吸附，即通常所謂的“預(yù)飽和”。 7、吸附飽和：是指薄層板的未被溶劑濕潤的部分與展開箱的飽和氣體空間達到平衡狀態(tài)，即“完全飽和”，這是預(yù)吸附的極限狀態(tài)。 8、毛細管飽和：是指薄層板所有的自由空隙借

27、毛細管的作用被溶劑充滿的過程，即相當于展開完成后的狀態(tài)。 飽和和情況與展開箱的類型有關(guān)，常老人家的平底展開箱在展開前較難達到展開箱飽和，所以普通的做法是在內(nèi)壁加貼與之等寬等高的用溶劑濕潤的濾紙，有助于達到飽和。用雙槽展開箱在其一側(cè)槽中加溶劑可以較容易地達到吸附飽和和及展開箱飽和。如用夾心式展開箱，由于箱內(nèi)空間很小，展開前因為空間沒有溶劑分子，而且很難有空間擴散，所以實際上是非飽和的。在這種非飽和和來心式展開箱中薄層板不產(chǎn)生預(yù)吸附現(xiàn)象。通常誤認為來心式展開箱空間小很容易飽和，其實只有在展開守成后才達到飽和，但這時對層析過程已不起作用。 在常規(guī)薄層色譜分析中，預(yù)吸附和吸附飽和對層析過程有很大的影響

28、。吸附劑表面的空間是很有限的，當用多組分溶劑展開時，不同溶劑分子在吸附區(qū)相互競爭，發(fā)生“取代效應(yīng)”，尤其在薄層板的下部，一個級分的等溫吸附線會受到另外組分的性質(zhì)和相對飽和程度的影響。 如硅膠是親水性吸附劑，它首先對溶劑組分中的極性分子有更大的親合力，的以在吸附平衡的過程中，被吸附的各組分的濃度比與氣體空間的很不相同，與溶劑的液相組成差別更大。可以想象在不加控制的情況下情況是很復(fù)雜的。簡言之，薄層板在沒有預(yù)吸附時，混合溶劑系統(tǒng)中的一部分溶劑分子有選擇地被吸附在薄層板面上而形成固定相，同時在板上形成溶劑梯度從而直接影響層析過程，溶劑的蒸氣相、液相和固定相一起構(gòu)成了一個作用機制復(fù)雜的三維層析過程。

29、例如藥典收載的黃連生物堿的薄層鑒別，其展開劑為苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（6：3：11.5:0.5），其中的濃氨溶液實際上起著雙重的作用，氨是以蒸氣相在薄層板上預(yù)吸附參與使生物堿分離，在液相（展開劑）中起作用的是水，如在雙槽展開相的一側(cè)槽中加濃氨試液5ml，使展開箱預(yù)平衡15分鐘，將展開劑中的濃氨試液改為0.3ml水，可以得到相似的分離效果；如氨蒸氣的濃度不夠，分離度明顯降低;如展開前不用氨蒸氣預(yù)平衡，直接展開，則各生物堿斑點Rf值偏低，小檗堿、巴馬汀等均滯留在原點附近，難以預(yù)平衡直接展開所得的色譜有明顯的不同，即經(jīng)預(yù)平衡后展開的色譜分離度明顯提高，而且重現(xiàn)性良好。 關(guān)于薄層色譜的優(yōu)化及溶劑系統(tǒng)（展開劑）的選擇 依靠色譜分離混合特質(zhì)需要解決的主要問題有兩個：（1）相鄰物質(zhì)對的分離；（2）在一個寬極性范圍內(nèi)的多組分混合物的分離。就薄層色譜而言，解決這兩類不同的問題，所需要的優(yōu)化技術(shù)是不同的。解決相鄰物質(zhì)的分離，主要就兩個相鄰物質(zhì)的理化性持，考慮選用正相薄層板還是反相薄層板，再考慮選用單一組成的展開劑還是混合溶劑以及極性大小或酸堿性等，甚至考慮選用什么的展開技術(shù)，如低Rf值的物質(zhì)對可考慮用U-型展開箱，作徑向展開等。對復(fù)雜混合物的分離，問題要復(fù)雜得多，一般即使采用了梯度展開技術(shù)，也不大可