醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)--磺胺類(lèi)1課件VIP

1、醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1一、概述一、概述(i sh)l磺胺類(lèi)磺胺類(lèi)(Slfonamides)藥物是獸醫(yī)上較常用的一類(lèi)合藥物是獸醫(yī)上較常用的一類(lèi)合成抗感染藥物成抗感染藥物,具有抗病原體范圍廣、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)具有抗病原體范圍廣、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、使用方便、易于生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。定、使用方便、易于生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。l磺胺藥種類(lèi)繁多磺胺藥種類(lèi)繁多,獸醫(yī)上常用的有獸醫(yī)上常用的有10余種余種(圖圖) 。l磺胺藥單獨(dú)使用磺胺藥單獨(dú)使用,病原體易產(chǎn)生耐藥性病原體易產(chǎn)生耐藥性,與抗菌增效劑與抗菌增效劑如如TMP(甲氧芐啶甲氧芐啶)等聯(lián)用等聯(lián)用,抗菌范圍擴(kuò)大抗菌范圍擴(kuò)大,療效明顯增療效明顯增強(qiáng)強(qiáng),用來(lái)治療畜禽腸道感染、乳

2、腺炎、肺炎等疾病。用來(lái)治療畜禽腸道感染、乳腺炎、肺炎等疾病。l同時(shí)同時(shí)(tngsh)也被廣泛的用作飼料添加劑也被廣泛的用作飼料添加劑,用來(lái)增肥用來(lái)增肥 犢犢牛和豬。牛和豬。第一頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1吸收后存在吸收后存在(cnzi)形式形式l磺胺藥吸收后磺胺藥吸收后,一部分在血漿中保持游離狀態(tài)一部分在血漿中保持游離狀態(tài)(游離游離型型),一部分與血漿蛋白相結(jié)合一部分與血漿蛋白相結(jié)合(結(jié)合結(jié)合(jih)型型),另一部分在肝另一部分在肝臟中高度乙酰化變成臟中高度乙?；兂梢阴；前芬阴；前贰游離型游離型具抗菌作用具抗菌作用,且能透過(guò)毛細(xì)血管進(jìn)入各種體液和組且能透過(guò)毛細(xì)血管進(jìn)

3、入各種體液和組織?？棥結(jié)合型結(jié)合型無(wú)抗菌活性無(wú)抗菌活性,也不能透入體液或組織中也不能透入體液或組織中,但結(jié)合較但結(jié)合較疏松疏松,能不斷分解出游離型磺胺。能不斷分解出游離型磺胺。l乙?；阴；腔前返闹饕x產(chǎn)物是磺胺的主要代謝產(chǎn)物,無(wú)抗菌活性。無(wú)抗菌活性。第二頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1體內(nèi)分布體內(nèi)分布(fnb)、代謝、代謝l磺胺藥在體內(nèi)分布相當(dāng)廣泛。各種組織和體液均能到達(dá)。以磺胺藥在體內(nèi)分布相當(dāng)廣泛。各種組織和體液均能到達(dá)。以血液血液中中含量含量最高最高,肝、腎肝、腎次之次之,胸水、腹水、滑膜液、房水中濃度也較高胸水、腹水、滑膜液、房水中濃度也較高,并并能能透過(guò)胎盤(pán)透

4、過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)。進(jìn)入胎兒體內(nèi)。l磺胺藥在磺胺藥在神經(jīng)神經(jīng)、肌肉肌肉及及脂肪脂肪組織中的含量則組織中的含量則較低較低。l磺胺藥主要在肝臟磺胺藥主要在肝臟(gnzng)代謝代謝,代謝方式代謝方式有乙?；?、羥基化、結(jié)合有乙?；?、羥基化、結(jié)合等等,其中以其中以乙?；癁橹饕阴；癁橹?。l磺胺藥乙?；笫タ咕饔没前匪幰阴；笫タ咕饔?且在尿中的溶解度降低且在尿中的溶解度降低,易在腎易在腎小管析出結(jié)晶小管析出結(jié)晶,造成對(duì)泌尿道的損害。應(yīng)注意同服碳酸氫鈉造成對(duì)泌尿道的損害。應(yīng)注意同服碳酸氫鈉,并增加并增加飲水飲水,可減少或避免其對(duì)泌尿道的損害?？蓽p少或避免其對(duì)泌尿道的損害。l部分磺胺藥及代謝產(chǎn)物在部

5、分磺胺藥及代謝產(chǎn)物在肝肝內(nèi)成為水溶性的內(nèi)成為水溶性的葡萄糖醛酸結(jié)合物葡萄糖醛酸結(jié)合物而而失去活性。失去活性。第三頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1排泄排泄(pixi)l內(nèi)服難吸收內(nèi)服難吸收的磺胺的磺胺(hun n)藥藥,主要由主要由糞便糞便排出排出;l內(nèi)服易吸收內(nèi)服易吸收的磺胺藥主要通過(guò)的磺胺藥主要通過(guò)腎臟腎臟排泄排泄,通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)或腎小通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)或腎小管分泌到達(dá)腎小管腔內(nèi)的藥物管分泌到達(dá)腎小管腔內(nèi)的藥物,有一部分被腎小管重吸收。重有一部分被腎小管重吸收。重吸收少、排泄快的藥物如磺胺異惡唑在尿中濃度較高吸收少、排泄快的藥物如磺胺異惡唑在尿中濃度較高,適用于治適用于治療泌尿

6、道感染。主要由腎小管分泌療泌尿道感染。主要由腎小管分泌,重吸收多的藥物在尿中濃度低重吸收多的藥物在尿中濃度低,但在血中有效濃度維持時(shí)間較長(zhǎng)但在血中有效濃度維持時(shí)間較長(zhǎng),多屬長(zhǎng)效如多屬長(zhǎng)效如SMZ、SMM等。等。l磺胺藥尚可經(jīng)腸液、膽汁分泌排出磺胺藥尚可經(jīng)腸液、膽汁分泌排出,也可由乳汁排泄也可由乳汁排泄,但量但量較少較少。第四頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1常見(jiàn)常見(jiàn)(chn jin)磺胺藥磺胺藥l磺胺嘧啶磺胺嘧啶l三甲三甲(sn ji)氧芐啶氧芐啶l磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶l磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶l磺胺喹惡啉磺胺喹惡啉l磺胺噻唑磺胺噻唑l巴喹普林巴喹普林第五頁(yè)，共四十頁(yè)。

7、醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1二、樣品二、樣品(yngpn)處理處理l常用的磺胺類(lèi)藥物常用的磺胺類(lèi)藥物,除少數(shù)外除少數(shù)外,一般具有以下一般具有以下(yxi)的基本結(jié)構(gòu)的基本結(jié)構(gòu):磺酰胺基其化學(xué)性質(zhì)可從四部分結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)出來(lái)其化學(xué)性質(zhì)可從四部分結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)出來(lái),即即:磺酰胺基磺酰胺基( SO2NHR)、芳伯氨基芳伯氨基(nj)( NH2)、芳環(huán)、芳環(huán)、N1及及N4上的取代基。上的取代基。(R=H),兩性化合物兩性化合物,可溶于酸或堿溶液?？扇苡谒峄驂A溶液?；酋０被幕酋０被乃嵝运嵝员憩F(xiàn)在表現(xiàn)在N1上上的活潑氫原子的活潑氫原子,其酸性的大其酸性的大小取決于小取決于N1上的取代基上的取代基R。R

8、的吸電性越大的吸電性越大,則其酸性越則其酸性越強(qiáng)。強(qiáng)。第六頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì)(huxu xngzh)l本類(lèi)藥物本類(lèi)藥物水溶性較低水溶性較低,易溶于極性有機(jī)溶劑易溶于極性有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮、乙如乙醇、丙酮、乙腈、氯仿和二氯甲烷腈、氯仿和二氯甲烷,難溶于非極性有機(jī)溶劑難溶于非極性有機(jī)溶劑。l由于磺胺藥具有酸堿兩性由于磺胺藥具有酸堿兩性,通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH值值(pH79),可以使磺可以使磺胺藥呈不同狀態(tài)胺藥呈不同狀態(tài),即即中性分子中性分子還是還是離子分子離子分子,從而改變水相和有從而改變水相和有機(jī)相的分配系數(shù)。機(jī)相的分配系數(shù)。l例如例如

9、,磺胺的中性分子磺胺的中性分子,在二氯甲烷等有機(jī)溶劑中分配系數(shù)大在二氯甲烷等有機(jī)溶劑中分配系數(shù)大;離離子態(tài)分子子態(tài)分子,則水性溶液中分配系數(shù)大。則水性溶液中分配系數(shù)大。l生物樣品通過(guò)生物樣品通過(guò)多次液多次液-液萃取液萃取(cuq),可達(dá)到凈化的目的?？蛇_(dá)到凈化的目的。第七頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)11、提取、提取(tq)l液體樣品液體樣品(如牛奶如牛奶)可用水稀釋過(guò)濾后可用水稀釋過(guò)濾后,熒光直接檢測(cè)熒光直接檢測(cè),亦可用水性亦可用水性緩沖液或氯化鈉溶液稀釋緩沖液或氯化鈉溶液稀釋,再進(jìn)行凈化處理。再進(jìn)行凈化處理。l蜂蜜樣品蜂蜜樣品可用水或水性緩沖液稀釋?？捎盟蛩跃彌_液稀釋

10、。l組織樣品組織樣品(如肌肉、腎臟、肝臟如肌肉、腎臟、肝臟)的預(yù)處理相對(duì)復(fù)雜些的預(yù)處理相對(duì)復(fù)雜些,一般采取一般采取均質(zhì)、液均質(zhì)、液-液萃取或固相萃取凈化等步驟。液萃取或固相萃取凈化等步驟。l液液-液萃取操作煩瑣液萃取操作煩瑣,而蛋白沉淀后直接進(jìn)樣而蛋白沉淀后直接進(jìn)樣,雖操作簡(jiǎn)便、并具有雖操作簡(jiǎn)便、并具有(jyu)較高的回收率較高的回收率,但對(duì)色譜柱的損害較為嚴(yán)重。但對(duì)色譜柱的損害較為嚴(yán)重。第八頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1溶劑溶劑(rngj)提取提取l溶劑溶劑(rngj)提取提取時(shí)時(shí),應(yīng)盡可能使組織中應(yīng)盡可能使組織中結(jié)合態(tài)結(jié)合態(tài)的殘留物溶解的殘留物溶解,并且并且除去大部分的

11、蛋白質(zhì)。除去大部分的蛋白質(zhì)。l一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮或混合溶劑等烷、丙酮或混合溶劑等極性溶劑極性溶劑進(jìn)行提取。進(jìn)行提取。l二氯甲烷中加入二氯甲烷中加入離子對(duì)試劑離子對(duì)試劑四丁基銨四丁基銨(pH10),對(duì)魚(yú)肉和動(dòng)物組織對(duì)魚(yú)肉和動(dòng)物組織的提取的提取,發(fā)現(xiàn)磺胺二甲氧嘧啶和奧美普林的提取率很高。發(fā)現(xiàn)磺胺二甲氧嘧啶和奧美普林的提取率很高。l另外另外,提取過(guò)程中加入提取過(guò)程中加入無(wú)水硫酸鈉無(wú)水硫酸鈉可脫去組織樣品中的水分可脫去組織樣品中的水分,有有助于樣品的充分提取。助于樣品的充分提取。第九頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘

12、留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)12、凈化、凈化(jnghu)l初提取液中含大量的內(nèi)源性干擾雜質(zhì)初提取液中含大量的內(nèi)源性干擾雜質(zhì),在痕量分析時(shí)會(huì)干擾組分在痕量分析時(shí)會(huì)干擾組分的測(cè)定的測(cè)定,因此還需要凈化處理。因此還需要凈化處理。l凈化方法凈化方法有液有液-液萃取、固相萃取、基質(zhì)固相分散、在線(xiàn)痕量液萃取、固相萃取、基質(zhì)固相分散、在線(xiàn)痕量富集、液相色譜、在線(xiàn)透析和超臨界流體萃取等。富集、液相色譜、在線(xiàn)透析和超臨界流體萃取等。l有時(shí)有時(shí)(yush)為了獲得高的凈化效果為了獲得高的凈化效果,幾種方法相結(jié)合應(yīng)用。幾種方法相結(jié)合應(yīng)用。第十頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1液液-液萃取液萃取(cuq)l液

13、液-液萃取液萃取盡管操作煩瑣盡管操作煩瑣(fn su)、耗費(fèi)溶劑、耗費(fèi)溶劑,但在所有凈化方法中但在所有凈化方法中應(yīng)用最廣。應(yīng)用最廣。l通過(guò)通過(guò)調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)樣液的樣液的pH值值,使磺胺類(lèi)藥物有選擇性地在有機(jī)相與水使磺胺類(lèi)藥物有選擇性地在有機(jī)相與水相之間進(jìn)行分配。相之間進(jìn)行分配。l例如例如,有機(jī)相提取液中的磺胺類(lèi)藥物可以被強(qiáng)酸溶液或堿性溶液抽有機(jī)相提取液中的磺胺類(lèi)藥物可以被強(qiáng)酸溶液或堿性溶液抽提提,若將水相提取液調(diào)節(jié)若將水相提取液調(diào)節(jié)pH至至5.15.6,可用二氯甲烷或乙酸乙酯進(jìn)行可用二氯甲烷或乙酸乙酯進(jìn)行再抽提。再抽提。l離子對(duì)提取法離子對(duì)提取法亦有應(yīng)用亦有應(yīng)用,例如例如,水相提取液調(diào)節(jié)水相提取液調(diào)

14、節(jié)pH至至1011,加加入四丁基銨離子對(duì)試劑入四丁基銨離子對(duì)試劑,形成磺胺類(lèi)離子對(duì)形成磺胺類(lèi)離子對(duì),可以被二氯甲烷提可以被二氯甲烷提取。取。l用用正己烷正己烷或或乙醚乙醚進(jìn)行液進(jìn)行液-液萃取液萃取,可以可以脫脂肪脫脂肪。第十一頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1固相萃取固相萃取(cuq)l由于甲氧芐啶常和其他磺胺藥物同時(shí)由于甲氧芐啶常和其他磺胺藥物同時(shí)(tngsh)使用使用,而它們具有不而它們具有不同的同的pKa和溶劑親和力和溶劑親和力,難以在給定的難以在給定的pH值和溶劑系統(tǒng)中同時(shí)提值和溶劑系統(tǒng)中同時(shí)提取取,宜采用宜采用固相萃取法固相萃取法(SPE)。l常用的常用的SPE柱柱,

15、如如C18和和C8、硅膠柱、離子交換柱、硅膠柱、離子交換柱、Florisil柱和柱和堿性氧化鋁柱等。堿性氧化鋁柱等。l該法操作較為簡(jiǎn)便、并對(duì)生物樣品具有較高的該法操作較為簡(jiǎn)便、并對(duì)生物樣品具有較高的“凈化凈化”能力能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可將幾種小柱串聯(lián)應(yīng)用可提高方法的提取回收率和精密度。亦可將幾種小柱串聯(lián)應(yīng)用,可獲得更高的凈化效果?？色@得更高的凈化效果。l基質(zhì)固相分散法基質(zhì)固相分散法目前只使用目前只使用C18吸附劑吸附劑,該方法簡(jiǎn)便、提取率和該方法簡(jiǎn)便、提取率和凈化能力均高凈化能力均高,已應(yīng)用于魚(yú)肉、牛肉、豬肉和牛奶樣品的預(yù)處已應(yīng)用于魚(yú)肉、牛肉、豬肉和牛奶樣品的預(yù)處理。理。第

16、十二頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1柱切換柱切換(qi hun)技術(shù)技術(shù)l在線(xiàn)痕量富集技術(shù)在線(xiàn)痕量富集技術(shù)可分離可分離/凈化牛奶樣品凈化牛奶樣品(yngpn)中中9種磺胺類(lèi)種磺胺類(lèi)藥物：藥物：l磺胺類(lèi)藥物在預(yù)富集柱磺胺類(lèi)藥物在預(yù)富集柱RP-C18(10m)中被保留濃縮中被保留濃縮,干擾干擾雜質(zhì)用淋洗劑洗去后雜質(zhì)用淋洗劑洗去后,預(yù)柱中的磺胺類(lèi)藥物再用洗脫液洗脫預(yù)柱中的磺胺類(lèi)藥物再用洗脫液洗脫,進(jìn)入分析柱中分離。進(jìn)入分析柱中分離。l有研究者將有研究者將TSK凝膠滲透柱和凝膠滲透柱和PLRP-S預(yù)富集柱串聯(lián)使預(yù)富集柱串聯(lián)使用用,用于凈化豬組織中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑和甲用于凈

17、化豬組織中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑和甲氧芐啶。氧芐啶。第十三頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1在線(xiàn)在線(xiàn)(zi xin)透析透析l采取采取在線(xiàn)透析、富集的方法在線(xiàn)透析、富集的方法,可測(cè)定動(dòng)物源食品可測(cè)定動(dòng)物源食品(肌肉、肌肉、牛奶和蛋牛奶和蛋)中的中的13種磺胺類(lèi)藥物：種磺胺類(lèi)藥物：l利用纖維素膜選擇性滲過(guò)分析物利用纖維素膜選擇性滲過(guò)分析物,到達(dá)預(yù)富集柱到達(dá)預(yù)富集柱(C18、XAD-2或或XAD-4),干擾干擾(gnro)雜質(zhì)用淋洗劑洗去雜質(zhì)用淋洗劑洗去,濃縮后濃縮后的分析物被洗脫后的分析物被洗脫后,進(jìn)入分析柱分離。進(jìn)入分析柱分離。第十四頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技

18、術(shù)-磺胺類(lèi)1超臨界流體超臨界流體(lit)萃取萃取l超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法被用于豬腎臟樣品中甲氧芐啶和被用于豬腎臟樣品中甲氧芐啶和3種類(lèi)固醇激素的提取分離種類(lèi)固醇激素的提取分離(fnl)。lCO2提取時(shí)提取時(shí),分析物被保留在柱的進(jìn)樣端分析物被保留在柱的進(jìn)樣端,大部分內(nèi)大部分內(nèi)源性干擾物被洗去后源性干擾物被洗去后,分析物和一些極性干擾物用加入分析物和一些極性干擾物用加入改性劑的改性劑的CO2洗脫。洗脫。第十五頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1三、分析方法三、分析方法l生物樣品中磺胺類(lèi)藥物的分析生物樣品中磺胺類(lèi)藥物的分析,光譜法光譜法(分光光度法、熒分光光度法、熒光光譜法

19、光光譜法)和和色譜法色譜法（薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、（薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、超臨界流體色譜）具有靈敏、快速、方便等優(yōu)點(diǎn)。超臨界流體色譜）具有靈敏、快速、方便等優(yōu)點(diǎn)。l例如：分光光度法測(cè)定牛組織中的磺胺例如：分光光度法測(cè)定牛組織中的磺胺(hun n)甲嘧甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺啶，蜂蜜中的磺胺(hun n)噻唑，奶中的乙?；前粪邕?，奶中的乙?；前?hun n)、 N-乙?；前范奏奏ぃ灰阴；前范奏奏?；l薄層色譜法測(cè)定動(dòng)物組織、豬肝、奶中的磺胺甲嘧薄層色譜法測(cè)定動(dòng)物組織、豬肝、奶中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。第十六頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺

20、類(lèi)11、光譜法、光譜法l光譜法主要用于樣品中光譜法主要用于樣品中個(gè)別磺胺類(lèi)藥物個(gè)別磺胺類(lèi)藥物的分析的分析,最常用的方法為最常用的方法為重氮重氮化化-偶合反應(yīng)分光光度法偶合反應(yīng)分光光度法。l無(wú)無(wú)N4取代基的磺胺類(lèi)藥物取代基的磺胺類(lèi)藥物,或或N4為酰氨基的磺胺類(lèi)藥物為酰氨基的磺胺類(lèi)藥物,經(jīng)水解經(jīng)水解,在在酸性介質(zhì)酸性介質(zhì)中經(jīng)中經(jīng)重氮化重氮化后后,可在可在堿性堿性中與酚類(lèi)中與酚類(lèi)(如如-萘酚、麝香草酚萘酚、麝香草酚)偶合偶合,在在中性中性中與變色酸偶合中與變色酸偶合,或在或在弱酸性弱酸性中與胺類(lèi)偶合呈色中與胺類(lèi)偶合呈色,于空于空白校正下白校正下,在一定波長(zhǎng)處測(cè)其吸收度。與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照在一定波長(zhǎng)處測(cè)其吸

21、收度。與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照(duzho),即可測(cè)即可測(cè)定其含量。定其含量。l最常應(yīng)用的是酸性偶合試劑最常應(yīng)用的是酸性偶合試劑,如如N-(1-萘基萘基)乙二胺乙二胺(Bratton Marshall方法方法),測(cè)定波長(zhǎng)隨組分的不同略有不同測(cè)定波長(zhǎng)隨組分的不同略有不同,一般為一般為540545nm,已應(yīng)已應(yīng)用于牛組織和奶中的磺胺二甲嘧啶檢測(cè)、蜂蜜中的磺胺噻唑檢用于牛組織和奶中的磺胺二甲嘧啶檢測(cè)、蜂蜜中的磺胺噻唑檢測(cè)。測(cè)。第十七頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1l也有應(yīng)用也有應(yīng)用1-(-二乙氨基二乙氨基-乙基乙基-氨基氨基)萘萘,優(yōu)點(diǎn)為偶合形成的偶氮染優(yōu)點(diǎn)為偶合形成的偶氮染料是水溶性的料是水

22、溶性的,且其吸收系數(shù)也較大。這兩種偶合試劑遇亞硝酸且其吸收系數(shù)也較大。這兩種偶合試劑遇亞硝酸都能變色都能變色,所以所以,經(jīng)重氮化后經(jīng)重氮化后,應(yīng)以氨基磺酸鹽將剩余的亞硝酸分應(yīng)以氨基磺酸鹽將剩余的亞硝酸分解除去。解除去。l光譜法選擇性差光譜法選擇性差,但可作為但可作為(zuwi)一種一種篩選法篩選法應(yīng)用應(yīng)用,如牛奶中磺胺如牛奶中磺胺醋酰和磺胺脒啶的篩選測(cè)定。醋酰和磺胺脒啶的篩選測(cè)定。第十八頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)12、薄層、薄層(bo cn)色譜法色譜法l薄層色譜薄層色譜(TLC)經(jīng)常作為樣品篩選方法。經(jīng)常作為樣品篩選方法。l經(jīng)薄層色譜分離后的磺胺類(lèi)藥物經(jīng)薄層色譜分離后的

23、磺胺類(lèi)藥物,可按兩種方法進(jìn)行定量分析：可按兩種方法進(jìn)行定量分析：洗洗脫定量法脫定量法和和薄層掃描定量法薄層掃描定量法。l洗脫定量法：洗脫定量法：從板上洗脫后從板上洗脫后,可按分光光度法可按分光光度法,或與熒光胺、對(duì)二或與熒光胺、對(duì)二甲氨基苯甲醛甲氨基苯甲醛(ji qun)反應(yīng)后的比色法反應(yīng)后的比色法,或重氮化或重氮化-偶合后的比色偶合后的比色法進(jìn)行。其中法進(jìn)行。其中,以以重氮化重氮化-偶合法偶合法最好。最好。l但與實(shí)際相比但與實(shí)際相比,測(cè)得值尚低測(cè)得值尚低5%15%。結(jié)果偏低的主要原因是薄。結(jié)果偏低的主要原因是薄層色譜條件不穩(wěn)定層色譜條件不穩(wěn)定,吸附劑可能部分損失。板上洗脫后重氮化吸附劑可能部

24、分損失。板上洗脫后重氮化-偶合偶合法如下法如下:第十九頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1l刮下的薄層用刮下的薄層用1mol/L HCl 10mL提取提取,所得提取液先加所得提取液先加0.1%NaNO2液液1mL,5min后后,再加再加0.5%氨基磺酸銨液氨基磺酸銨液1mL,強(qiáng)烈強(qiáng)烈(qin li)振搖后振搖后,加入加入0.1% N, N-乙基乙基-N (1-萘基萘基)乙二胺草酸鹽溶液乙二胺草酸鹽溶液1mL,10min后后,用用3cm的吸收池的吸收池,以同以同法所得的試劑空白為對(duì)照法所得的試劑空白為對(duì)照,于于546mm處處(SMP、SIZ、ST的的max)或或542nm處處為為S

25、M2 、SPZ(磺胺苯吡唑）的磺胺苯吡唑）的max進(jìn)行測(cè)定。進(jìn)行測(cè)定。第二十頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1薄層掃描薄層掃描(somio)定量法定量法l薄層掃描法（薄層掃描法（TLCS）系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層）系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見(jiàn)吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行色譜中有紫外或可見(jiàn)吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢查的方法。掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢查的方法。l隨著制板、點(diǎn)樣、展開(kāi)等操作的儀器化及儀器性能隨著制板、點(diǎn)樣、展開(kāi)等操作的儀器化及

26、儀器性能(xngnng)的改的改進(jìn)，薄層掃描法檢測(cè)的靈敏度，結(jié)果的精密度與準(zhǔn)確度均大大進(jìn)，薄層掃描法檢測(cè)的靈敏度，結(jié)果的精密度與準(zhǔn)確度均大大提高。提高。l與高效液相色譜法相比，具有多通道效應(yīng)，可同時(shí)平行分離分與高效液相色譜法相比，具有多通道效應(yīng)，可同時(shí)平行分離分析多個(gè)樣品；流動(dòng)相用量少且選擇范圍寬、更換方便；固定相析多個(gè)樣品；流動(dòng)相用量少且選擇范圍寬、更換方便；固定相為一次性使用，對(duì)樣品的預(yù)處理要求不高等優(yōu)點(diǎn)。為一次性使用，對(duì)樣品的預(yù)處理要求不高等優(yōu)點(diǎn)。 第二十一頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1l應(yīng)用應(yīng)用TLC紫外分光光度法進(jìn)行磺胺類(lèi)藥物定量分析時(shí)紫外分光光度法進(jìn)行磺胺類(lèi)藥物

27、定量分析時(shí),有有7%11%的損失。的損失。l如用無(wú)黏合劑的硅膠如用無(wú)黏合劑的硅膠,以以0.1mol/L NaOH調(diào)糊制板調(diào)糊制板,可可以獲得較好的回收率。以獲得較好的回收率。lTLC的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、可以同時(shí)在多塊板上點(diǎn)樣的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、可以同時(shí)在多塊板上點(diǎn)樣,處理大量樣品處理大量樣品(yngpn)時(shí)間短時(shí)間短,適合飼料、組織、體液適合飼料、組織、體液樣品的篩選分析。樣品的篩選分析。第二十二頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)13、氣相色譜法、氣相色譜法l氣相色譜法氣相色譜法(GC)具有高的靈敏度和選擇性具有高的靈敏度和選擇性,但由于磺胺類(lèi)藥物但由于磺胺類(lèi)藥物(yow)難揮發(fā)難揮

28、發(fā), 測(cè)定時(shí)需要測(cè)定時(shí)需要衍生化衍生化。l一般用一般用重氮甲烷重氮甲烷甲基化甲基化,或甲基化后再用或甲基化后再用N-甲基甲基-N-三甲基硅烷基三甲基硅烷基三氟乙酰胺三氟乙酰胺(MSTFA)進(jìn)行進(jìn)行硅烷化硅烷化或或N-甲基雙甲基雙(三氟乙酰胺三氟乙酰胺)(MBTFA)乙?；阴；?以增加揮發(fā)性以增加揮發(fā)性,改善色譜特性改善色譜特性(熱穩(wěn)定性、降低極性熱穩(wěn)定性、降低極性),氫火焰氫火焰離子化檢測(cè)器離子化檢測(cè)器測(cè)定。測(cè)定。l除了甲基化外除了甲基化外,也可利用也可利用水解法水解法將磺胺類(lèi)藥物水解成相應(yīng)的將磺胺類(lèi)藥物水解成相應(yīng)的揮發(fā)性揮發(fā)性胺類(lèi)胺類(lèi),繼之以繼之以GC法測(cè)定法測(cè)定,l也可與適宜的也可與適宜

29、的鹵化試劑鹵化試劑反應(yīng)反應(yīng),生成相應(yīng)的生成相應(yīng)的衍生物衍生物,如三氟乙酰化或七如三氟乙?；蚱叻□；苌锏确□；苌锏?以以電子捕獲檢測(cè)器電子捕獲檢測(cè)器測(cè)定。測(cè)定。第二十三頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1GC分離分離(fnl)柱柱l磺胺類(lèi)藥物的分離柱可用磺胺類(lèi)藥物的分離柱可用填充柱填充柱和和石英毛細(xì)管柱石英毛細(xì)管柱,通通常毛細(xì)管柱常毛細(xì)管柱(DB-5)分離效果更好。分離效果更好。l樣品確證樣品確證(qu zhn)分析時(shí)分析時(shí),一般用一般用質(zhì)譜檢測(cè)器質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定測(cè)定,離子離子源源采用采用化學(xué)電離化學(xué)電離和和電子轟擊電子轟擊接口。接口。l多數(shù)磺胺類(lèi)藥物含有多數(shù)磺胺類(lèi)藥物

30、含有對(duì)氨基苯磺?；鶎?duì)氨基苯磺酰基結(jié)構(gòu)部分結(jié)構(gòu)部分,它們的它們的結(jié)構(gòu)差異只是結(jié)構(gòu)差異只是N1取代基取代基的不同的不同,所以本類(lèi)藥物的質(zhì)譜所以本類(lèi)藥物的質(zhì)譜有許多共有的特征峰有許多共有的特征峰,如如m/z 56、l40、108、92、65和和39等碎片離子峰。等碎片離子峰。第二十四頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)14、超臨界色譜法、超臨界色譜法lRamsey等用超臨界流體色譜法測(cè)定豬腎組織中的甲等用超臨界流體色譜法測(cè)定豬腎組織中的甲氧芐啶和三種類(lèi)固醇激素氧芐啶和三種類(lèi)固醇激素,分析柱為分析柱為Spherisorb 5氨基氨基鍵合柱鍵合柱,含甲醇的含甲醇的CO2作流動(dòng)相作流動(dòng)相,熱噴

31、霧電離熱噴霧電離(dinl)串聯(lián)串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定,檢測(cè)限約檢測(cè)限約10mg/kg,對(duì)于組織和奶中對(duì)于組織和奶中g(shù)/kg級(jí)殘留量的檢測(cè)級(jí)殘留量的檢測(cè),靈敏度不夠。靈敏度不夠。第二十五頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)15、高效、高效(o xio)液相色譜法液相色譜法l20世紀(jì)世紀(jì)80年代以來(lái)年代以來(lái),普遍采用普遍采用反相色譜法反相色譜法,使用使用C18、C8和苯基柱和苯基柱,尤以尤以C18應(yīng)用最廣應(yīng)用最廣,以甲醇以甲醇(或乙腈或乙腈)-水水(含醋酸或偏磷酸含醋酸或偏磷酸)系統(tǒng)為流系統(tǒng)為流動(dòng)相動(dòng)相,可分離檢測(cè)數(shù)種磺胺類(lèi)藥物及其代謝物可分離檢測(cè)數(shù)種磺胺類(lèi)藥物及其代謝物,

32、樣品可用甲醇或樣品可用甲醇或堿性緩沖液溶解制備。堿性緩沖液溶解制備。l流動(dòng)相流動(dòng)相中加入適量戊磺酸、己磺酸和辛磺酸離子對(duì)試劑中加入適量戊磺酸、己磺酸和辛磺酸離子對(duì)試劑,可以改變磺可以改變磺胺類(lèi)藥物的保留時(shí)間和改善峰形。胺類(lèi)藥物的保留時(shí)間和改善峰形。lHPLC的的洗脫方式洗脫方式,一般采用等度洗脫一般采用等度洗脫,若需同時(shí)檢測(cè)數(shù)種磺胺類(lèi)若需同時(shí)檢測(cè)數(shù)種磺胺類(lèi)藥物或多種代謝物藥物或多種代謝物,可采用梯度洗脫可采用梯度洗脫,通過(guò)改變流動(dòng)相流速或配比通過(guò)改變流動(dòng)相流速或配比,實(shí)現(xiàn)在較短的時(shí)間內(nèi)對(duì)生物實(shí)現(xiàn)在較短的時(shí)間內(nèi)對(duì)生物(shngw)樣品中混合組分或代謝物的分樣品中混合組分或代謝物的分離。離。第二十

33、六頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1l由于甲氧芐啶分子結(jié)構(gòu)中不含磺酰胺結(jié)構(gòu)由于甲氧芐啶分子結(jié)構(gòu)中不含磺酰胺結(jié)構(gòu),其堿性其堿性(jin xn)較其他較其他磺胺類(lèi)藥物強(qiáng)磺胺類(lèi)藥物強(qiáng),在在HPLC分離檢測(cè)時(shí)分離檢測(cè)時(shí),在在ODS柱上會(huì)產(chǎn)生一定的拖尾柱上會(huì)產(chǎn)生一定的拖尾現(xiàn)象現(xiàn)象,可采用反相離子對(duì)色譜法可采用反相離子對(duì)色譜法,以十二烷基磺酸或四丁基銨以十二烷基磺酸或四丁基銨鹽作為反離子鹽作為反離子,也可使用掃尾劑三乙胺改善其拖尾現(xiàn)象。但離子對(duì)也可使用掃尾劑三乙胺改善其拖尾現(xiàn)象。但離子對(duì)色譜法對(duì)色譜柱有一定的損害作用色譜法對(duì)色譜柱有一定的損害作用,應(yīng)予注意。應(yīng)予注意。第二十七頁(yè)，共四十頁(yè)。

34、醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1l有些用通常的有些用通常的HPLC法難以分離的磺胺類(lèi)藥物法難以分離的磺胺類(lèi)藥物,使用使用-環(huán)糊精化學(xué)鍵環(huán)糊精化學(xué)鍵合固定相很容易達(dá)到分離。合固定相很容易達(dá)到分離。l其分離原理其分離原理,是基于當(dāng)磺胺藥物分子接近或透入到是基于當(dāng)磺胺藥物分子接近或透入到-環(huán)糊精疏水腔內(nèi)時(shí)環(huán)糊精疏水腔內(nèi)時(shí)可形成包合物可形成包合物,改變了磺胺類(lèi)藥物分子的某些理化性質(zhì)。包合物的穩(wěn)改變了磺胺類(lèi)藥物分子的某些理化性質(zhì)。包合物的穩(wěn)定性與磺胺類(lèi)藥物分子和定性與磺胺類(lèi)藥物分子和-環(huán)糊精分子的大小有關(guān)環(huán)糊精分子的大小有關(guān),與與-環(huán)糊精作環(huán)糊精作用強(qiáng)的磺胺類(lèi)藥物洗脫較難用強(qiáng)的磺胺類(lèi)藥物洗脫較難,有

35、較長(zhǎng)的保留有較長(zhǎng)的保留(boli)時(shí)間時(shí)間;與與-環(huán)糊環(huán)糊精作用弱的磺胺類(lèi)藥物洗脫容易精作用弱的磺胺類(lèi)藥物洗脫容易,有較短的保留時(shí)間有較短的保留時(shí)間,據(jù)此據(jù)此,可將磺胺可將磺胺類(lèi)藥物分離。類(lèi)藥物分離。l本法選擇的流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液本法選擇的流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液(pH7.0)-甲醇甲醇(85+15),可分離可分離7種磺種磺胺類(lèi)藥物的混合物。胺類(lèi)藥物的混合物。第二十八頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器l磺胺類(lèi)藥物在磺胺類(lèi)藥物在250290nm波長(zhǎng)區(qū)間有強(qiáng)的紫外吸收波長(zhǎng)區(qū)間有強(qiáng)的紫外吸收,因此因此(ync)HPLC的在線(xiàn)檢測(cè)的在線(xiàn)檢測(cè),一般采用紫外檢測(cè)一般采用紫

36、外檢測(cè)。l為提高檢測(cè)靈敏度為提高檢測(cè)靈敏度,可使用可使用對(duì)二甲氨基苯甲醛對(duì)二甲氨基苯甲醛(DMAB) 柱后柱后衍生化衍生化,于于450nm處紫外處紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)可見(jiàn)光檢測(cè),已應(yīng)用于蛋、奶和肌已應(yīng)用于蛋、奶和肌肉組織中肉組織中13種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定,以及動(dòng)物組織中以及動(dòng)物組織中6種磺種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定。胺類(lèi)藥物的測(cè)定。第二十九頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1熒光熒光(ynggung)檢測(cè)器檢測(cè)器l磺胺類(lèi)藥物磺胺類(lèi)藥物(yow)本身具有本身具有弱的熒光弱的熒光特性特性,但熒光檢測(cè)時(shí)還但熒光檢測(cè)時(shí)還需要需要熒光衍生化熒光衍生化。l常用的熒光衍生劑有常用的熒光衍生

37、劑有鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛(OPA)、熒胺熒胺和和巰基乙醇巰基乙醇等。等。l磺胺類(lèi)藥物與磺胺類(lèi)藥物與OPA或其衍生物或其衍生物(如如4-羥基羥基-鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛)在酸在酸性介質(zhì)中反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光性介質(zhì)中反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光,檢出量可達(dá)檢出量可達(dá)1 10-9810-8mol/mL的濃度范圍。的濃度范圍。第三十頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1l熒胺熒胺作為熒光衍生劑作為熒光衍生劑,可選擇性地用于具有可選擇性地用于具有(jyu)脂肪族脂肪族伯胺基團(tuán)藥物共存時(shí)芳伯胺藥物的微量測(cè)定伯胺基團(tuán)藥物共存時(shí)芳伯胺藥物的微量測(cè)定,其檢測(cè)其檢測(cè)限量可達(dá)限量可達(dá)0.810-9mol/mL。l此外此外

38、,也有人采用也有人采用2,6二氨基吡啶二氨基吡啶作為熒光衍生劑作為熒光衍生劑,其檢其檢出量可達(dá)出量可達(dá)10-9 10-10mol/mL。l衍生化方式有柱前衍生化和柱后衍生化。衍生化方式有柱前衍生化和柱后衍生化。第三十一頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器l亦可使用電化學(xué)檢測(cè)器亦可使用電化學(xué)檢測(cè)器,但在尿中甲氧芐啶代謝物的但在尿中甲氧芐啶代謝物的測(cè)定中測(cè)定中,與紫外檢測(cè)與紫外檢測(cè)(jin c)比較比較,電化學(xué)檢測(cè)器的檢測(cè)靈電化學(xué)檢測(cè)器的檢測(cè)靈敏度并無(wú)顯著提高敏度并無(wú)顯著提高,且不能同時(shí)檢測(cè)甲氧芐啶。且不能同時(shí)檢測(cè)甲氧芐啶。l若需同時(shí)檢測(cè)甲氧芐啶若需同時(shí)檢測(cè)甲

39、氧芐啶,可通過(guò)提高工作電位實(shí)現(xiàn)可通過(guò)提高工作電位實(shí)現(xiàn),但但此時(shí)檢測(cè)靈敏度將顯著下降。此時(shí)檢測(cè)靈敏度將顯著下降。第三十二頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1例子例子(l zi)1lHorie等報(bào)道了蜂蜜中等報(bào)道了蜂蜜中10種磺胺類(lèi)藥物的種磺胺類(lèi)藥物的LC-UV測(cè)定方法。測(cè)定方法。l5g蜂蜜樣品中加入蜂蜜樣品中加入50mL 30%氯化鈉溶液氯化鈉溶液,用二氯甲烷提取用二氯甲烷提取,提取液提取液中加入無(wú)水硫酸鈉脫水中加入無(wú)水硫酸鈉脫水,過(guò)過(guò)Sep-Pak Florisil固相萃取柱固相萃取柱,用用10mL乙乙腈腈-二氯甲烷二氯甲烷(2+8)淋洗淋洗,用用10mL甲醇甲醇-二氯甲烷二氯甲

40、烷(2+8)洗脫洗脫,濃縮至干濃縮至干,用用1mL流動(dòng)相溶解流動(dòng)相溶解(rngji),進(jìn)樣。進(jìn)樣。l色譜柱為色譜柱為L(zhǎng)iChrosphere RP-18e(25cm,5m),以以0.05mol/L 磷酸二氫鈉磷酸二氫鈉-乙腈乙腈(2+1)作流動(dòng)相作流動(dòng)相,流速流速0.5mL/min,275nm處紫外檢測(cè)處紫外檢測(cè),能檢測(cè)到能檢測(cè)到蜂蜜中磺胺類(lèi)藥物濃度蜂蜜中磺胺類(lèi)藥物濃度50g/kg。第三十三頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1標(biāo)準(zhǔn)品和蜂蜜標(biāo)準(zhǔn)品和蜂蜜(fn m)樣品色譜圖樣品色譜圖1一磺胺噻唑一磺胺噻唑;2一磺胺嘧啶一磺胺嘧啶(m dn);3一磺胺甲嘧啶一磺胺甲嘧啶;4一磺胺甲氧

41、噠嗪一磺胺甲氧噠嗪; 5一磺胺二甲嘧啶一磺胺二甲嘧啶;6-磺胺間甲氧嘧啶磺胺間甲氧嘧啶;7一磺胺氯達(dá)嗪一磺胺氯達(dá)嗪;8一磺胺甲蟋唑一磺胺甲蟋唑;9一磺胺喹嗯啉一磺胺喹嗯啉;10一磺胺二甲氧嘧啶一磺胺二甲氧嘧啶第三十四頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1例子例子(l zi)2lSimeonido等報(bào)道了柱前衍生化離子對(duì)色譜法測(cè)定雞肉中等報(bào)道了柱前衍生化離子對(duì)色譜法測(cè)定雞肉中4種磺種磺胺類(lèi)藥物。胺類(lèi)藥物。l3g組織組織(zzh)樣品中加入樣品中加入30mL氯仿氯仿,均質(zhì)均質(zhì),離心后上清液過(guò)濾離心后上清液過(guò)濾,取取10mL濾液加入濾液加入1mL 3mol/L鹽酸提取鹽酸提取,用熒胺衍生

42、化用熒胺衍生化,色譜柱為色譜柱為Ncleosil 120 C18柱柱(25cm,5m),以以0.02mol/L磷酸鹽磷酸鹽(pH4)-乙腈乙腈(66+34)含含20mmol/L辛磺酸鈉作流動(dòng)相辛磺酸鈉作流動(dòng)相,流速流速1.2mL/min,熒光檢熒光檢測(cè)測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā)波長(zhǎng)405nm,發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射波長(zhǎng)495nm。l在上述條件下在上述條件下,檢測(cè)限檢測(cè)限:磺胺嘧啶磺胺嘧啶3g/kg、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶4g/kg、磺、磺胺二甲氧嘧啶胺二甲氧嘧啶9g/kg、磺胺喹惡啉、磺胺喹惡啉40g/kg。第三十五頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1標(biāo)準(zhǔn)品和雞肉樣品標(biāo)準(zhǔn)品和雞肉樣品(yngpn)色譜圖色譜圖1一磺胺一磺胺(hun n)嘧啶嘧啶10g/kg; 2一磺胺二甲嘧啶一磺胺二甲嘧啶20g/kg;3一磺胺二甲氧嘧啶一磺胺二甲氧嘧啶30g/kg; 4一磺胺喹惡啉一磺胺喹惡啉100g/kgA A磺胺類(lèi)藥物磺胺類(lèi)藥物(yow)(yow)標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品B B空白肌肉空白肌肉CC空白添加樣空白添加樣第三十六頁(yè)，共四十頁(yè)。醫(yī)學(xué)專(zhuān)題-獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-磺胺類(lèi)1例子例子(l zi)3