開(kāi)發(fā)報(bào)告應(yīng)該怎么寫

1、現(xiàn)在審評(píng)老師對(duì)于申報(bào)資料中方法開(kāi)發(fā)的內(nèi)容越來(lái)越重視，不同前些年方法可以如同天上掉下來(lái)只要有方法驗(yàn)證的內(nèi)容就可以。上有所好下必甚，在這樣的情況下，越來(lái)越多的企業(yè)要求撰寫方法開(kāi)發(fā)報(bào)告，方法開(kāi)發(fā)報(bào)告應(yīng)該怎么寫？這是一個(gè)值得探討的問(wèn)題。本人根據(jù)自己的工作經(jīng)歷闡述對(duì)于該問(wèn)題的理解，個(gè)人淺見(jiàn)，作拋磚引玉之用。需要說(shuō)明的是下文涉及的舉例主要以有關(guān)物質(zhì)反相HPLC方法開(kāi)發(fā)為主，其他如 GC、正相方法開(kāi)發(fā)報(bào)告可以參考其思路。解剖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法開(kāi)發(fā)的成果最終要成為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載的檢測(cè)方法，所以如果我們?cè)敿?xì)剖析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法包含的內(nèi)容，就能明白方法開(kāi)發(fā)的過(guò)程到底需要說(shuō)明哪些內(nèi)容。以2015年版中國(guó)藥典中收載的山梨醇原

2、料藥有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法為例：取本品約0.5g,置1 0ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取2ml ,置1 0 0m l量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。分別取甘露醇對(duì)照品與山梨醇對(duì)照品各約0.5g,置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。照高效液相色譜法（通則 0512）試驗(yàn)，用磺化交聯(lián)的苯乙烯二乙烯基苯共聚物為填充劑的強(qiáng)陽(yáng)離子鈣型交換柱（或分離效能相當(dāng)?shù)纳V柱）；以水為流動(dòng)相流速為每分鐘 0.5ml,柱溫72? 85 C，示差折光檢測(cè)器。取系統(tǒng)適用性溶液20 M注人液相色譜儀，甘露醇峰與山梨醇峰的分離度應(yīng)大于2.0。精密量取對(duì)照溶

3、液與供試品溶液各20 M分別注人液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積 （2.0 % ）,各雜質(zhì)峰面積的和不得大于 對(duì)照溶液主峰面積的 1.5倍（3.0% ）。上文可看出，從“取本品適量”到“作為系統(tǒng)適用性溶液”，一段很長(zhǎng)的文字都是說(shuō)明樣品如何處理；之后到“示差折光檢測(cè)器 ”說(shuō)的是色譜條件；之后到“分離度應(yīng)大于2.0”說(shuō)明系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求；從“供試品溶液中如有雜質(zhì)峰”到“1.5倍（3.0% ） ”說(shuō)明了計(jì)算方法與限度要求。檢測(cè)方法的剖析告訴我們一個(gè)檢測(cè)方法包含樣品處理、色譜條件、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、計(jì)算方法與限度五個(gè)

4、方面的內(nèi)容，除限度外，其余四個(gè)方 面都需要在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中進(jìn)行闡述，即說(shuō)明相應(yīng)抉擇的合理性，這就 意味著方法開(kāi)發(fā)過(guò)程伴隨著驗(yàn)證的過(guò)程，因?yàn)楹芏鄡?nèi)容需要用數(shù)據(jù)證明 其合理性。限度的確定應(yīng)當(dāng)根據(jù)相應(yīng)規(guī)范和研究數(shù)據(jù)確定，不在本文中 論述。下文為一個(gè)方法開(kāi)發(fā)報(bào)告的模板，主要以有關(guān)物質(zhì)為例，其他如 含量測(cè)定、異構(gòu)體方法可以此為參考。有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)開(kāi)發(fā)報(bào)告模板封面、目錄、頁(yè)眉、頁(yè)腳等內(nèi)容讀者請(qǐng)按照各自公司的要求撰寫。1概述說(shuō)明研究所處的狀態(tài)、分析方法開(kāi)發(fā)的必要性，示例如下:xxxx 項(xiàng)目于 xxxx年xx月xx日開(kāi)始原料藥打通工藝的研究，分析配合進(jìn)行中控工作，因此需要開(kāi)發(fā)原料藥中控方法。他圍說(shuō)明開(kāi)發(fā)的方法

5、適用的范圍。示例如下:適用于xxxx項(xiàng)目的原料藥中控檢測(cè)。3國(guó)考依據(jù)列舉方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中參考的文獻(xiàn)，如藥典標(biāo)準(zhǔn)、現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)、研究文獻(xiàn)等。 示例如下：中國(guó)藥典2015年版二部xxxx原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4材料和儀器以表格的形式列舉方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中用到的儀器、試劑、對(duì)照品、供試品等信息。517r法開(kāi)發(fā)過(guò)程本節(jié)主要說(shuō)明上文所述的樣品處理、色譜條件、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、計(jì)算 方法四個(gè)方面的選擇過(guò)程。需要澄清的是色譜條件、樣品處理并無(wú)時(shí)間 上的先后順序，計(jì)算方法與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)評(píng)估一般是在色譜條件與樣 品處理確定之后。5.1 初始條件說(shuō)明初始條件選擇的依據(jù)，如參考某個(gè)文獻(xiàn)、藥典標(biāo)準(zhǔn)、現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，可 以表格的形式或藥典格

6、式列出初始條件的各個(gè)參數(shù)。示例如下：色譜柱流動(dòng)相洗脫程序流速柱溫波長(zhǎng)進(jìn)樣體積進(jìn)樣器溫度稀釋劑供試品濃度對(duì)照溶液在初始條件下進(jìn)樣分析，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，并擬定下一步的優(yōu)化方 向，提供數(shù)據(jù)與圖譜說(shuō)明該項(xiàng)研究的結(jié)論。5.2 樣品處理在該項(xiàng)下應(yīng)當(dāng)研究包括供試品、雜質(zhì)對(duì)照品等檢測(cè)涉及的物料的處理方 法，并證明處理方法的合理性。主要從三個(gè)方面說(shuō)明樣品處理方法的合 理性：稀釋劑選擇、濃度與處理方式。1） 稀釋劑選擇一般從溶解性、溶液穩(wěn)定性、專屬性和溶劑效應(yīng)四個(gè)方面說(shuō)明稀釋劑選 擇的合理性。在該項(xiàng)研究中需要提供溶解度的數(shù)據(jù)、典型色譜圖和溶液 穩(wěn)定性驗(yàn)證的數(shù)據(jù)。目標(biāo)物在用該稀釋劑配制的溶液中應(yīng)有良好的穩(wěn)定性，

7、這需要用數(shù)據(jù)證 明，所以在方法開(kāi)發(fā)中需要做溶液穩(wěn)定性驗(yàn)證?？赡苡凶x者會(huì)有疑問(wèn)，溶液穩(wěn)定性驗(yàn)證在方法驗(yàn)證中不是要做嗎，為什么方法開(kāi)發(fā)也需要呢?方法開(kāi)發(fā)過(guò)程是一個(gè)抉擇證成的過(guò)程，做出的選擇與判斷需要證明其合理性。方法開(kāi)發(fā)過(guò)程的溶液穩(wěn)定性驗(yàn)證是一個(gè)探索性的驗(yàn)證，可能會(huì)有幾種不同的稀釋劑的數(shù)據(jù)，最終找出一個(gè)適合的稀釋劑。在溶液穩(wěn)定性的研究中，可以同步研究供試品溶液的放置條件，如室溫下不穩(wěn)定，研究在控溫條件（如5C）下供試品溶液是否穩(wěn)定。示例如下：”由上述結(jié)果可知，供試品在5c放置24小時(shí)穩(wěn)定。故選擇乙月青 -水（1: 1）作為本品的稀釋劑，并建議進(jìn)樣器溫度設(shè)為5 C?！背巳芙庑耘c溶液穩(wěn)定性符合要求外

8、，還需要確認(rèn)該稀釋劑不會(huì)對(duì)檢測(cè)有干擾；且相應(yīng)組分的峰型符合要求，即該稀釋劑不會(huì)產(chǎn)生溶劑效應(yīng)。溶劑效應(yīng)相關(guān)內(nèi)容見(jiàn)相關(guān)閱讀論液相色譜的溶劑效應(yīng)。2） 濃度供試品溶液的濃度應(yīng)當(dāng)符合檢測(cè)的要求，響應(yīng)值應(yīng)當(dāng)在一定的范圍內(nèi)。有關(guān)物質(zhì)供試品的濃度應(yīng)滿足靈敏度和分離度的兩個(gè)互相約束要求，想要良好的靈敏度，濃度越高越好，過(guò)高則導(dǎo)致主峰嚴(yán)重展寬，影響與相 鄰峰的分離度。計(jì)算方法也約束濃度的選擇，如有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)擬用面積歸一化法計(jì)算雜質(zhì)含量，則擬定的供試品濃度下主峰應(yīng)在線性范圍內(nèi)，需要配制從定量限到供試品濃度的120%不同濃度的線性溶液進(jìn)行線性驗(yàn)證，相關(guān)系數(shù)與截距均應(yīng)符合要求。以API有關(guān)物質(zhì)為例，說(shuō)明方法開(kāi)發(fā)中如何

9、說(shuō)明濃度的選擇。原料藥的鑒定限度一般為0.10% ,為了使方法有足夠的靈敏度，定量限擬低于0.01% ,將擬定濃度的供試品溶液稀釋一萬(wàn)倍，進(jìn)樣分析，信噪比應(yīng)大于10 ,同時(shí)供試品溶液的色譜圖上各組分分離度應(yīng)符合要求。實(shí)際工作中是配制一份稀釋后的供試品溶液，評(píng)估其信噪比，再計(jì)算供試品濃度。例如0.1聞/ml的供試品溶液信噪比為20 ,如以該濃度為定量限，則乘以一萬(wàn)倍得出1mg/ml為供試品溶液濃度。示例如下:名稱濃度（聞/ml ）S/Nxxxx0.238雜質(zhì)A0.224為提高本品有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)靈敏度，是限度濃度的雜質(zhì)A峰信噪比大于100 ,需將雜質(zhì) A的限度（0.1% ）濃度提高至 1聞/ml

10、,其對(duì)應(yīng)的供試 品濃度為1mg/ml 。3） 處理方式如果只是溶解操作可不研究該項(xiàng)，但一些特殊的樣品處理方式需要證明處理方式的合理性，如萃取、沉淀、過(guò)濾、超聲等操作。如過(guò)濾需要研 究濾膜吸附與是否引入干擾組分、萃取沉淀操作可能需要研究加標(biāo)后的樣品處理后的回收率數(shù)據(jù)、超聲需要研究超聲時(shí)間與供試品穩(wěn)定性等。示例如下：取xxxx項(xiàng)下雜質(zhì)混合溶液，經(jīng) PVDF濾膜濾過(guò)，分別棄去0ml、1ml、2ml、3ml、5ml、10ml ,去續(xù)濾液進(jìn)樣分析，計(jì)算各組分峰面積與未過(guò) 濾雜質(zhì)混合溶液各組分峰面積的比值；同時(shí)考察稀釋劑經(jīng)PVDF濾膜濾過(guò)分別棄去 0ml、1ml、2ml、3ml、5ml、10ml后是否干擾

11、本品檢測(cè)。5.3 色譜條件選擇一般應(yīng)當(dāng)參考文獻(xiàn)資料或者根據(jù)理論確定一個(gè)初始色譜條件，進(jìn)行檢測(cè)分析，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，如初始條件不適用，則進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。下 文我們分別對(duì)流動(dòng)相、洗脫程序、流速、色譜柱、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等參 數(shù)的選擇過(guò)程進(jìn)行討論。1） 流動(dòng)相水相是用純水或者緩沖鹽，緩沖鹽的種類、pH值和濃度的選擇均需做出合理的解釋，并用試驗(yàn)結(jié)果證明選擇的合理性。緩沖鹽的相關(guān)內(nèi)容見(jiàn)相關(guān)閱讀方法開(kāi)發(fā)緩沖鹽選擇指南。示例如下：根據(jù)xxxx化學(xué)結(jié)構(gòu)式推測(cè)其存在酮式烯醇式互變情況，且應(yīng)以烯醇式為主，流動(dòng)相 pH值不應(yīng)過(guò)低，否則可能產(chǎn)生酮式異構(gòu)體峰。結(jié)合以上情 況（前文已說(shuō)明高 pH值流動(dòng)相不適用），擬定 p

12、H值在45之間。因 擬定的檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm ,不宜使用醋酸鹽與甲酸鹽。供試品為路易斯酸，對(duì)流動(dòng)相緩沖能力要求不高，可嘗試0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH4.6 左右）。應(yīng)說(shuō)明選擇流動(dòng)相的有機(jī)相的理由或者依據(jù)，并用試驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明選擇的合理性。示例如下：當(dāng)有機(jī)相為純乙月青時(shí)，雜質(zhì) A與xxxx峰基本重疊（圖 1-1 ）;當(dāng)有機(jī)相 為甲醇時(shí)，雜質(zhì) A與xxxx峰保留時(shí)間均發(fā)生明顯變化，但xxxx峰與未知相鄰峰重疊（圖 1-2 ）;當(dāng)有機(jī)相為甲醇 -乙月青（1 : 1）時(shí)，xxxx峰與 雜質(zhì)A、未知相鄰峰達(dá)成良好分離（圖 1-3 ）。故選定有機(jī)相為甲醇-乙月青（1 ： 1 ）。2） 洗脫程序一

13、般可以先通過(guò)等度研究確定是否需要梯度洗脫，如果等度研究表明各組2.2min分保留相差非常大，則需要梯度（多數(shù)情況是這樣）；如保留較為接近，可用等度。從高比例有機(jī)相（如 80%有機(jī)相）逐漸降低有機(jī)相比例進(jìn)行等度洗脫，確定各組分的保留情況。如果等度研究表明供試品中60%有機(jī)相存在保留時(shí)間5分鐘的組分，那么梯度上限設(shè)置成40%液相方法開(kāi)發(fā)就很難將該組分洗脫下來(lái)。洗脫程序的研究見(jiàn)相關(guān)閱讀 指南-反相色譜。以有關(guān)物質(zhì)為例，供試品中的各個(gè)組分（主成分與雜質(zhì)）在擬定的洗脫程序中均應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋Ａ?，即保留最弱的組分保留時(shí)間應(yīng)大于死時(shí)間（含量測(cè)定可以不用關(guān)注這個(gè)），保留最強(qiáng)的組分應(yīng)能被洗脫下來(lái)。這也就意味著方法開(kāi)

14、發(fā)是一個(gè)反復(fù)確認(rèn)的過(guò)程，比如一般在最開(kāi)始的階段，缺乏雜質(zhì)對(duì)照品，后來(lái)新增已知雜質(zhì)的保留情況不清楚，那么到后期需要確認(rèn)在擬定的洗脫程序中新增的已知雜質(zhì)有適當(dāng)?shù)谋Ａ?。中試階段或者生產(chǎn)階段的供試品，因儀器設(shè)備、批量與早期方法開(kāi)發(fā)時(shí)期的供試品不一樣，可能導(dǎo)致雜質(zhì)譜不一致（這也是審評(píng)老師要求用中試批次做方法驗(yàn)證的主要原因），需要重新確認(rèn)大批量生產(chǎn)供試品中實(shí)際存在雜質(zhì)在原來(lái)擬定的洗脫程序中的分離與保留情況。示例如下：由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，在該色譜條件下在xxxx峰（13min 左右）后未檢出其他組分峰，說(shuō)明供試品各組分在13min左右已完全洗脫，此時(shí)有機(jī)相比例約為 56% ,等度研究數(shù)據(jù)也顯示有機(jī)相比例為

15、60%時(shí)供試品溶液中沒(méi)有保留時(shí)間明顯大于死時(shí)間（ 2.2min ）的組分峰，故將有機(jī)相梯 度上限設(shè)為 65%。3） 色譜柱應(yīng)當(dāng)先說(shuō)明選擇色譜柱的思路，然后用數(shù)據(jù)證明選擇的正確性。一般是 研究分離度、拖尾因子、理論板數(shù)等數(shù)據(jù)。選擇色譜柱的注意事項(xiàng)見(jiàn)相關(guān)閱讀如何選擇液相色譜柱。示例如下：配合流動(dòng)性的篩選過(guò)程，篩選了 8根不同型號(hào)的色譜柱，發(fā)現(xiàn)其中 7根 色譜柱中均有雜質(zhì)峰與xxxx峰重疊（圖 2-1 ）；只有色譜柱 AgilentExtend-C18（4.6 x 250mm 5師）可以將 xxxx 峰與相鄰雜質(zhì)峰分離（圖2-2 ）.色譜柱篩選結(jié)果見(jiàn)下表4） 柱溫、流速這兩項(xiàng)可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或者參考文獻(xiàn)

16、設(shè)置，但需要進(jìn)行少許變動(dòng)證明初始設(shè)置的耐用性。示例如下：柱溫耐用性研究顯示加標(biāo)溶液的色譜圖中雜質(zhì)A峰與xxxx峰分離度隨著柱溫的升高得到改善（圖3-1 ）,在柱溫為45 C時(shí)，雜質(zhì) A峰與xxxx峰分離度為2.5 ,滿足檢測(cè)需要，更高的溫度不利于色譜柱壽命，故將柱 溫設(shè)置為45 C。5） 進(jìn)樣體積以常規(guī)液相為例，如進(jìn)樣體積為常見(jiàn)的10/、20一般配合樣品濃度說(shuō)明供試品進(jìn)樣量符合要求即可。如更小的體積3 M或更大的體積 100M等，需要證明選擇的合理性。小體積需要證明連續(xù)進(jìn)樣的精密度符合要求，大體積需要證明柱外死體積的增加對(duì)峰型、柱效等沒(méi)有帶來(lái)不可接受的不利影響。6） 檢測(cè)波長(zhǎng)該項(xiàng)下需提供各組分

17、（包括主成分、已知雜質(zhì)、主要未知雜質(zhì)）的光譜圖與最大最小吸收波長(zhǎng)的數(shù)據(jù)，說(shuō)明波長(zhǎng)選擇的思路與依據(jù)。示例如下：根據(jù)主成分與雜質(zhì) A的光譜圖（圖4-1 ），其最大吸收波長(zhǎng)分別為310nm與230nm ,為提高檢測(cè)靈敏度，暫定檢測(cè)波長(zhǎng)為雜質(zhì)A的最大吸收波長(zhǎng)230nm，該波長(zhǎng)為主成分光譜圖的峰谷處，在此波長(zhǎng)下主成分與雜質(zhì)A的響應(yīng)對(duì)波長(zhǎng)的波動(dòng)均有較好的耐用性。5.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)評(píng)估根據(jù)上文的研究結(jié)果評(píng)估檢測(cè)方法的高風(fēng)險(xiǎn)因素，并將其定入系統(tǒng)適用性試驗(yàn)考察內(nèi)容，常見(jiàn)的高風(fēng)險(xiǎn)因素一般有分離度、靈敏度、柱效、拖尾因子、進(jìn)樣精密度等。需要列舉相應(yīng)的數(shù)據(jù)，必要時(shí)進(jìn)行耐用性研究。示例如下：由上述數(shù)據(jù)可知，各已知雜

18、質(zhì)、主成分之間的分離度在耐用性研究中均大于5.0 ,已知雜質(zhì)分離度的風(fēng)險(xiǎn)較?。粡?qiáng)制降解研究的結(jié)果顯示主峰后有相鄰降解雜質(zhì)生成，耐用性研究的結(jié)果顯示分離度最小值為1.8 ,該方法的降解雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)較高。故擬在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中考察主峰與降解雜質(zhì)的分離情況。系統(tǒng)適用性的考察方法為：去 xxxx對(duì)照品適量，加稀釋劑 溶解并稀釋制成每1ml約含0.5mg的溶液，在沸水浴中放置20分鐘,取出，防冷，作為系統(tǒng)適用性溶液。去 20 M注入液相色譜儀，記錄色譜 圖。Xxxx與其相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)不小于1.5。5.5 計(jì)算方法需要說(shuō)明擬定計(jì)算方法的思路，并用試驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明計(jì)算方法的合理性。如原料藥中控方法擬采用面

19、積歸一化法，則需證明供試品溶液的濃度在線性范圍內(nèi)；如擬采用加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量，則需證明各雜質(zhì)的校正因子的值在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)。示例如下：因?yàn)殡s質(zhì)A對(duì)照品較難獲得，且穩(wěn)定性非常差，擬采用加校正因子的主成分外標(biāo)法計(jì)算供試品中雜質(zhì)A的含量根據(jù)兩者線性結(jié)果計(jì)算的雜質(zhì)A校正因子為1.4 ,在0.25之間，可以采用加校正因子的主成分外 標(biāo)法計(jì)算供試品中該雜質(zhì)的含量。5.6 總結(jié)該節(jié)總結(jié)上述研究的成果。1) 色譜條件根據(jù)上述的開(kāi)發(fā)成果，暫定本品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的色譜條件如下：色譜柱流動(dòng)相洗脫程序流速柱溫波長(zhǎng)進(jìn)樣體積進(jìn)樣器溫度稀釋劑供試品濃度對(duì)照溶液2) 溶液配制說(shuō)明供試品溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液、系統(tǒng)適用性溶液等的配制方法。3) 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)略4) 計(jì)算公式根據(jù)計(jì)算方法的研究結(jié)果列出采用的計(jì)算公式。5) 測(cè)定略6) 可接受標(biāo)準(zhǔn)略617r法預(yù)驗(yàn)證根據(jù)上述研究的結(jié)果，評(píng)估檢測(cè)方法可能存在的風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)驗(yàn) 證。如在方法