自己總結(jié)：流式細(xì)胞儀的原理和用途

1、=精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=自己總結(jié)：流式細(xì)胞儀的原理和用途流式細(xì)胞儀1流式細(xì)胞儀的概念及其發(fā)展歷史1.1流式細(xì)胞儀的基本概念流式細(xì)胞儀是對高速直線流動的細(xì)胞或生物微粒進(jìn)行 快速定量測定和分析的儀器，主要包括 樣品的液流技術(shù)、細(xì)胞的計數(shù)和分選技 術(shù)，計算機(jī)對數(shù)據(jù)的采集和分析技術(shù)等。 流式細(xì)胞儀以流式細(xì)胞術(shù)為理論基礎(chǔ)， 是流體力學(xué)、激光技術(shù)、電子工程學(xué)、 分子免疫學(xué)、細(xì)胞熒光化學(xué)和計算機(jī)等 學(xué)科知識綜合運(yùn)用的結(jié)晶。流式細(xì)胞術(shù) 是一種自動分析和分選細(xì)胞或亞細(xì)胞的 技術(shù)。其特點(diǎn)是：測量速度快、被測群 體大、可進(jìn)行多參數(shù)測量，即對同一個 細(xì)胞做有關(guān)物理、生物化學(xué)特

2、性的多參 數(shù)測量，且在統(tǒng)計學(xué)上有效。1. 2流式細(xì)胞儀的發(fā)展簡史最早的流式細(xì)胞儀雛形誕生于1934年，Moldavan提 出使懸浮的單個血紅細(xì)胞流過玻璃毛細(xì)管，在亮視野下用顯微鏡進(jìn)行計數(shù)，并 用光電記錄裝置測量的設(shè)想。1953年Crosland-Taylor根據(jù)牛頓流體在圓形管 中流動規(guī)律設(shè)計了流動室。其后又經(jīng)過 Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、 Gohde Fulwyler、 Herzenberg 等人的不 斷改進(jìn)，設(shè)計了光電檢測設(shè)備和細(xì)胞分 選裝置、完成了計算機(jī)與流式細(xì)胞儀的 物理連接及多參數(shù)數(shù)據(jù)的記錄和分析、 開創(chuàng)了細(xì)胞的免疫熒光染色及檢測技 術(shù)、推廣流

3、式細(xì)胞儀在臨床上的應(yīng)用。 近20年來，隨著流式細(xì)胞儀及其檢測技 術(shù)的日臻完善，人們越來越致力于樣品 制備、細(xì)胞標(biāo)記、軟件開發(fā)等方面的工 作，以擴(kuò)大FCM的應(yīng)用領(lǐng)域和使用效 果。宋平根的流式細(xì)胞術(shù)的原理和應(yīng)用是迄今為止對流式細(xì)胞儀及其 技術(shù)闡述的最為詳盡和透徹的中文著 作。這本書非常詳細(xì)地介紹了流式細(xì)胞 術(shù)的歷史、結(jié)構(gòu)、原理、技術(shù)指標(biāo)等， 例舉了其在醫(yī)學(xué)和生物工程中的應(yīng)用， 非常適合從事此方面專業(yè)研究的人。于這本書是13年前出版的，所以基本上沒 有涉及植物流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)。此外 對于只需要對流式細(xì)胞儀有些基本認(rèn)識 的人士來說，這本書太復(fù)雜太深奧。謝 小梅主要介紹了流式細(xì)胞儀在生物工程 中的應(yīng)用

4、。楊蕊概括了流式細(xì)胞儀的工 作原理，簡單提及了流式細(xì)胞儀的應(yīng)用。 在分析這三篇論著或文章的優(yōu)缺點(diǎn)后， 用比較通俗的語言介紹了掌握流式細(xì)胞 儀檢測技術(shù)必須了解的一些原理，并對 目前市場上的主流型號進(jìn)行了客觀的性 能概括。2流式細(xì)胞儀的工作原理和技 術(shù)指標(biāo)2. 1流式細(xì)胞儀工作原理除電源外，流式細(xì)胞儀主要四部分組成： 流動室和液流系統(tǒng)：激光源和光學(xué)系統(tǒng)； 光電管和檢測系統(tǒng)；計算機(jī)和分析系統(tǒng)， 其中流動室是儀器的核心部件。這四大 部件共同完成了信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳 輸?shù)娜蝿?wù)。流動室和液流系統(tǒng)流動室樣品管、鞘液管和噴嘴等組成， 常用光學(xué)玻璃、石英等透明、穩(wěn)定的材 料制作。設(shè)計和制作均很精細(xì)，是液流精選

5、公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 3 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載系統(tǒng)的心臟。樣品管貯放樣品，單個細(xì) 胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射 出；鞘液鞘液管從四周流向噴孔，包圍 在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液 流是穩(wěn)液，一般限制液流速度U 激光 源和光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)特異熒光染色的細(xì)胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出 熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈 和激光；激光器又以僦離子激光器為普 遍，也有配和氟離子激光器或染料激光 器。光源的選擇主要根據(jù)被激發(fā)物質(zhì)的 激發(fā)光譜而定。汞燈是最常用的弧光燈， 其發(fā)射光譜大部分集中于300400nm, 很適合需

6、要用紫外光激發(fā)的場合。僦離子激光器的發(fā)射光譜中，綠光 514nm和藍(lán)光nm的譜線最強(qiáng)，約占總光強(qiáng)的；0%;氟離子激光器光譜多集中在可見光部分，以647nm較強(qiáng)。免疫學(xué)上使用 的一些熒光染料激發(fā)光波長在 550nm以上，可使用染料激光器。將有機(jī)染料做 為激光器泵浦的一種成份，可使原激光 器的光譜發(fā)生改變以適應(yīng)需要即構(gòu)成染精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 # 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載料激光器。例如用僦離子激光器的綠光 泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激 光器，則可得到550650nm連續(xù)可調(diào)的 激光，尤在590nm處轉(zhuǎn)換

7、效率最高，約 可占到一半。為使細(xì)胞得到均勻照射， 并提高分辨率，照射到細(xì)胞上的激光光 斑直徑應(yīng)和細(xì)胞直徑相近。因此需將激 光光束經(jīng)透鏡會聚。光斑直徑 d可下式 確定：d=4入f/歷D入為激光波長；f為透 鏡焦距；D為激光束直徑。色散棱鏡用 來選擇激光的波長，調(diào)整反射鏡的角度 使調(diào)諧到所需要的波長尢為了進(jìn)一步使 檢測的發(fā)射熒光更強(qiáng)，并提高熒光訊號 的信噪比，在光路中還使用了多種濾片。 帶阻或帶通濾片是有選擇性地使某一濾 長區(qū)段的光線濾除或通過。例如使用 525nm帶通濾片只允許 FITC發(fā)射的 525nm綠光通過。長波通過二向色性反 射鏡只允許某一波長以上的光線通過而 將此波長以下的另一特定波長

8、的光線反 射。在免疫分析中常要同時探測兩種以 上的波長的熒光信號，就采用二向色性 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 5 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=反射鏡，或二向色性分光器，來有效地 將各種熒光分開。光電管和檢測系統(tǒng)經(jīng)熒光染色的細(xì)胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過光電轉(zhuǎn)換 器轉(zhuǎn)變成電信號而進(jìn)行測量的。光電倍 增管最為常用。PMT的響應(yīng)時間短，僅 為ns數(shù)量級；光譜響應(yīng)特性好，在200 900nm的光譜區(qū)，光量子產(chǎn)額都比較高。 光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調(diào) 節(jié)，因此對弱光測量十分有利。光電管運(yùn)行時特別要注意穩(wěn)定性問題，

9、工 作電壓要十分穩(wěn)定，工作電流及功率不 能太大。一般功耗低于；最大陽極電流 在幾個毫安。此外要注意對光電管進(jìn)行 暗適應(yīng)處理，并注意良好的磁屏蔽。在 使用中還要注意安裝位置不同的 PMT, 因?yàn)楣庾V響應(yīng)特性不同，不宜互換。也 有用硅光電二極管的，它在強(qiáng)光下穩(wěn)定 性比PMT好。 從PMT輸出的電 信號仍然較弱，需要經(jīng)過放大后才能輸 入分析儀器。流式細(xì)胞計中一般備有兩 類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關(guān)系，稱為線性放大器。線 性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信 號以及代表生物學(xué)線性過程的信號，例 DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器，輸 出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān) 系。在免疫學(xué)測量中常

10、使用對數(shù)放大器。 因?yàn)樵诿庖叻治鰰r常要同時顯示陰性、 陽性和強(qiáng)陽性三個亞群，它們的熒光強(qiáng) 度相差12個數(shù)量級；而且在多色免疫 熒光測量中，用對數(shù)放大器采集數(shù)據(jù)易 于解釋。此外還有調(diào)節(jié)便利、細(xì)胞群體 分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu) 點(diǎn)。計算機(jī)和分析系統(tǒng)經(jīng)放大后的電信號被送往計算機(jī)分析器。 多道的道數(shù)是和電信號的脈沖高度相對 應(yīng)的，也是和光信號的強(qiáng)弱相關(guān)的。對 應(yīng)道數(shù)年縱坐標(biāo)通常代表發(fā)出該信號的 細(xì)胞相對數(shù)目。多道分析器出來的信號 再經(jīng)模-數(shù)轉(zhuǎn)換器輸往微機(jī)處理器編成 數(shù)據(jù)文件，或存貯于計算機(jī)的硬盤和軟 盤上，或存于儀器內(nèi)以備調(diào)用。計算機(jī) 的存貯容量較大，可存貯同一細(xì)胞的6 精選公文范文，管理類

11、，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 7 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=8個參數(shù)。存貯于計算機(jī)內(nèi)的數(shù)據(jù)可以在 實(shí)測后脫機(jī)重現(xiàn)，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析， 最后給出結(jié)果。除上述四個主要部分外， 還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。2. 1. 1信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸 在壓 力作用下，鞘液管中的鞘液被持續(xù)不斷 地壓入流動室，形成一股穩(wěn)定地連續(xù)的 液流，保證了樣本液穩(wěn)定地處于鞘液液 流的軸線上，并以單個細(xì)胞形式直線通 過激光照射區(qū)。激光照射區(qū)又稱測量區(qū)， 是指液流與激光束垂直相交的點(diǎn)。當(dāng)細(xì) 胞攜帶熒光素標(biāo)記物通過激光照射區(qū) 時，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)部不同物質(zhì)、不同 波長的熒

12、光信號，這些信號以細(xì)胞為中 心，向空間360立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射 光和熒光信號。散射光不依賴任何細(xì)胞 樣品的制備技術(shù)，因此被稱為細(xì)胞的物 理參數(shù)或固有參數(shù)。散射光又包括前向 角散射和測向角散射。前向角散射與被 測細(xì)胞直徑的平方密切相關(guān)，測向角散 射光對細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更 敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。熒光信號也有二種；一 種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出的微弱 熒光信號，另一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo) 記后的細(xì)胞受激發(fā)照射后得到的熒光信 號。在免疫分析中常要同時探測兩種以 上波長的熒光信 號，就采用二向色 性反射鏡，或二向色性分光器，來有效 地將各種熒光分開。 經(jīng)熒光染色的

13、細(xì)胞受到適合的光激發(fā)后產(chǎn)生的熒光是 通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號而進(jìn)行測 量的。最常用的光電轉(zhuǎn)換器是光電倍增 管。從PMT輸出的電信號需要經(jīng)過放大 后才能輸入分析儀器。流式細(xì)胞儀中一 般備有兩類放大器。一類是線性放大器, 其輸出信號與輸入信號成線性關(guān)系。線 性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信 號以及代表生物學(xué)線性過程的信號，如 DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器，其 輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān) 系。在免疫學(xué)測量中常使用對數(shù)放大器。 放大后的電信號被傳送到計算機(jī)，再經(jīng) 模一數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)轿C(jī)處理器形成數(shù)據(jù)文件，保存在計算機(jī)上。保存在計算 機(jī)上的數(shù)據(jù)可在脫機(jī)后再進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 和分析。參數(shù)測量原

14、理流式細(xì)胞儀可同時進(jìn)行多參數(shù)測量，信息 主要來自特異性熒光信號及非熒光散射 信號。測量是在測量區(qū)進(jìn)行的，所謂測 量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流 束垂直相交點(diǎn)。液流中央的單個細(xì)胞通 過測量區(qū)時，受到激光照射會向立體角 為2n的整個空間散射光線，散射光的波 長和入射光的波長相同。散射光的強(qiáng)度 及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài)、質(zhì) 膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，因?yàn)檫@些 生物學(xué)參數(shù)又和細(xì)胞對光線的反射、折 射等光學(xué)特性有關(guān)。未遭受任何損壞的 細(xì)胞對光線都具有特征性的散射，因此 可利用不同的散射光信號對不經(jīng)染色活 細(xì)胞進(jìn)行分析和分選。經(jīng)過固定的和染 色處理的細(xì)胞于光學(xué)性質(zhì)的改變，其散 射光信號當(dāng)然不同于

15、活細(xì)胞。散射光不 僅與作為散射中心的細(xì)胞的參數(shù)相關(guān)， 還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān)。在流式細(xì)胞術(shù)測量中，常用的是兩種散射方向的散 射光測量：前向角散射；側(cè)向散射， 又稱90角散射。這時所說的角度指的是 激光束照射方向與收集散射光信號的光 電倍增管軸向方向之間大致所成的角 度。一般說來，前向角散射光的強(qiáng)度與 細(xì)胞的大小有關(guān)，對同種細(xì)胞群體隨著 細(xì)胞截面積的增大而增大；對球形活細(xì) 胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明在小立體角范圍內(nèi)基本上 和截面積大小成線性關(guān)系；對于形狀復(fù) 雜具有取向性的細(xì)胞則可能差異很大， 尤其需要注意。側(cè)向散射光的測量主要 用來獲取有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的顆粒 性質(zhì)的有關(guān)信息。側(cè)

16、向散射光雖然也與 細(xì)胞的形狀和大小有關(guān)，但它對細(xì)胞膜、 胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，也能對 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)較大顆粒給出靈敏反映。 在實(shí)際使用中，儀器首先要對光散射信 號進(jìn)行測量。當(dāng)光散射分析與熒光探針 聯(lián)合使用時，可鑒別出樣品中被染色和 未被染色細(xì)胞。光散射測量最有效的用精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 11 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=途是從非均一的群體中鑒別出某些亞 群。熒光信號主要包括兩部分：自發(fā)熒光，即不經(jīng)熒光染色細(xì)胞內(nèi)部的 熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光； 特征熒光，即細(xì)胞經(jīng)染色結(jié)合上的熒光 染料受光照而發(fā)出的熒光，其熒光

17、強(qiáng)度 較弱，波長也與照射激光不同。自發(fā)熒光信號為噪聲信號，在多數(shù)情況下 會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。 在免疫細(xì)胞化學(xué)等測量中，對于結(jié)合水 平不高的熒光抗體來說，如何提高信噪 比是個關(guān)鍵。一般說來，細(xì)胞成分中能 夠產(chǎn)生的自發(fā)熒光的分子的含量越高， 自發(fā)熒光越強(qiáng)；培養(yǎng)細(xì)胞中死細(xì)胞/活細(xì) 胞比例越高，自發(fā)熒光越強(qiáng)；細(xì)胞樣品 中所含亮細(xì)胞的比例越高，自發(fā)熒光越 強(qiáng)。減少自發(fā)熒光干擾、提高信噪比的主要措施是：盡量選用較亮的熒 光染料；選用適宜的激光和濾片光學(xué) 系統(tǒng)；采用電子補(bǔ)償電路，將自發(fā)熒 光的本底貢獻(xiàn)予以補(bǔ)償。2.1.2流式細(xì)胞儀分選原理并不是所有的流式細(xì)胞儀都具有分選功能。流式細(xì)胞儀的 分選

18、功能是細(xì)胞分選器來完成的。噴嘴 射出的液流柱在電信號作用下發(fā)生振 動，斷裂形成均勻的小液滴。根據(jù)選定 的某個參數(shù)邏輯電路判明是否將被分 選，而后充電電路對選定細(xì)胞液滴充電， 帶電液滴攜帶細(xì)胞通過靜電場而發(fā)生偏 轉(zhuǎn)，落入收集器中。使用不同孔徑的噴 孔及改變液流速度，可能會改變分選效 果。從參數(shù)測定經(jīng)邏輯選擇再到脈沖充 電需要一段延遲時間。精確測定延遲時 間是決定分選質(zhì)量的關(guān)鍵，可根據(jù)具體 要求進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。2. 1. 3數(shù)據(jù)的顯示和分析數(shù)據(jù)處理主要包括數(shù)據(jù) 的顯示和分析。單參數(shù)直方圖是使用最 多的圖形顯示形式，既可用于定性分析， 又可用于定量分析。單參數(shù)直方圖是X、 Y二方向組成的二維平面圖。橫

19、座標(biāo) X 是所測的熒光或散射光的強(qiáng)度，用 道 數(shù)”來表示。選擇的放大器類型不同，標(biāo) 度不同。縱座標(biāo)Y通常表示被測細(xì)胞的 絕對數(shù)目。正常情況下，數(shù)據(jù)分析得到精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 13 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=的圖形為具有一個或若干個峰的曲線 圖。對曲線圖的解釋應(yīng)該具體問題具體 分析。除直方圖外，數(shù)據(jù)顯示方式還包括二維點(diǎn)圖、二維等高圖、假三維 圖和列表模式等。二維點(diǎn)圖也是比較常 用的數(shù)據(jù)顯示類型。它顯示兩個獨(dú)立參 數(shù)與細(xì)胞相對數(shù)之間的關(guān)系，也是二維 平面圖，橫縱坐標(biāo)可以根據(jù)自己選定的 被測參數(shù)自行決定，點(diǎn)的位置表明

20、了細(xì) 胞和顆粒具有的二個被測參數(shù)的數(shù)值。 二維點(diǎn)圖所提供的信息量要大于單參數(shù) 直方圖。數(shù)據(jù)分析的方法大體可分為參數(shù)法和非參數(shù)法兩大類。當(dāng)被檢測 的生物學(xué)系統(tǒng)能夠用某種數(shù)學(xué)模型時則 多使用參數(shù)方法。非參數(shù)分析法不用對 顯示的圖像做任何假設(shè)，也不采用數(shù)學(xué) 模型，分析程序可以很簡單，也可能很 復(fù)雜。臨床醫(yī)學(xué)較常使用非參數(shù)分析法。2. 2流式細(xì)胞儀性能的技術(shù)指標(biāo)流式 細(xì)胞儀性能的技術(shù)指標(biāo)主要有熒光分辨 率、熒光靈敏度、適用樣品濃度、分選 純度等。熒光分辨率是指分辨兩個相鄰峰的最小距離，通常用變異系數(shù)來表示。 現(xiàn)在市場上主流型號出廠時的熒光分辨 率應(yīng)該小于。熒光靈敏度反映了儀器 探測最小熒光光強(qiáng)的能力。

21、一般用熒光 微球上可測出的FITC的最少分子數(shù)來 表示。目前儀器均可達(dá)到1000左右。儀 器工作時樣品濃度一般在105107細(xì)胞 /ml。分析速度/分選速度是指流式細(xì)胞儀 每秒種可分析或分選的顆粒數(shù)目。一般 分析速度為500010000,分選速度控制 在1000以下。流式細(xì)胞儀測量的數(shù)據(jù)是 相對值，因此需要在使用前對系統(tǒng)進(jìn)行 校準(zhǔn)或標(biāo)定。流式細(xì)胞儀的校準(zhǔn)有二個 目的，即儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。 通常使用標(biāo)準(zhǔn)微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣 品，雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。 3主流流式細(xì)胞儀型號及其特性介紹 目前擁有市場較大份額的公司是美國的 BD公司、Beckman-Coulter公司和德國 的Pa

22、rtec公司。3. 1 BD公司流式精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 15 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載細(xì)胞儀介紹BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀 都冠以FACs,即熒光激活細(xì)胞分選器。其型號種類比較齊全，如早期的 FACSort、FACS Canto FACSean 現(xiàn)在 市場上供應(yīng)的型號有五種：FACSCount、FACS CAlibur、 FACSA ria、 FACSVantage SETM、LSR II 為精確計數(shù)淋巴細(xì)胞FACSCountCD3, CD4, CD：絕對數(shù)而設(shè)計的。FACSCalibur是全自動 多色流式系統(tǒng)，偏

23、重于臨床，其整體設(shè) 計幫助臨床醫(yī)生快速實(shí)現(xiàn)常規(guī)免疫表 型、CD4T細(xì)胞計數(shù)、DNA、網(wǎng)織紅細(xì) 胞、血小板等臨床分析，兼具分選功能。配備有二根激光管，可同時檢測 4個熒 光參數(shù)?？勺R別粘聯(lián)細(xì)胞。BDFACSA ria流式細(xì)胞分選儀為臺式高速 細(xì)胞分選儀，獲取速度達(dá)70, 000細(xì)胞/s, 分析速度達(dá)50, 000/So使用石英杯流動 檢測池固定光路校準(zhǔn)技術(shù)。使用三種激 光，多色分析，分析參數(shù)可達(dá)15色。兩 管或四管分選，可以使用多種規(guī)格的收 集管。液流監(jiān)測系統(tǒng)白動監(jiān)測液流斷點(diǎn)， 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 16 檢查堵塞，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞分選的無人操作。 配件BDA

24、CDU裝置，可以在微孔板或載 波片上定量分選細(xì)胞。 FACSV antage SETM是在 FACSV antage 的細(xì)胞 分選功能基礎(chǔ)上推出的分選增強(qiáng)型流式 細(xì)胞儀。六色熒光分析系統(tǒng)，點(diǎn)對點(diǎn)分 選，配置FACS Diva數(shù)字化系統(tǒng)，提供 全面的配套試劑。速度和功能優(yōu)于 FACSV antage BD LSR II 是 LSR 的數(shù) 字化升級版，其性能介于FACSV antage SE和FACS Calibur之間，是專為生命科 學(xué)研究設(shè)計的臺式機(jī)。配備固定校準(zhǔn)的 紫外激光，四種激光立體空間激發(fā)、十 色熒光同時分析、電子系統(tǒng)數(shù)字化、比 較易學(xué)易用。3.2 Beckman-Coulter公司流

25、式細(xì)胞儀介紹 Beckman- Coulter 公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀以Profile和 EPICS系列為代表，近年又推出了 Cytomics FC500 系列。EPICS 系列是大 型流式細(xì)胞儀，目前市場上有XL、XL-MCL和ALTRA三種型號，其中 ALTRA具有分選功能，適用于免疫學(xué)、 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 17 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=細(xì)胞生理、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、微生 物學(xué)、水質(zhì)分析和植物細(xì)胞分析。Cytomics FC500系列流式細(xì)胞儀體積 小，可自動進(jìn)行5種顏色的分析，適用 于免疫學(xué)檢測，如人類

26、HIV診斷。特別 是FC500MPL的獨(dú)特設(shè)計可以在同一系 統(tǒng)上使用12X75mm的離心管和24或96 孔的平板。特別適合工作量大的實(shí)驗(yàn)室。 這二個公司主要針對醫(yī)學(xué)研究和臨床工 作進(jìn)行設(shè)計和生產(chǎn)，其產(chǎn)品可應(yīng)用于生 物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究以及臨床檢測的許多領(lǐng)域，如遺傳、腫瘤、血液、免疫等 諸多研究中紅細(xì)胞、T細(xì)胞、淋巴細(xì)胞 亞群測定、檢測早期細(xì)胞凋亡、腫瘤細(xì) 胞免疫測定等。這二個公司的流式細(xì)胞 儀價格昂貴，我國主要購買、使用的單 位基本上都是一些醫(yī)療機(jī)構(gòu)。3. 3Partec公司流式細(xì)胞儀介紹 與BD和 Becman-Coutler公司的產(chǎn)品相比，德國 Partec公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀的共同特 點(diǎn)是體積

27、小，造價低，易操作，便于攜 帶，適合植物學(xué)研究，適合邊遠(yuǎn)地區(qū)和精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 19 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載發(fā)展中國家。德國Partec公司的產(chǎn)品分 為三類：CCA家族、PAS家族和CyFlow 家族。CCA家族包括細(xì)胞計數(shù)分析儀 CCA和倍性分析儀PA-L它是單或雙參 數(shù)的臺式小型機(jī)，可以進(jìn)行一些常規(guī)分 析，如核DNA測定、細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞凋 亡。它的特點(diǎn)是體積小，易操作，價格 低，檢測范圍廣，可以檢測多種熒光素 發(fā)出的熒光。PAS家族包括粒子分析系 統(tǒng)PAS粒子分析系統(tǒng)III和倍性分析儀PA-II o提供三

28、種激光器的三種組合，可 檢測十余種熒光染料。最多可檢測和記 錄八個獨(dú)立熒光參數(shù)。倍性分析儀PA能 夠在2分鐘內(nèi)自動測量植物的倍性水平， 檢測異倍體?？梢詫θ~片、幼苗、種子、 果皮、根、花等植物材料進(jìn)行分析。在 大多數(shù)植物中，異倍體染色體的檢測分辨率為1條染色體。PA-I使用HBO-100汞燈，屬于弧光燈，可產(chǎn)生紫外激發(fā)光 光器，能夠檢測幾乎所有的熒光染料，和藍(lán)光。PA-II中增加了 4nm僦離子激如 DAPI, Hoeehst, PI, EB, MMC , FITC,精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 19 FDA等。汞燈發(fā)光是電流經(jīng)過氣體時， 氣體電離產(chǎn)生的。它能

29、提供最佳的激發(fā) 波長。 CyFlowSL配備三種激光管, 可應(yīng)用于諸如人類健康、微生物學(xué)、工 業(yè)應(yīng)用、過程控制、生態(tài)學(xué)等研究。如HIV掃描中免疫標(biāo)記細(xì)胞計數(shù)、食品處 理過程中的微生物計數(shù)、細(xì)胞凋亡等。它使用12 V直流電，特別適合邊遠(yuǎn)地區(qū)和發(fā)展中國家國際上20世紀(jì)80年代開始將流式細(xì)胞儀檢測應(yīng)用到植物 的研究中，眾多學(xué)者都認(rèn)為流式細(xì)胞儀 是一種準(zhǔn)確、快速的檢測DNA含量的方 法。應(yīng)用范圍主要是利用流式細(xì)胞儀研 究屬內(nèi)、屬間多種植物的DNA含量和倍 性水平、檢測體細(xì)胞雜種和游離小抱子 培養(yǎng)再生株的DNA含量。過去我國應(yīng)用 這一檢測技術(shù)的植物研究工作者寥寥無 幾，且大多是在國外實(shí)驗(yàn)室完成的。研 究

30、內(nèi)容包括植物生理、程序性死亡、倍 性鑒定等。植物研究中使用的流式細(xì)胞 儀基本上都是Partec公司的產(chǎn)品，也有 少量是BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀。BD精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 21 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=公司的產(chǎn)品主要定位于醫(yī)學(xué)研究與應(yīng) 用，與Partec產(chǎn)品相比，不太適合從事 植物染色體倍性的鑒定。主要體現(xiàn)在不 能提供植物樣品制備技術(shù)/試劑，數(shù)據(jù)獲 取軟件可同時檢測到的倍性數(shù)目少。鑒 于目前我國科研院所中使用較多的是 BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀，在下一篇中 將會對利用BD流式細(xì)胞儀進(jìn)行植物倍 性檢測的技術(shù)和技巧做詳

31、細(xì)報告。 如何選擇流式細(xì)胞儀自七十年代出現(xiàn)第一代流式細(xì)胞儀以來，隨著計算 機(jī)技術(shù)、電子制造技術(shù)、激光技術(shù)及熒 光素合成技術(shù)的不斷發(fā)展，現(xiàn)代流式細(xì) 胞儀已今非昔比，制造工藝、功能、精 確度有了質(zhì)的飛躍。 流式細(xì)胞儀生 產(chǎn)廠商推出各種不同型號的流式細(xì)胞儀 來滿足用戶的不同需要?，F(xiàn)生產(chǎn)流式細(xì) 胞的廠商全球至少有六家，各廠商產(chǎn)品 又有不同的系列，各具特點(diǎn)。如何從眾 多的型號中挑選出最適合自己的機(jī)型， 我們還需從分析應(yīng)用出發(fā)，評估自己的 需求來決定什么樣的流式細(xì)胞儀最具性精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 23 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載價

32、比、最適合自己。 、DNA倍體分析 DNA分析是流式細(xì)胞儀最初且是現(xiàn)在應(yīng)用最廣檢測項(xiàng)目。于惡性細(xì)胞DNA含量通常與正常細(xì)胞不同，存在異 倍體細(xì)胞，所以現(xiàn)有很研究評價異倍體 細(xì)胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細(xì)胞周期方面的 信息，這在細(xì)胞生物學(xué)中運(yùn)用很廣泛。 特別地，它可表示出細(xì)胞毒性藥物對細(xì) 胞作用過程。這些DNA檢測還可與細(xì)胞 表面標(biāo)志物標(biāo)記同時進(jìn)行，這樣在細(xì)胞 混合培養(yǎng)中，可通常追蹤表達(dá)特異標(biāo)志 物的細(xì)胞顯示其生長周期情況。所有方 法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光，常用的染料為 PI,DAPI流式細(xì)胞儀要求:nm光源，575nm濾光片。、細(xì)胞生存能 力

33、實(shí)驗(yàn) 使用Heochest 3334維料與DNA特異性結(jié)合，后因細(xì)胞活力不同， 染料的結(jié)合程度也各異，故可評估細(xì)胞 的活性度。流式細(xì)胞儀要求：360nm光源，455nm濾光片。、計數(shù)外周血 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 22 中檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞使用TO染料能 夠特異性地與RNA結(jié)合，結(jié)合系數(shù)高達(dá)3000）故具有很好的性價比。流式細(xì)胞儀要求:488nm光源）525nm濾光片,液量絕對計數(shù)系統(tǒng)。、外周血、 骨髓采集物中CD34陽性干細(xì)胞計數(shù), 臨床上用于骨髓移植前干細(xì)胞數(shù)理的測定使用標(biāo)準(zhǔn)ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用 FITC通道，PE 標(biāo)t己CD34抗

34、體，PE-CY5標(biāo)t己CD45抗體。流式細(xì)胞儀要求:nm光源）525nm、575nm、675nm濾光片）液量絕對計數(shù)系統(tǒng)。 、交叉淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測識別供體血清中免 疫球蛋白與受體粒細(xì)胞之間是否存在反 應(yīng)有著重要臨床意義，因?yàn)檫@種反應(yīng)會 導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫 性粒細(xì)胞缺乏癥。流式細(xì)胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細(xì)胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標(biāo)記人免疫球蛋 白抗體、PE標(biāo)記粒細(xì)胞表面標(biāo)志物、PE-CY5標(biāo)記HLA抗體。流式細(xì)胞儀要精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 23 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=nm

35、 光源）525nm、575nm、675nm濾光片。、血小板自身抗體檢測 血小板自身抗體識別人血小板抗原，會 引起各種臨床相關(guān)癥狀，如新生兒自免 性血小板減少癥、輸血后紫瘢、難治性血小板減少。流式細(xì)胞可快速準(zhǔn)確地檢 測血小板自身抗體。FITC標(biāo)記抗人免疫 球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別血小板抗體。流式細(xì)胞儀要求:488nm光源）525nm、精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 # 575nm濾光片。、移植交叉配型原細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，主要用于避免移植物超 急性排拆反應(yīng)。流式細(xì)胞儀用于監(jiān)測 T或B細(xì)胞是否受到受體血清中免疫球蛋 白攻擊，作為HLA配型前的預(yù)實(shí)驗(yàn)。流 式細(xì)胞儀因其高精確性

36、已成為該領(lǐng)域內(nèi) 的金標(biāo)準(zhǔn)。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗 體、PE標(biāo)記識別T細(xì)胞CD3或B細(xì)胞nm光源）、檢測細(xì)胞CD29抗體。儀器要求:525nm、575nm 濾光片。經(jīng)抗原或細(xì)胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng) 淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo) CD69可用來檢 測免疫治療效果。流式細(xì)胞使用三色分精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載析可監(jiān)測淋巴細(xì)胞各亞群活化情況:FITC標(biāo)記的CD3抗體、PE標(biāo)記的CD；抗體、PE-CY5標(biāo)記的CD69抗體。 流 式細(xì)胞儀要求：488nm光源，525nm、575nm、575nm濾光片。、檢測細(xì)胞內(nèi)因子 未活化的淋巴細(xì)胞所分泌 的細(xì)胞因子極少，用流式細(xì)胞儀

37、很難檢 測出來，因此在檢測前需刺激活化?；?化所用的刺激素為PMA佛波酯+Ionomycin。淋巴細(xì)胞在刺激素的作用 下，活化分泌細(xì)胞因子到細(xì)胞外。因流 式細(xì)胞儀只能對細(xì)胞表面或內(nèi)部的抗原 進(jìn)行檢測，如細(xì)胞因子分泌到細(xì)胞外則 檢測不到，因此必須阻止細(xì)胞因子的分 泌。抑制細(xì)胞因子分泌的試劑為Brefedlin A 或 Monensin。Th1/Th2 細(xì)胞 首先是CD4+T細(xì)胞，因此存在著用CD4 來設(shè)定細(xì)胞群的問題。我們知道CD4不 但在T細(xì)胞上表達(dá)，還在所有的單核細(xì) 胞上表達(dá)，因此單獨(dú)用CD4設(shè)門無法將 CD4+T細(xì)胞區(qū)分開來。那么我們用CD3 和CD4雙參數(shù)設(shè)門是否可以呢？回答是 精選公文

38、范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 25 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載否定的。因?yàn)樵诜鸩サ拇碳ぷ饔孟翪D4抗原的表達(dá)會迅速下調(diào)，甚至完全 喪失，所以不適合于設(shè)門。用 CD3和CD8設(shè)門，因CD8不受佛波脂的影響且 絕大多數(shù)CD3+CD8-的細(xì)胞都是CD3+CD4+細(xì)胞，因此可用CD3+CD8-精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 31 細(xì)胞群來確定CD4+T細(xì)胞群。FITC標(biāo) 記CD8, PE標(biāo)記IL-4和，PE-CY5標(biāo)記IFN-r , APC 或 PE-CY7 標(biāo)t己 CD3流式細(xì)胞儀要求:；nm或633nm

39、光源525nm、575nm、675nm, 767nm濾光片。(10)、細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細(xì)胞增 殖分裂狀況，在評估腫瘤預(yù)后有重要意 義。為些標(biāo)志物的檢測一般同細(xì)胞表面標(biāo)志物同時檢測。FITC標(biāo)記PCNA 或 Ki67 或 BrdUrd , PE 或 PE-CY5 標(biāo)記 細(xì)胞表面標(biāo)志物。流式細(xì)胞儀要求：488nm 或633nm光源,525nm、575nm、675nm濾光片。(11)、染色體分析流式細(xì)胞儀染色分析運(yùn)用兩種特異性染料:Hoechest3325i與核昔酸AT 結(jié)合；Chromomycin A3 與 GC 相結(jié) 合。從而在雙參數(shù)坐標(biāo)上根據(jù)染色

40、體 ATCG含量的不同識別各種染色體。平 時進(jìn)行的染色體分析耗時且需要操作者 極具經(jīng)驗(yàn)，而用流式細(xì)胞儀時可快速地 識別出異常染色體，如加配分選系統(tǒng)可 將這些異常染色體分選出來作進(jìn)一步分 析。流式細(xì)胞儀要求：360nm或488nm 光源）450nm、580nm 濾光片。（12）、BrdUrd標(biāo)記追蹤細(xì)胞分化通過細(xì)胞分化時涉入澳化尿喀咤，再使用抗 BrdUrd抗體及PI核酸染料可精確識別 它們。在流式細(xì)胞儀上可清楚地識別出 處于G1、S、G2、M期的細(xì)胞，在腫瘤 研究中有著重要作用。流式細(xì)胞儀要求:488nm光源）525nm、575nm 濾光片。（13）、淋巴細(xì)胞亞群分析外周血 CD3、CD4、CD8、CD19、NK等各類淋巴細(xì)胞亞群定量分析。流式細(xì)胞儀要求:nm 光源）525nm、575nm濾光片，液量絕對計數(shù)