環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測方法

1、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)及消毒效果監(jiān)測方法 采樣和檢查原則1 、采樣后應(yīng)盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測，送檢時(shí)間不得超過4h；若樣品保存于04時(shí)，送檢時(shí)間不得超過24h。2 、不推薦醫(yī)院常規(guī)開展滅菌物品的無菌檢查，當(dāng)流行病學(xué)調(diào)查懷疑醫(yī)院感染事件與滅菌物品有關(guān)時(shí)，進(jìn)行相應(yīng)物品的無菌檢查。常規(guī)監(jiān)督檢查可不進(jìn)行致病性微生物檢測，涉及疑似醫(yī)院感染暴發(fā)、醫(yī)院感染暴發(fā)調(diào)查或工作中懷疑微生物污染時(shí)，應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物的檢測。3 、可使用經(jīng)驗(yàn)證的現(xiàn)場快速檢測儀器進(jìn)行環(huán)境、物體表面等微生物污染情況和醫(yī)療器材清潔度的監(jiān)督篩查；也可用于醫(yī)院清洗效果檢查和清洗程序的評價(jià)和驗(yàn)證。一、空氣微生物污染檢查方法1、 采樣時(shí)間類環(huán)境在

2、潔凈系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣；、類環(huán)境在消毒或規(guī)定的通風(fēng)換氣后與從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣。2 、檢測方法類環(huán)境可選擇平板暴露法和空氣采樣器法，參照GB50333醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范要求進(jìn)行檢測?？諝獠蓸悠鞣蛇x擇六級撞擊式空氣采樣器或其他經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器。檢測時(shí)將采樣器置于室內(nèi)中央0.8m1.5m高度，按采樣器使用說明書操作，每次采樣時(shí)間不應(yīng)超過30min。 房間大于10m2者，每增加10m2增設(shè)一個(gè)采樣點(diǎn)。  、類環(huán)境采用平板暴露法：室內(nèi)面積30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)應(yīng)距墻壁1m處；室內(nèi)面積30m2，設(shè) 4 角及中央 5 點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位應(yīng)距墻壁

3、1m處。將普通營養(yǎng)瓊脂平皿(90mm)放置各采樣點(diǎn)，采樣高度為距地面0.8m1.5m；采樣時(shí)將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露規(guī)定時(shí)間（類環(huán)境暴露15min，、類環(huán)境暴露5min）后蓋上平皿蓋及時(shí)送檢。將送檢平皿置36±1恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病性微生物。3 、結(jié)果計(jì)算1 平板暴露法按平均每皿的菌落數(shù)報(bào)告：cfu/（皿·暴露時(shí)間）。 空氣采樣器法計(jì)算公式：空氣中菌落總數(shù)(cfu/m3)= 1000L/min min采樣時(shí)間（ ）´采樣速率（ ）´采樣器各平皿菌落數(shù)之和（cfu）. (A.1)二、物體表面微生物污染檢查方法1、采

4、樣時(shí)間潛在污染區(qū)、污染區(qū)消毒后采樣。清潔區(qū)根據(jù)現(xiàn)場情況確定。2 、采樣面積被采表面100cm2，取全部表面；被采表面100cm2，取100cm2。3 、采樣方法用5cm×5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有無0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)采樣14個(gè)規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體采樣。若采樣物體表面有消毒劑殘留時(shí)，采樣液應(yīng)含相應(yīng)中和劑。4 、檢測方法把采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至40

5、45的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，36±1恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病性微生物。5 、結(jié)果計(jì)算                             平皿上菌落的平均數(shù)×采樣液稀釋倍數(shù)物體表面菌落總數(shù)（cfu/m2）=- 采樣面積（cm2）

6、60;´三、 醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生檢查方法1、 采樣時(shí)間采取手衛(wèi)生后，在接觸病人或從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣。2 、采樣方法將浸有無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指跟到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管內(nèi)送檢。采樣面積按平方厘米（cm2）計(jì)算。若采樣時(shí)手上有消毒劑殘留，采樣液應(yīng)含相應(yīng)中和劑。3 、檢測方法把采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，36±1恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌

7、落數(shù)，必要時(shí)分離致病性微生物。4、 結(jié)果計(jì)算平皿上菌落的平均數(shù)×采樣液稀釋倍數(shù)醫(yī)務(wù)人員手菌落總數(shù)（cfu/m2）=-                                 30×2 四、 醫(yī)療器材檢查方法1 、采樣時(shí)間在消毒或滅菌

8、處理后，存放有效期內(nèi)采樣。2 、滅菌醫(yī)療器材的檢查方法可用破壞性方法取樣的，如一次性輸液（血）器、注射器和注射針等參照中華人民共和國藥典無菌檢查法進(jìn)行。對不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材，應(yīng)在100級潔凈實(shí)驗(yàn)室，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹，采樣取全部表面或不少于100cm2；然后將除去手接觸部分的棉拭子進(jìn)行無菌檢查。牙科手機(jī)：在100級潔凈實(shí)驗(yàn)室，將每支手機(jī)分別置于含20mL25mL采樣液的無菌大試管（內(nèi)徑25mm）中，液面高度應(yīng)大于4.0cm，于旋渦混合器上洗滌震蕩30s以上，取洗脫液進(jìn)行無菌檢查。3 、消毒醫(yī)療器材的檢查方法可整件放入無菌試管的，用洗脫液浸沒后震蕩30

9、s以上，取洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，36±1恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/件），必要時(shí)分離致病性微生物?？捎闷茐男苑椒ㄈ拥?，在100級超凈工作臺稱取1g10g樣品，放入裝有10mL采樣液的試管內(nèi)進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.0mL接種平皿，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/g），必要時(shí)分離致病性微生物。對不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材，在100級超凈工作臺，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面100cm2，取全部表面，被采表面100cm2，取100cm2，然后將除去手接觸部分的棉拭子進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.0m

10、L接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，36±1恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/cm2），必要時(shí)分離致病性微生物。4、 消毒后內(nèi)鏡: 取清洗消毒后內(nèi)鏡，采用無菌注射器抽取50mL含相應(yīng)中和劑的洗脫液，從活檢口注入沖洗內(nèi)鏡管路，并全量收集（可使用蠕動(dòng)泵）送檢。將洗脫液充分混勻，取洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，36±1恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/件）。將剩余洗脫液在無菌條件下采用濾膜（0.45m）過濾濃縮，將濾膜接種于凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），置 36

11、7;1溫箱培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。當(dāng)濾膜法不可計(jì)數(shù)時(shí)：菌落總數(shù)（cfu/件）m（cfu/平板）×50 . (A.4)式中：m 為兩平行平板的平均菌落數(shù)。當(dāng)濾膜法可計(jì)數(shù)時(shí)： 菌落總數(shù)（cfu/件）m（cfu/平板）mf（cfu/濾膜） . (A.5)式中：m 為兩平行平板的平均菌落數(shù)；mf 為濾膜上菌落數(shù)。五、 消毒劑檢查方法1、 消毒劑采樣分庫存消毒劑和使用中消毒液。2、 消毒劑有效成分含量檢查方法庫存消毒劑的有效成分含量應(yīng)依照消毒技術(shù)規(guī)范或產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測；使用中消毒液的有效濃度測定可用前述方法，也可使用經(jīng)國家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒劑濃度試紙（卡）進(jìn)行監(jiān)測。3、 使用中消毒液

12、染菌量檢查方法用無菌吸管按無菌操作方法吸取1.0mL被檢消毒液，加入9mL中和劑中混勻。醇類與酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑、含碘消毒劑和過氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰、季銨鹽類消毒劑用含0.3%吐溫80和0.3%卵磷脂中和劑，醛類消毒劑用含0.3%甘氨酸中和劑，含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑可在中和劑中加入吐溫80至3%；也可使用該消毒劑消毒效果檢測的中和劑鑒定試驗(yàn)確定的中和劑。用無菌吸管吸取一定稀釋比例的中和后混合液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，36±1恒溫箱培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)；必要時(shí)分離致病性微

13、生物。消毒液染菌量(cfu/mL)平均每皿菌落數(shù)×10×稀釋倍數(shù). (A.6)六、治療用水檢查方法血液透析相關(guān)治療用水按YY 0572 進(jìn)行檢測。其他治療用水參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。（1）、試樣應(yīng)在收集后30分鐘內(nèi)進(jìn)行檢測，或立即放在1-5下儲存，24小時(shí)內(nèi)檢測。（2）、應(yīng)采用傾注平板法細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)。培養(yǎng)基應(yīng)為胰蛋白酶大豆瓊脂或等價(jià)物，35-37培養(yǎng)48小時(shí)，后若呈陰性可72小時(shí)后再檢查。也可采用膜過濾技術(shù)濾除500ml-1000ml水，并在R2A低營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，可在28-32下培養(yǎng)5天或更長時(shí)間。七、紫外線燈檢查方法1、 紫外線燈采樣分庫存紫外燈和使用中紫外線燈。庫存（新啟

14、用）紫外線燈輻射照度值檢查依照GB 19258 進(jìn)行。2、 使用中紫外線燈輻射照度值檢查方法儀器法：開啟紫外線燈5min后,將測定波長為253.7nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈的輻射照度值。 指示卡法：開啟紫外線燈5min后，將指示卡置紫外燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射1min，觀察指示卡色塊的顏色，將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較。3、注意事項(xiàng):紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用；紫外線監(jiān)測指示卡應(yīng)經(jīng)國家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。八、 消毒器械檢查方法1 、殺菌因子強(qiáng)度測定：按消毒技術(shù)規(guī)范或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

15、規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。2 、工作環(huán)境有害物濃度（強(qiáng)度）測定：按消毒技術(shù)規(guī)范或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。消毒滅菌效果及環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測制度 1、使用中的消毒劑應(yīng)每季度進(jìn)行生物監(jiān)測1次，其細(xì)菌含量必須100cfu/ml，不得檢出致病性微生物；滅菌劑每月監(jiān)測1次，不得檢出任何微生物。2、化學(xué)監(jiān)測：應(yīng)根據(jù)消毒、滅菌劑的性能定期監(jiān)測，如含氯消毒劑、過氧乙酸等應(yīng)每日監(jiān)測；使用中的戊二醛應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測，常規(guī)監(jiān)測每周不少于1次。用于內(nèi)鏡消毒或滅菌的戊二醛必須每日或使用前進(jìn)行監(jiān)測，并做好有關(guān)記錄。3、消毒物品每季度監(jiān)測一次，不得檢出致病性微生物；滅菌物品每月監(jiān)測一次，不得檢出任何微生物。4、使用紫外線燈管和空氣消毒機(jī)消毒應(yīng)進(jìn)行日常監(jiān)測、紫外線燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測和生物監(jiān)測。日常監(jiān)測包括燈管應(yīng)用時(shí)間、累計(jì)照射時(shí)間和使用人簽名；對新燈管和使用中燈管應(yīng)進(jìn)行照射強(qiáng)度監(jiān)測，30W普通石英新燈管的照射強(qiáng)度不得低于90uW/cm2，使用中燈管不得低于70uW/cm2 ，每半年監(jiān)測一次；生物監(jiān)測必要時(shí)進(jìn)行，經(jīng)消毒后的物品或空氣中的自然菌應(yīng)減少90%以上，人工染菌殺滅率應(yīng)達(dá)到99.90