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文檔簡介
1、Waters e2695高效液相色譜儀操作規(guī)程 1 目的 指導(dǎo)和規(guī)范Waters e 2695高效液相色譜儀的操作。 2適用范圍 該操作規(guī)程適用于Water e 2695高效液相色譜儀的操作。 3職責(zé) 檢驗員應(yīng)按操作規(guī)程進行儀器操作,質(zhì)量監(jiān)督員負責(zé)監(jiān)督該操作規(guī)程的正確執(zhí)行。 4操作 4.1儀器組成和開機 儀器組成 本儀器由Waters e 2695分離單元、Waters 2998二極管陣列檢測器、Waters ELSD 2424蒸發(fā)光散射檢測器、Empower3色譜工作站和打印機組成。 Waters e2695分離單元包括四元梯度洗脫的溶劑輸送系統(tǒng),四通道在線真空脫氣,可容納120個樣品瓶的自
2、動分離單元,柱溫箱,內(nèi)置的柱塞桿密封墊清洗系統(tǒng),溶劑瓶托盤;顯示器,鍵盤用戶界面。 開機 .1依次接通Waters e 2695分離單元、檢測器、計算機和打印機的電源。 .2接通Waters e2695分離單元后,約20s儀器開始自檢,約3mn內(nèi)各部件的初始化完成,待主屏幕上方標(biāo)題區(qū)出現(xiàn)“Idle”時,儀器進入待命狀態(tài)。 4.2溶劑管路系統(tǒng)的準(zhǔn)備 流動相脫氣 確認所有溶劑管路都充滿溶劑,按MenuStatus】,進入“Status(1)”屏幕,光標(biāo)選“Degasser”,按Enter】。 灌注 當(dāng)色譜儀流路沒有溶劑或系統(tǒng)中有空氣時,需進行干灌注(DryPrime),注入流動相。否則,進行濕灌注
3、(Wet Prime)以驅(qū)除氣泡。干灌注:按主機面板上MenuStatus】,進入“Status(1)”顯示,按Direct Function】,選擇“Dry Prime”,選溶劑通道,如Open A,選“DurationIIi按數(shù)字鍵輸入5分鐘,按”COntinue”,待限定時間結(jié)束后,重復(fù)操作,使所需的溶劑通道注滿流動相。濕灌注:進入“Status(1)”顯示,選溶劑通道,輸入100,按DirectFunction,選“Wet Prime”,按【OK】,根據(jù)面板提示設(shè)置流速及時間(默認流速為75mlmin,一般不用更改,時間可設(shè)置為5min),按【0K】。 4.3樣品管理系統(tǒng)的準(zhǔn)備 沖洗自
4、動進樣器 在“status(1)”,屏幕下,光標(biāo)選“Composition”,輸入流動相的組成。按【Direct Function,光標(biāo)選“Purge Injector”,按【Enter,顯示“Purge Injector”屏幕,輸入“Sample Loop Volumes60”,光標(biāo)下移“Compression Check”,按任意數(shù)字鍵,按【OK。沖洗進樣針 在主屏幕下,按【Diag,顯示“Diagnostics”屏幕,按【Prime Ndl Wash】,顯示“Prime Needle Wash”屏幕,按Start,30s內(nèi)應(yīng)見溶劑從廢液排放口流出。按【Close】、【Exit】。沖洗柱塞
5、桿密封墊 在主屏幕下,按【Diag,顯示”Diagnostics”屏幕,按【Prime Seal Wash】,顯示“Prime Seal Wash”屏幕,按Start,30s內(nèi)應(yīng)見溶劑從廢液排放口流出。按【Close】、【Exit】。待排放口有水流出,按【Half】、【Close】、【Exit】。 裝入樣品與轉(zhuǎn)盤 打開樣品艙門,顯示"Door is Open"屏幕,將樣品盤取出,把樣品瓶插入樣品盤后, 裝入樣品盤,按【Next】直至所有樣品盤裝畢,關(guān)好艙門。 4.4色譜柱平衡 換上檢驗所需的色譜柱和流動相,進入"Status(1)”顯示,選擇流路、設(shè)定流速、柱溫,
6、按【Enter】開始注入流動相,通常情況下約1 530分鐘色譜柱可達到平衡,可以開始進樣,采集數(shù)據(jù)。 5 Empower 3軟件的應(yīng)用 5.1 建數(shù)據(jù)采集方法 雙擊電腦屏幕上的"Empower"快捷圖標(biāo),出現(xiàn)Empower登錄界面,輸入用戶名和密碼。 單擊高級鍵,選擇用戶類型和QuickStart界面。 選擇QuickStart界面,點擊“確定”,然后選擇選定的操作項目以及色譜系統(tǒng)(僅查看數(shù)據(jù)可選擇色譜系統(tǒng)中的“沒有系統(tǒng)”),單擊“確定”。 登錄Empower的QuickStarlt界面。 5.2 編輯儀器方法和方法組(以e2695_2998為例)。 采集欄單擊“方法組編輯
7、向?qū)А保?選擇“新建”選項。 彈出儀器方法編輯器。 單擊“2695”,彈出2695編輯界面。 .1 Aliance系統(tǒng)(包括2695、2795和2695D)通用編輯頁面中,可選擇“單次輸送體積”,請針對不同的流速選定適當(dāng)?shù)膯未屋斔腕w積,以確保最佳的流速精度與準(zhǔn)度。 .2查看脫氣選項,確認設(shè)置正確。 .3流量選項中設(shè)置“泵模式”、“總流量”以及流動相配比。 單擊2998,彈出2998編輯界面。 .1 3D數(shù)據(jù)采集:在通用欄中選擇啟用3D數(shù)據(jù),輸入檢測波長的范圍; .2采集2D數(shù)據(jù),點擊“2D通道”,最多可同時采集8個不同波長的通道的數(shù)據(jù)。 點擊“文件”,選擇“另存為”:輸入儀器方法名稱,點擊“保
8、存”;點擊“文件”,選擇“退出”。 在被選項中選擇所需的儀器方法名稱,點擊“下一步(N)”。 在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報告方法(如果沒有合適的方法選擇“無處理”、“無報告”),點擊下一步。 輸入方法組名稱,單擊“完成”。 5.3進樣 點擊進入“平衡系統(tǒng)監(jiān)視基線”界面,選擇相應(yīng)的儀器方法,點擊“平衡監(jiān)視器,在監(jiān)視窗口監(jiān)視基線至系統(tǒng)平衡,停止系統(tǒng)監(jiān)視狀態(tài),點擊“進樣”。 單進樣:點擊,進入“定義單進樣參數(shù)”編輯界面,輸入樣品名、功能、方法組等參數(shù),點擊“進樣”。 使用向?qū)Ы悠方M和樣品組方法。 .1選擇“運行樣品”,然后單擊“樣品隊列”,進入樣品列表。 .2單擊“新建樣品組向?qū)А?,建立?/p>
9、品組。 .3選擇創(chuàng)建樣品組方法類型為“Lc或PDA”,然后點擊“定義樣品板”。 .4在“選擇標(biāo)準(zhǔn)進樣在那里開始”中選擇合適的選項。檢查開始加載樣品瓶的位置是否正確,點擊“下一步”。 .5在描述標(biāo)樣中需要設(shè)置一下內(nèi)容:樣品組中的標(biāo)樣數(shù):×;每瓶標(biāo)樣進樣次數(shù):X;進樣體積:x;運行時間:XX;方法組XXX;點擊“選項”:輸入下一進樣延遲時間X;點擊下一步。 .6樣品數(shù):X;每瓶樣品進樣次數(shù):X;進樣體積:X;運行時間:X;方法組X;點擊選項:輸入下一進樣延遲時間X;點擊下一步。 .7在識別標(biāo)準(zhǔn)樣界面中,輸入標(biāo)樣名稱,增量后綴使用1在識別樣品界面中,輸入樣品名稱,增量后綴使用a。點擊下一步
10、。 .8運行模式選項中選擇“只測試”。查看摘要,點擊下一步?!咀ⅲ簭棾鼋M分編輯器,輸入標(biāo)樣中每個組分的名稱(內(nèi)標(biāo)不需要輸入含量)??梢灾苯雨P(guān)閉該窗口,在處理數(shù)據(jù)的時候再添加】。 .9點擊完成,在菜單欄中選擇文件。 .10為方法組命名并保存樣品組方法。 .11單擊“樣品隊列”,打開運行樣品窗口,點擊運行當(dāng)前樣品組方法鍵,選擇運行。 .11選擇需運行的樣品組名稱,點擊運行。 .13樣品組運行過程中,在“正在運行”欄中正在運行以及運行完畢的樣品以紅色顯示。(注:以向?qū)Ы⒌臉悠方M首行功能一般為清除校正,一般在運行樣品前刪除該行或改為“平衡”。) 5.4建立數(shù)據(jù)處理方法 5.4.1 2D數(shù)據(jù)處理方法
11、.1單擊“瀏覽項目”鍵,在“樣品組”中選擇目標(biāo)樣品組。 .2在樣品組上點擊鼠標(biāo)右鍵選擇“查看相關(guān)通道”,樣品組在單個通道中顯示。 .3選擇定最低濃度的標(biāo)樣,點擊鼠標(biāo)右鍵,選擇下拉菜單中的查看,會顯示未處理的色譜圖形。 .4點擊處理方法向?qū)Э旖萱I,選擇創(chuàng)建新處理方法,點擊確定。 .5確認處理類型為LC,積分方式可選擇為傳統(tǒng),再點擊使用處理方法向?qū)?,選擇確定。 .6常按鼠標(biāo)左鍵,選擇色譜圖上最窄峰。(注:在色譜圖區(qū)域方可以放大某個需要監(jiān)測的峰。點擊鼠標(biāo)右鍵全視圖可以還原色譜圖。) .7在色譜圖的積分界面選擇一段典型基線作為積分的閾值,點擊下一步。 .8常按鼠標(biāo)左鍵,在基線上選取積分的起止時間點。
12、.9建議選擇最小峰高,選擇所要積分的高度最小峰(或鍵入相應(yīng)數(shù)值)。小于此峰高90的峰將不被積分。點擊下一步。 .10定量方法選擇面積,組分信息選擇含量,校正類型選擇線性。點擊下一步。 .11跨通道內(nèi)標(biāo)樣界面點擊否。 .12因為選擇的是標(biāo)樣,點擊峰1可以看到一個下拉菜單選擇相應(yīng)的組分名稱或者鍵入運行樣品相應(yīng)的名稱。添加組分名稱相匹配的標(biāo)準(zhǔn)含量,然后點擊下一步。 .13如果是多點校正樣品,跳過添加含量的窗口直接點擊下一步。(單點校正可在這里添加含量)。 .14選擇外標(biāo)法: .15選擇單一內(nèi)標(biāo)樣,需要在下拉菜單中選擇或鍵入內(nèi)標(biāo)相應(yīng)的名稱,然后點擊下一步。 .16選擇多重內(nèi)標(biāo)需要輸入所有內(nèi)標(biāo)的名稱。
13、.17為處理方法命名,點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應(yīng)用后的色譜結(jié)果,包括積分。 .18如需為積分方法添加積分事件,鼠標(biāo)右鍵點擊色譜圖窗口,選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應(yīng)用于處理方法中。 .19編輯處理方法的高級功能需要選擇快捷鍵。有任何更改均需再次保存處理方法。 .20點擊峰表底部可預(yù)覽2D通道和峰。 .21點擊“瀏覽項目”鍵,選擇“通道”或“樣品組”標(biāo)簽欄,右鍵點擊目標(biāo)樣品組或通道并選擇處理。 .22在處理界面,選擇使用指定的處理方法,選擇相應(yīng)的處理方法名稱,點擊清除校正,選擇校正并定量。 .23點擊確定,數(shù)據(jù)處理,產(chǎn)生結(jié)果??稍诮Y(jié)果欄中查看。 建立3D數(shù)據(jù)處理方法 .1
14、點擊“瀏覽項目”鍵,在“樣品組”中選擇目標(biāo)樣品組。 .2在樣品組上點擊鼠標(biāo)右鍵選擇查看相關(guān)通道,樣品組中各個數(shù)據(jù)在單個通道中顯示。 .3選擇定量最低濃度的標(biāo)樣,點擊鼠標(biāo)右鍵,選擇下拉菜單中的查看。 .4在預(yù)覽界面選擇“輪廓線”標(biāo)簽欄,會顯示未處理的輪廓圖。 .5從處理或右鍵下拉菜單中選擇提取色譜選項。 .6鍵入所需要提取的波長,按回車鍵,得到該波長的色譜圖。 .7點擊處理方法快捷鍵,選擇創(chuàng)建新處理方法,確認處理類型為PDA,積分方式可選擇為傳統(tǒng),再點擊使用處理方法向?qū)?,點擊確定。 .8常按鼠標(biāo)左鍵,選擇色譜圖上最窄峰。(注:在色譜圖區(qū)域內(nèi)可以放大某個需要監(jiān)測的峰。點擊鼠標(biāo)右鍵選擇全視圖可以還原
15、色譜圖。) .9在色譜圖的積分界面選擇一段平滑的基線作為積分的閾值,點擊下一步。 .10常按鼠標(biāo)左鍵,在基線上選取積分的起止時間點。 .11建議選擇最小峰高,選擇所要積分的高度最小峰(或鍵入相應(yīng)數(shù)值)。小于此峰高90的峰將不被積分。點擊下一步。 .12定量方法選擇面積,組分信息選擇含量,校正類型選擇線性。點擊下一步。 .13跨通道內(nèi)標(biāo)樣界面點擊否。 .14因為選擇的是標(biāo)樣,點擊峰1可以看到一個下拉菜單選擇相應(yīng)的組分名稱或者鍵入運行樣品相應(yīng)的名稱。添加組分名稱相匹配的標(biāo)準(zhǔn)含量,然后點擊下一步。 .15如果是多濃度點的一組標(biāo)樣,跳過添加含量的窗口直接點擊下一步。(單一濃度可以在這里添加含量)。 .
16、16選擇外標(biāo)法: .17選擇內(nèi)標(biāo)法單一內(nèi)標(biāo)樣校正,需要在下拉菜單中選擇或鍵入內(nèi)標(biāo)相應(yīng)的名稱,然后點擊下一步。 .18選擇多重內(nèi)標(biāo)需要輸入所有內(nèi)標(biāo)的名稱。 .19 PDA純化及匹配選項: .20為處理方法命名,點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應(yīng)用后的色譜結(jié)果,包括積分。 .21在“文件”下拉菜單中選擇“另存為”方法組,將該處理方法存入方法組。(注:3D數(shù)據(jù)必須用方法組處理。) .22如需為積分方法添加積分事件,鼠標(biāo)右鍵點擊色譜圖窗口,選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應(yīng)用于處理方法中。 .23編輯處理方法的高級功能需要選擇快捷鍵。 .24點擊“瀏覽項目”鍵,選擇“通道”或“樣品組”標(biāo)簽
17、欄,右鍵點擊目標(biāo)樣品組或通道并選擇處理。 .25在處理界面,選擇使用指定的處理方法,選擇相應(yīng)的處理方法名稱,點擊清除校正,選擇校正并定量。 .26點擊確定,數(shù)據(jù)處理,產(chǎn)生結(jié)果??稍诮Y(jié)果欄中查看。 6查看結(jié)果和視圖篩選 6.1選擇“結(jié)果”標(biāo)簽欄,使用視圖篩選器從下拉菜單中選擇今天。 6.2選擇需查看的結(jié)果,右鍵點擊選擇查看。 6.3查看結(jié)果點擊快捷鍵,查看每個組分的校正曲線。切換至主窗口點擊。 7預(yù)覽結(jié)果并創(chuàng)建報告方法 7.1點擊“預(yù)覽項目”切換回結(jié)果表顯示狀態(tài)。 7.2選中一個或多個結(jié)果,點擊鼠標(biāo)右鍵選擇預(yù)覽。 7.3若選取一個結(jié)果,在預(yù)覽窗口選擇使用一下方法:使用缺省單個報告,單擊確定。 7
18、.4預(yù)覽報告并查看數(shù)據(jù)。點擊“編輯方法”鍵修改報告方法。 7.5雙擊色譜圖或峰結(jié)果表編輯報告屬性。 7.6點擊文件,選擇保存,為新建的報告方法命名。點擊預(yù)覽報告。 7.7如需將報告保存為PDF格式,點擊。 8方法組的建立 以上講解了如何建立儀器方法、處理方法和報告方法,組合可以得到一個方法組。 8.1監(jiān)視區(qū)單擊方法組編輯向?qū)В?8.2彈出新方法組:選擇儀器方法界面。選擇相應(yīng)的儀器方法,點擊下一步。 8.3選擇缺省方法界面選擇相應(yīng)的處理方法和報告方法,導(dǎo)出方法缺省。點擊下一步。 8.4命名方法組,點擊完成。 8.5在運行樣品時,方法組報告方法中調(diào)用該方法組,可以自動完成采集、處理、報告數(shù)據(jù)流程。
19、 9數(shù)據(jù)管理 9.1項目的備份 在QuickStart界面,選擇菜單“管理一備份當(dāng)前項目”。 出現(xiàn)“項目備份向?qū)А保c擊下一步。 出現(xiàn)“項目備份向?qū)б贿x擇目的地通過瀏覽選擇目的地,建議選擇在非操作系統(tǒng)安裝的硬盤分區(qū)內(nèi)。選擇完成,單擊“確定”關(guān)閉后,回到項目備份窗口,單擊“下一步”。 出現(xiàn)“項目備份向?qū)б粋浞蒿@示”。確認數(shù)據(jù)的復(fù)制已經(jīng)成功,再單擊“下一步”。 出現(xiàn)備份數(shù)據(jù)向?qū)б婚_始界面。點擊完成,結(jié)束備份。 9.2項目的還原 在QuickStart界面,選擇菜單“管理”,下拉菜單中選擇“還原項目”。 出現(xiàn)“還原項目向?qū)А?。通過“瀏覽”選擇被還原的項目所在的路徑,單擊“確定”。 單擊下一步。 如出
20、現(xiàn)類似以下內(nèi)容的對話框(項目名test已經(jīng)被使用。請輸入另一個項目名),則需為還原的項目另起一個名字。 在“輸入磁盤空間配額頁中,輸入項目名,并注意此處的“表空間配額”應(yīng)不得小于欲還原的項目原有的配額(數(shù)據(jù)文件大小),然后單擊“下一步”。 如果需要,可以在此頁面中,選擇該項目是否屬于某個父項目。 在“還原顯示中,如果出現(xiàn)如下對話框(還原的項目需要被更新到下一個版本),單擊“確定”。(注:當(dāng)還原由Millennium或Empower的先前版本創(chuàng)建的項目時,需要為該項目選擇時區(qū)。) 在“還原顯示”中,等待數(shù)據(jù)還原結(jié)束后,單擊“完成”。(注:提示:在重裝Empower軟件之后,可以通過還原項目將相關(guān)
21、的項目數(shù)據(jù)進行還原。) 10項目管理 10.1新建項目 進入到Empower3的QuickStart界面。在菜單中選擇“管理一創(chuàng)建新項目”。 出現(xiàn)“新項目向?qū)А钡膶υ捒?,選擇新建項目的父項目: 單擊“下一步”,彈出“新建項目向?qū)б槐砜臻g”,表空間50MB為默認設(shè)置,可根據(jù)需要增減。 出現(xiàn)“新建項目向?qū)б贿x項”頁。選擇用于本項目的選項,如果無法確定適當(dāng)?shù)脑O(shè)置,請接受默認選項。單擊“下一步”。 新建項目向?qū)б辉L問控制:根據(jù)需要選擇設(shè)置對您所創(chuàng)建的項目具有訪問權(quán)限的用戶和用戶組,或者接受缺省的選項,然后單擊“下一步”。 新建項目向?qū)б粡?fù)制所選項:需要選擇復(fù)制的項目,一般選擇Defaults項目。 (
22、注:此頁的復(fù)制是指從另一個項目復(fù)制現(xiàn)有設(shè)置,可以復(fù)制項目的“視圖篩選器”、“白定義字段”、“方法”和“參數(shù)”。所以,一般不允許更改或使用Defaults項目中的任何數(shù)據(jù)。) 10.2查看及更改項目屬性 在建立了新項目以后,可以根據(jù)需要在不同的項目之間進行切換。 進入Empower3的Quick$tart界面,選擇菜單“管理一改變系統(tǒng)項目”。 改變系統(tǒng)項目:根據(jù)需要進行選擇項目或者選擇系統(tǒng)(如果存在二個或者二個以上的系統(tǒng))。選擇完畢后,單擊確定。 如果選擇了“在該窗口切換項目系統(tǒng)”,當(dāng)前的項目系統(tǒng)會被新選中的項目系統(tǒng)所替代,如果選擇了“為項目系統(tǒng)打開新窗口”,則會為選中的項目重新打開另外一個QuiekStart的界面。 在新的項目系統(tǒng)的QuickStart界面內(nèi)即可進行下一步的操作。 10.3系統(tǒng)配置 在QuickStart界面,選擇菜單“視圖一系統(tǒng)”,查看系統(tǒng)。 出現(xiàn)系統(tǒng)信息窗口。 在該窗口中,可以在地址欄中查看顯示的地址是否與儀器的設(shè)置相同。此外,可從“儀器”選項卡里的“正常?”一欄中查看儀器狀態(tài),在正常狀態(tài)下,應(yīng)顯示“是”字樣。 如有儀器在“正常?”一欄出現(xiàn)“否”,可單擊“掃描儀器”進行檢查
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