結(jié)直腸癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表達(dá)

1、結(jié)直腸癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表趙勇，高建飛，章必成，杜光祖【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌Cksl,P27KiplandSkp2proteinexpressionincolorectalcancerAbstractAIM:ToinvestigatetheexpressionofCkslproteinanditsrelationshipwiththeexpressionsofSkp2,P27Kiplandcolorectaltumorigenesis.METHODS:FlowcytometrywasusedtodetecttheexpressionsofCksl,Skp2andP27Ki

2、plin20normalcolorectalmucosas,20adenomasaswellas54colorectalcancers.RESULTS:TheexpressionsofCkslandSkp2graduallyincreasedintheorderofnormalmucosa,adenomatocolorectalcancer(P<,whiletheexpressionofP27Kiplgraduallydecreasedinthesameorder(P<.AstrongcorrelationwasfoundbetweentheexpressionsofCksland

3、Skp2(r=,P<andasignificantinverserelationwasalsoobservedbetweentheexpressionsofCkslorSkp2andofP27Kipl(r=,P<r=,P<respectively).TheexpressionofCkslwassignificantlyassociatedwiththelossoftumordifferentiation(P<,butnotwithlymphnodemetastasisandDukesstaging(P>.CONCLUSION:Ckslmayplayanimport

4、antroleinhumancolorectaltumorigenesis.CkslmaybeanessentialfactorinproteasomedependentdegradationofP27KiplregulatedbySkp2.Keywordscolorectalneoplasms;cyclinkinasesubunit1;Sphasekinaseprotein2;P27Kiplprotein;ubiquitin【摘要】目的：探討Cksl在結(jié)直腸癌發(fā)生及其在Skp2調(diào)劑P27Kipl降解進(jìn)程中的作用.方式：應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測定正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸癌組織中Cksl,P2

5、7Kipl和SkP2蛋白的表達(dá).結(jié)果：由正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤到結(jié)直腸癌Cksl,Skp2表達(dá)呈上升趨勢(P,P27Kipl表達(dá)呈下降趨勢(P.結(jié)直腸癌中Cksl,Skp2表達(dá)與P27Kipl表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=,P;r=,P；Cksl與Skp2呈正相關(guān)(r=,P).結(jié)論:Cksl可能參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生；結(jié)直腸癌中Cksl可能參與了Skp2調(diào)劑P27Kipl泛素化降解進(jìn)程.【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸腫瘤；Cksl蛋白；SkP2蛋白；P27Kipl蛋白；泛素0引言許多惡性腫瘤中細(xì)胞周期性蛋白P27K1P1的表達(dá)是降低的，F(xiàn)box蛋白Sphasekinaseprotein2(Skp2)參與了P27Kip

6、l泛素化降解進(jìn)程.Cyclinkinasesubunit1(Cksl)是高度保守的細(xì)胞周期調(diào)劑蛋白Sucl/Cks家族成員之一，只有結(jié)合Cksl后，才能識別P27Kipl進(jìn)行泛素化蛋白降解1.而Cksl在腫瘤組織中尤其在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與P27Kipl,Skp2間的關(guān)聯(lián)性罕有報導(dǎo).咱們用流式細(xì)胞儀檢測了正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸癌中Cksl,P27Kipl和Skp2的表達(dá).1材料和方式材料手術(shù)切除病理證明的結(jié)直腸癌標(biāo)本54例，結(jié)直腸腺20例及正常結(jié)直腸黏膜20例.術(shù)前均未行放化療或免疫醫(yī)治.結(jié)直腸癌患者男29例，女25例，年齡2476(平均8)歲；DukesA期5例，B期22例

7、,C期18例,D期9例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例,無轉(zhuǎn)移28例.Cksl兔抗人mAb及Skp2鼠抗人mAb購自美國ZYMED公司，P27Kipl鼠抗人mAb購自丹麥DAKO公司.方式新鮮組織塊cmXcmXcm,PBS洗凈，機(jī)械破碎法制成單細(xì)胞懸液，mL加入兩只小試管，PBS液洗滌1次，離心，棄上清，試管內(nèi)加入兔抗人Cksl(或P27Kipl,Skp2)熒光mAb10UL,對照管加入PBS,混勻，4c孵育30min,PBS洗滌1次，離心,清除多余未結(jié)合抗體后上機(jī)檢測.每1標(biāo)本檢測1X105個細(xì)胞.Cksl(或P27Kipl,Skp2)陽性率=試管中Cksl(或P27Kipl,Skp2)陽性細(xì)胞數(shù)一陰性

8、對照陽性細(xì)胞數(shù)/10000X100%.統(tǒng)計學(xué)處置：數(shù)據(jù)用x土s表示，采納SPSS統(tǒng)計分析軟件,3組間樣本比較應(yīng)用方差分析，各組間兩兩比較采納SNKq查驗，相關(guān)性分析采納Spearman品級相關(guān)分析，P<為有顯著性不同.2結(jié)果從正常腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤到結(jié)直腸癌組織Cksl,Skp2蛋白表達(dá)呈上升趨勢(P;而P27Kipl呈下降趨勢(PV,表1).結(jié)直腸癌組織中Cksl表達(dá)與癌組織分化程度相關(guān)，低分化者Cksl表達(dá)率明顯高于中、高分化者土)vs()和(土)，P,而與結(jié)直腸癌患者年齡、性別，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期無關(guān).結(jié)直腸癌組織中Cksl蛋白表達(dá)與Skp2蛋白呈正相關(guān)（秩相關(guān)系數(shù)片0.8

9、45,PO；與P27Kipl蛋白負(fù)相關(guān)（尸，P；結(jié)直腸癌組織中Skp2蛋白與P27Kipl蛋白負(fù)相關(guān)（l,PV.在54例結(jié)直腸癌中，21例Cksl,Skp2同時高表達(dá)，P27Kipl低表達(dá)，14例Cksl,Skp2同時低表達(dá),P27Kipl高表達(dá);但3例Skp2,P27Kipl同時高表達(dá),Cksl低表達(dá)；2例Skp2,P27Kipl同時低表達(dá),Cksl高表達(dá).表ICksl,P27Kipl和Skp2在結(jié)直腸癌中的表達(dá)（略）腺瘤O20OOO土癌O543S3Ovs正常黏膜和腺瘤.3討論細(xì)胞周期調(diào)劑失控是腫瘤發(fā)生、進(jìn)展的重要分子事件.作為細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)劑因子的P27Kipl,其活性改變阻礙細(xì)胞周期進(jìn)程

10、，進(jìn)而阻礙細(xì)胞增殖，與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展緊密相關(guān).泛素蛋白水解酶途徑調(diào)劑是P27Kipl蛋白降解的要緊機(jī)制.一些惡性實體瘤中P27Kipl常呈低表達(dá)，而SkP2高表達(dá),P27Kipl的表達(dá)與SkP2負(fù)相關(guān)2-3.本研究顯示從正常腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤到結(jié)直腸癌組織Skp2蛋白表達(dá)呈上升趨勢，P27Kipl呈下降趨勢；結(jié)直腸癌組織中Skp2蛋白與P27Kipl蛋白負(fù)相關(guān).這一結(jié)果支持P27Kipl,Skp2參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生及Skp2參與了P27Kipl泛素化降解進(jìn)程的推論.但本實驗還發(fā)覺5例Skp2,P27Kipl同時高表達(dá)或Skp2,P27Kipl同時低表達(dá).Dowen等4發(fā)覺50%的宮頸癌組織中

11、P27Kipl,SkP2同時高表達(dá)或低表達(dá).Hara等5發(fā)此刻缺乏Skp2的胞質(zhì)內(nèi),仍可檢測到P27Kipl的泛素化活動，說明細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可能存在P27Kipl其他泛素化途徑.咱們發(fā)覺從正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤到結(jié)直腸癌組織Cksl蛋白表達(dá)呈上升趨勢，結(jié)直腸癌中Cksl的表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)，這說明Cksl可能參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生，Cksl蛋白表達(dá)增多，使得結(jié)直腸癌細(xì)胞離開了原有的正常生長周期調(diào)控，細(xì)胞呈無控制生長狀態(tài)，Cksl表達(dá)越多，細(xì)胞分化程度越低，腫瘤惡性程度越高.同時咱們還發(fā)覺3例Skp2,P27Kipl同時高表達(dá),Cksl低表達(dá);2例Skp2,P27Kipl同時低表達(dá)，Cksl高表

12、達(dá).盡管沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但這也說明Cksl是P27Kipl降解所必需的.【參考文獻(xiàn)】1 SitryD,SeeligerMA,KoK,etal.ThreedifferentbindingsitesofCkslarerequiredforp27ubiquitinligationj.JBiolChem,2002,277(44):42233-42240.2 LimMS,AdamsonA,LinZ,etal.ExpressionofSkp2,ap27(Kipl)ubiquitinligase,inmalignantlymphoma:Correlationwithp27(Kipl)andproliferationindexj.Blood,2002,100(8):2950-2956.3 YokoiS,YasuiK,SaitoOharaF,etal.Anoveltargetgene,SKP2,withinthe5pl3ampliconthatisfrequentlydetectedinsmallcelllungcancersJ.AmJPathol,2002,161(1):207-216.4DowenSE,ScottA,MuknerjeeG,etal.OverexpressionofSkp2incarcinomaofthecervixdoesnotcorrelateinverselyw