微生物學(xué)檢驗(yàn)--操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1、.顯微鏡的使用操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)用物準(zhǔn)備光學(xué)顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、香柏油、脫油劑素質(zhì)要求讓學(xué)生能夠熟練使用顯微鏡操作步驟1.安放：把顯微鏡放在自己前面略偏左的桌面上，這樣便于用左眼觀察物像，用右眼看著畫圖。安放時(shí)鏡筒向前，鏡臂向后。2.對(duì)光：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡正對(duì)通光孔，并使物鏡前端與載物臺(tái)有兩厘米左右的距離。然后把反光鏡對(duì)著光源，但是反光鏡不能直接對(duì)著太陽。只要視野的光亮程度合適，光就對(duì)好了。3.觀察：對(duì)好光后，把顯微鏡玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)上，并使玻片上的標(biāo)本對(duì)著通光孔的中心，再用壓片夾夾住。然后慢慢地轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋，直到接近玻片為

2、止。接著，用左眼向目鏡內(nèi)注視，同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋，直到看清物像為止。4.再放大：選好一個(gè)放大目標(biāo)，再把要放大的部分移到視野正中心，如果物像不清楚，再轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋。如果還觀察不清楚，就必須換用高倍物鏡。用高倍物鏡觀察時(shí)，高倍物鏡頂端離玻片很近，稍不小心，鏡頭就會(huì)壓到玻片，所以要特別小心。5.在顯微鏡里看到的物像是倒像，因此，要使物像向上移動(dòng)，就要向下移動(dòng)玻片；要使物像向左移動(dòng)，就要向右移動(dòng)玻片。注意事項(xiàng)1.先用低倍鏡觀察，用低倍鏡能看清的，就不再用高倍鏡。2.必須保護(hù)好鏡頭。3.載物臺(tái)要保持清潔干燥。4.轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦螺旋不要用力過猛，以防損傷機(jī)件。5.取用顯微鏡要輕拿輕放，要用右手握鏡臂，左手托

3、鏡座。6.使用完畢，要把顯微鏡外表擦干凈，并把鏡筒旋下至最低處。最后把顯微鏡放入鏡箱，送回原處保存。細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握革蘭染色的基本原理和操作方法用物準(zhǔn)備革蘭染色液、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡、香柏油、蠟筆、擦鏡紙、脫油劑素質(zhì)要求能夠熟練對(duì)細(xì)菌標(biāo)本進(jìn)行染色，觀察結(jié)果，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分類操作步驟（1）涂片：取清潔無油跡的載玻片1張，用蠟筆劃線將其分成左右兩格。用接種環(huán)先挑取生理鹽水12環(huán)于載玻片每格中央，再分別挑取大腸桿菌和葡萄球菌少許菌落與生理鹽水研勻，涂成直徑約1.5cm的菌膜。（2）干燥：讓涂片自然干燥，也可在酒精燈火焰較遠(yuǎn)處微微加

4、熱烘干，但切勿靠近火焰。（3）固定：干燥后的標(biāo)本片在酒精燈火焰上來回通過3次（以鐘擺的速度），冷卻后染色。固定的目的在于殺死細(xì)菌，并使菌膜與玻片牢固粘附，避免染色過程中被水沖洗掉，通過固定還可凝固細(xì)胞質(zhì)，改變細(xì)菌對(duì)染料的通透性，使細(xì)菌易與染料結(jié)合而著色。（4）染色：結(jié)晶紫-盧戈碘液-95乙醇-稀釋石炭酸復(fù)紅-待干、鏡檢（初染）-（媒染）-（脫色）-（復(fù)染）注意事項(xiàng)1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色時(shí)間。2.染色過程中勿使染色液干涸。3.選用幼齡的細(xì)菌。G+菌培養(yǎng)12h-16h，E.coli培養(yǎng)24h?；A(chǔ)培養(yǎng)基的制備與滅菌操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握基礎(chǔ)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制流

5、程、滅菌的方法及注意事項(xiàng)用物準(zhǔn)備牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、1mol/LNaOH、1mol/LHCl試管、吸管、平皿、錐形瓶、量筒、吸管、精密PH試紙、天平、濾紙素質(zhì)要求要求熟練操作培養(yǎng)基的配制和滅菌操作步驟一、培養(yǎng)基的配制1.配制溶液2.調(diào)節(jié)pH值3.過濾4.分裝二、培養(yǎng)基的滅菌1.開蓋2.通電3.加水4.放樣5.設(shè)定溫度和時(shí)間注意事項(xiàng)1 調(diào)節(jié)PH值時(shí)，要邊滴氫氧化鈉邊攪拌，不能一次加太多2 加熱時(shí)間控制好，否則培養(yǎng)基會(huì)煮糊。3 滅菌是要注意將滅菌鍋里的空氣排干凈。4 注意滅菌的時(shí)間和溫度的控制。細(xì)菌的接種培養(yǎng)法操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握細(xì)菌的接種方法及操作流程用

6、物準(zhǔn)備溫箱、酒精燈、接種環(huán)、接種針、L形玻棒、打火機(jī)、記號(hào)筆素質(zhì)要求能夠熟練操作各種接種方法操作步驟（一）平板劃線接種法（又稱分離培養(yǎng)法）燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留細(xì)菌，待冷，從薄膜處取菌作連續(xù)平行劃線，約占平板表面1/5左右，再次燒灼接種環(huán)，等三次平行劃線以同樣方法作第四次，第五次劃線，將平板表面劃完。劃線完畢，蓋上平皿蓋，底面向上，用標(biāo)簽或臘筆注明菌名檢驗(yàn)號(hào)碼，接種者信息等，置37孵育培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。（二）斜面培養(yǎng)基接種法試管口部于火焰上往返通過23次滅菌，將滅菌白金環(huán)伸入有菌試管中，取少量細(xì)菌，然后移至準(zhǔn)備接種的試管中。接種方法是自管底向上連續(xù)平劃線，若以保存菌為目的時(shí)可自管底上劃

7、一粗直線即可。取出接種環(huán)，將試管上部再經(jīng)火焰滅菌，塞好棉塞，接種環(huán)滅菌后放回原處。（三）半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法滅菌穿刺針沾取細(xì)菌后，垂直刺入半固體培養(yǎng)基中央直達(dá)近管底處，再沿原穿刺線抽出即可。注意事項(xiàng)1選擇適合其生長需要的培養(yǎng)基2防止污染。培養(yǎng)基和一切用具必須徹底滅菌；操作時(shí)必須靠近火焰；操作完畢后，禁止再讓培養(yǎng)基接觸外界空氣。3防止接種器械過熱，很容易殺死分離培養(yǎng)的細(xì)菌。細(xì)菌的分布操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的熟悉細(xì)菌在自然界和人體的分布，了解外界因素對(duì)細(xì)菌的影響用物準(zhǔn)備待測(cè)水樣、泥土、無菌吸管，平皿，無菌生理鹽水素質(zhì)要求讓學(xué)生熟悉細(xì)菌在自然界和人體的分布情況操作步驟1.空氣

8、中細(xì)菌的檢查（1）方法：取普通平板（或血平板）1個(gè)，選室內(nèi)或室外的一處空間，在離地面1m左右高度的桌面（或臺(tái)面）上，打開平板蓋，讓培養(yǎng)基暴露于空氣中，10min之后，迅速蓋好蓋子，在底部寫上標(biāo)記，放35培養(yǎng)1824h，觀察結(jié)果。（2）結(jié)果觀察2水中細(xì)菌檢查（1）方法：1）用無菌三角燒瓶以無菌的方法采集水樣。2）用無菌吸管吸取1ml水樣以無菌技術(shù)加入無菌平皿中。3）趁熱（不燙手為宜），傾注約15ml的普通瓊脂，立即在臺(tái)面上輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混勻。待瓊脂凝固后，將其放入35，培養(yǎng)1824h。（2）結(jié)果觀察報(bào)告。3人體咽喉部細(xì)菌檢查（1）方法：1）采樣持無菌棉拭1根，待受試者張大嘴巴后，迅速伸入對(duì)方懸

9、臃垂后的咽喉部，輕輕揩取咽喉壁上的分泌物。2）接種以無菌方法用棉簽在瓊脂平板的一角(1/4處)來回劃線，去掉棉拭，然后用接種環(huán)在原劃線上過23下，接著往下劃線分離。3）培養(yǎng)寫上標(biāo)記，將平板放35，1824h培養(yǎng)。注意事項(xiàng)1.注意無菌操作，防止空氣或人體上的細(xì)菌污染。2倒入的培養(yǎng)基溫度大約在45左右（熱而不燙手為宜），太熱，太冷都不行。細(xì)菌對(duì)抗藥物敏感試驗(yàn)操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的掌握藥敏試驗(yàn)的方法、原理、結(jié)果判讀、臨床意義用物準(zhǔn)備供試菌種、普通瓊脂培養(yǎng)基、藥敏紙片、培養(yǎng)起、平皿、鑷子、試管、酒精燈、涂布棒素質(zhì)要求要求學(xué)生熟練操作紙片擴(kuò)散法操作步驟1 配制培養(yǎng)基2.配制菌懸液

10、3.涂布于瓊脂平板的表面4.室溫下干燥3-5分鐘5.貼藥敏紙片6.35培養(yǎng)16-18小時(shí)7.測(cè)量抑菌圈直徑，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果。注意事項(xiàng)1.培養(yǎng)基的質(zhì)量2.藥敏紙片的質(zhì)量,含藥量和保存方式3.接種菌量正確與否是影響結(jié)果的重要因素之一,取決于麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的配制,正確使用和保存5孵育條件,溫度和時(shí)間6抑菌圈測(cè)量工具的精度7質(zhì)控菌種本身的藥敏特性是否合格,有無變異。糖發(fā)酵試驗(yàn)操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的熟悉葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)的原理和操作方法。用物準(zhǔn)備大腸桿菌，糖發(fā)酵管素質(zhì)要求熟悉大腸桿菌對(duì)葡糖糖的發(fā)酵情況。操作步驟1. 取兩支HL葡萄糖培養(yǎng)基，置沸水中水浴10分鐘。2. 冷卻，將待檢

11、細(xì)菌接種到2支培養(yǎng)基中。3. 取其中一支加滅菌的液體石蠟，使其與空氣隔絕，另一管不加液體石蠟4. 35培養(yǎng)18-24小時(shí)，觀察結(jié)果注意事項(xiàng)配制糖發(fā)酵管內(nèi)裝的小倒管在接種細(xì)菌前應(yīng)是無氣泡存在的，否則不能進(jìn)行接種甲基紅試驗(yàn)操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的熟悉甲基紅試驗(yàn)的原理和操作方法。用物準(zhǔn)備菌種、葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基，甲基紅素質(zhì)要求能利用甲基紅試驗(yàn)對(duì)大腸桿菌進(jìn)行鑒定操作步驟1. 將待檢的細(xì)菌接種于葡萄糖蛋白胨水中2. 35培養(yǎng)18-24小時(shí)3. 滴加甲基紅試劑4. 結(jié)果：呈紅色為陽性，黃色為陰性。注意事項(xiàng)1.注意無菌操作2.注意觀察指示劑的變化病毒的分離培養(yǎng)操作流程及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容

12、分值扣分標(biāo)準(zhǔn)扣分目的了解雞胚培養(yǎng)常見的幾種接種方法；掌握雞胚尿囊腔接種的操作技術(shù)。用物準(zhǔn)備受精卵、孵卵器，檢卵燈，齒鉆，磨殼器，鋼針，蛋座木架，注射器，25%碘酒，70%酒精，鑷子，剪刀，封蠟（固體石蠟加 1/4凡士林，溶化），滅菌培養(yǎng)皿，滅菌蓋玻片等。素質(zhì)要求要求能夠?qū)Σ煌牟《就ㄟ^雞胚進(jìn)行培養(yǎng)操作步驟一、準(zhǔn)備蛋胚二、接種1.絨毛尿囊膜接種將孵育1012天的蛋胚放在檢卵燈上，選擇血管較少的地方做一記號(hào)，并在記號(hào)處的卵殼上磨開一三角形小窗，用小鑷子揭去所開小窗處的卵殼，小心地劃破殼膜，用針尖刺破氣室小孔處的殼膜，用注射器通過窗口的殼膜窗孔滴 005 01ml病毒液于絨毛尿囊膜上。涂上半凝固的石蠟，將雞卵保持人工氣室在上方的位置37培養(yǎng)，4896小時(shí)觀察結(jié)果。2. 尿囊腔接種將蛋胚在檢卵燈上照視，并在絨毛尿囊膜血管較少的地方作記號(hào)。用碘酒消毒氣室蛋殼，并用鋼針在記號(hào)處鉆一小孔。用帶18mm長針頭的1ml注射器吸取病毒液，針頭刺入孔內(nèi)，經(jīng)絨毛尿囊膜入尿囊腔，注入01ml病毒液。用石蠟封孔后于37孵卵器孵育72小時(shí)。3.羊膜腔接種將孵育1011天的蛋胚照視，畫出氣室范圍，并在胚胎最靠近卵殼的一側(cè)做記號(hào)。用齒鉆在氣