丙泊酚血藥濃度測定

1、分子式：C12H18O。分子量：178.274血漿丙泊酚恢度高效液相色譜法(HPLC)測定方法色譜條件 色譜柱為Kromasil C18 (5pm, 4.6mmX 250mm,柱號：KR- 002545);柱壓:90100kg - cm1;柱溫:40°C,流動相:乙睛-水(70:30); 流速：lmlminj熒光激發(fā)波長為27Gnm;發(fā)射波長310 nm;內(nèi)標物：麝 香草酚；定量方法：峰面積法。高效液相色譜法測定中血漿內(nèi)源性物質(zhì)對測定無 干擾，內(nèi)標麝香草酚與丙泊酚完全分離，內(nèi)標麝香草酚的保留時間約為7.1 min,丙泊酚保留時間約為11.imino樣品分離色譜圖見圖1。圖1丙泊酚和香

2、草酚的商效液相色譜圖A空白血漿B丙泊酚的標準溶液c丙泊酚和麝香草酚的標準溶液D樣品血漿1麝香草酚2丙泊酚丙泊酚標準瀋液配制 精密稱取丙泊酚對照品10mg,并加入100ml的量瓶 中，用乙睛溶解并稀釋至刻度，搖勻后即可得濃度為100 mg I/】的丙泊酚標準儲 備液。精密量取丙泊酚對照品儲備液lml,加至10ml量瓶中用乙騰稀釋至刻度, 搖勻，配成濃度為10mg 1/的丙泊酚對照品標準工作液。麝香草酚標準工作液配制 精密稱取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中, 用乙騰溶解并稀釋至刻度,搖勻后即可得濃度為lOOmg-L環(huán)己烷標準曲線制備 取6支10ml具塞試管，并分別加入1ml空白血漿，再精

3、密量 取適量的丙泊酚標準溶液，使其血藥濃度分別相當于0.04Mg.ml-1, O.lMg.ml'1, 0.25jjg.mTi, lpg.mlJ,5|dg.nir,25昭.ml"的6種濃度的含藥血漿(10mg -L'1： 4»1、10."1、25.631、111.lph lOOOpl, 100 mg - L"1: 333.3pl),取上 1679x - 0. 0025的麝香草酚標準工作 液。血藥濃度測定量取待測的肝素抗凝血漿lml加入試管中，并準確加入內(nèi)標 物即100mg - 香草酚標準儲備液lOOpl，再加入PH6.0、濃度為O.lmol

4、.r1 的磷酸二氫鉀緩沖溶液100Ml,搖勻混合后，加入5 ml環(huán)己烷有機溶劑，立即漩渦 混和3min0再在低溫離心機中3000r.min-】離心20min,靜置分層，取4ml上層 液移至另一尖底試管中，在50°C下用N2吹干，用I T 7/雙。乙睛-水(70:30)麝香草酚30宀25磷酸二氫鉀緩沖液PH6.0、濃度為O.lmol.l1述含藥血漿各lml,按上述的血藥濃度測定方法進行操作，以丙泊酚對內(nèi)表物的 峰面積比(X)與丙泊酚的質(zhì)量濃度(pg.ml1)的進行線性回歸°得丙泊酚在0.04 25|ng.ml-】濃度范圍內(nèi)線性回歸方程為方1.1679X0.0025,相關(guān)系數(shù)

5、0.9979,見圖2圖2標準曲線和線性方程回收率與精密度實驗提取回收率在lml空白人血漿中準確加入適量的丙泊酚標準溶液，分別配 制成O.lMg.ml'1, Ipg.ml-1和25|dg.ml-i低、中、高3種質(zhì)量濃度的丙泊酚標準血 樣(10mgL“: 10.1 ph lll-lpl, 100 mg - L1： 333.3yl),經(jīng)萃取后再加 內(nèi)標，測定其峰高比R1,同法測定不經(jīng)萃取的標準丙泊酚溶液加內(nèi)標的峰高R2, 按R1/R2X100%計算提取回收率，結(jié)果見表1.表1血漿中丙泊酚提取回收率n=5)質(zhì)量濃度(pg.mL*1)回收率/%RSD/%0.199.15± 2.382.

6、401106.88±3.283.072598.28±4.494.58方法回收率 同上述方法分別配制濃度也為O.lMg.mL1, lpg.mL-1, 25M g.mL'1三種濃度的丙泊酚標準血樣各5份(lOmg-L'1： lO.lph lll.lpl, 100 rng-L'1: 333.3M1),按上述血藥濃度測定方法進行操作，將測定的丙泊酚峰高 與內(nèi)標峰高比帶入標準曲線，求出測定藥物濃度，用測定濃度/實際濃度X100% 公式求得方法回收率，見表2。表2測定方法回收率(匚±$, n=5)質(zhì)量濃度(pg.mL1)回收率/%RSD%0.1101.

7、85±1.361.341101.16±1.642.1425100.01 ±1.741.74精密度實驗 同上述方法分別配制濃度為0.1, 1, 25|dg.mL-1三種濃度的 丙泊酚標準血樣各 5 份10. "1、1U.1M1, 100 mg -L1: 333.3 Ml),按上述血藥濃度測定方法進行操作。以上3種濃度的血漿樣品分別于同一 日內(nèi)不同時間內(nèi)測定，共計5次，根據(jù)同一濃度的不同時間點測得的數(shù)值，計 算各質(zhì)量濃度的日內(nèi)變異系數(shù)，即為日內(nèi)精密度；另在連續(xù)5日每日測定一次 丙泊酚的質(zhì)量濃度，根據(jù)所測得濃度計算日間變異系數(shù)，即為日間精密度，低、 中、高三種

8、濃度日內(nèi)、日間變異均小干10%,表明該方法的精密度符合生物樣 品的分析要求。結(jié)果見表3。表3丙泊酚測定精密度(兀±$, n=5)濃度（陸.niLT日內(nèi)精密度日間精密度x±sRSD/%x±5RSD/%0.10.10±0.021.860.10±0.012.2611.03±0.041.361.01±0.023.142524.78±1.652.4624.38±2.034.41靈敏度實驗精密取丙泊酚標準工作液用乙睛稀釋不同濃度后進樣，測得本 方法測定丙泊酚最低濃度為0.01Mg. mf1,靈敏度為Ing.mL?？垢?/p>

9、擾實驗 本實驗研究表明，正常人無藥空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾本 測定。為考察臨床麻醉中合并用藥對本測定方法的影響，對全麻手術(shù)前和手術(shù)中 的一些常用藥物包括阿托品、瑞芬太尼、七氟烷、順式阿曲庫餒等分別作了實驗 分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在本實驗條件下，這些藥物均不出峰或遠離測定峰，表明這些藥物 均不干擾丙泊酚的測定。同上述血藥濃度的檢測方法，依次對本實驗的340個血樣進行進樣檢測， 求得各樣品的丙泊酚和內(nèi)表的峰面積，并計算出他們峰面積之間的比值，將其帶 入標準曲線方程即可求得各樣品的血藥濃度。3.2兩組病人丙泊酚的血藥濃度丙泊酚靜脈單次注射后，兩組病人血藥濃度下降均很快；兩組病人的lOmin 以內(nèi)的丙泊酚

10、血藥濃度女性低于男性（圧0.05）; lOmin以后各時間點女性病人 的血藥濃度與男性相比仍有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（D0.05）。見圖5、 6、7和表6。表6兩組病人不同時間丙泊酚的平均血藥濃度n=10）母亙(min)呂巒爭la(ug.mrl)舟sia1 993±1382 5.24±0.553 379±035274±0306 lG9±01810 l15±01015 083±00930 000±00745 041±00400 035±00490 0.26±0.04120 o.21±oo3180 014±004851±123a461±041338±030A244±0241.50±017a1.01±011a0.76±010054 ±006 o.39±oo5 032±004 024±005 020±003 013±002240 010±002360 oo61±oo12720 0028±0009009±001O.O57±OO