分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

1、1、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)：是以核酸或蛋白質(zhì)為分析材料,通過分析基因的結(jié)構(gòu)、表達(dá)的變化和由此而導(dǎo)致的基因功能的改變,為疾病的研究和診斷提供更準(zhǔn)確、更科學(xué)的信息和依據(jù)的一門學(xué)科.2、請說明分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在臨床試驗(yàn)診斷中的應(yīng)用.(1)感染性微生物的檢測.如：用PC被術(shù)進(jìn)行甲型肝炎病毒的檢測、乙型肝炎病毒的檢測和解月尿月尿原體的檢測等.(2)基因突變的檢測.如：用PCt限制性片段長度多態(tài)性(RFLP成術(shù)檢測地中海貧血基因突變.(3)法醫(yī)學(xué)檢測.如：用PC蹶衛(wèi)星檢測技術(shù)進(jìn)行親子關(guān)系的鑒定和個體識別.(4)基因異常表達(dá)的檢測.如：用cDN黑達(dá)的芯片技術(shù)進(jìn)行基因異常表達(dá)的檢測.(5)基因定位.如：用原位雜

2、交技術(shù)進(jìn)行組織與細(xì)胞中基因表達(dá)的定位.3、基因組：是一個細(xì)胞或一種生物體的整套遺傳物質(zhì).4、基因：是基因組中一個功能單位,是貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈信息或RN府列信息及表達(dá)這些信息所必需的全部核昔酸序列.5、原核生物：是細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體、放線菌和藍(lán)綠藻等原始生物的總稱,是最簡單的細(xì)胞生物體.6、操縱子結(jié)構(gòu)：是原核生物基因組的功能單位.7、質(zhì)粒：是指細(xì)菌細(xì)胞染色體外,能獨(dú)立復(fù)制并穩(wěn)定遺傳的共價閉合環(huán)狀分子.8、轉(zhuǎn)座因子：又稱為轉(zhuǎn)座元件,是一類在細(xì)菌染色體、質(zhì)粒和噬菌體之間自行移動并具有轉(zhuǎn)位特性的獨(dú)立的DN便列.9、原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征：(1)原核生物基因組通常僅由一個D

3、N盼子構(gòu)成,基因組中只有一個復(fù)制起點(diǎn),具有類核結(jié)構(gòu).(2)具有操縱子結(jié)構(gòu),模板mRNA多順反子mRNA編碼區(qū)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核生物基因組,但又遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于病毒基因組.在基因組中存在多功能的識別區(qū)域,如復(fù)制起始區(qū)、轉(zhuǎn)錄啟動區(qū)和終止區(qū)等,這些區(qū)域常常含有反向重復(fù)序列.(3)結(jié)構(gòu)基因通常為單拷貝基因,編碼順序一般不重疊.(4)具有編碼同工酶的基因.(5)含有可移動的DN便列.10、病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：(1)與細(xì)菌和真核生物基因組相比,病毒基因組結(jié)構(gòu)簡單,基因數(shù)少,所含信息量也少.(2)病毒基因組的核酸類型較多,有雙鏈DNA單鏈DNA雙鏈RNAa單鏈RNA有環(huán)狀分子,也有線性分子.但無論是哪種核酸類型,一種病

4、毒顆粒中核酸成分只能為一種,或DNA或RNA(3)基因組中有基因重疊現(xiàn)象,這種結(jié)構(gòu)的意義在于使較小的基因組能攜帶較多的遺傳信息.(4)基因組中具有操縱子結(jié)構(gòu).(5)病毒基因可連續(xù)也可間斷.(6)基因組中重復(fù)序列少.(7)基因組中非編碼區(qū)少.(8)病毒基因組是單倍體.(9)病毒基因組核酸序列中功能相關(guān)的蛋白質(zhì)基因往往叢集在基因組的一個或幾個特定部位,形成一個功能單位或轉(zhuǎn)錄單元.(10)病毒基因組含有不規(guī)那么的結(jié)構(gòu)基因.11、真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：(1)真核生物根本上不存在操縱子結(jié)構(gòu),一個結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄生成一條mRNA即mRNA單順反子,許多蛋白是由相同或不同的亞基構(gòu)成,因此涉及多個基因的協(xié)調(diào)表

5、達(dá).(2)基因組中非編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域,并且,編碼蛋白質(zhì)的基因一般是不連續(xù)的斷裂基因,即有外顯子和內(nèi)含子,在轉(zhuǎn)錄后經(jīng)剪切成成熟mRNA,才能譯成蛋白質(zhì).(3)基因組DNAT重度、中度和低度三種重復(fù)序列.(4)基因組DNAI有多基因家族與假基因.(5)基因組DNA吉構(gòu)存在不同程度的差異,即基因多態(tài)性.(6)基因組DN的有基因重疊現(xiàn)象.(7)真核細(xì)胞的染色體末端存在一種由DNAt段和蛋白質(zhì)組成的獨(dú)特結(jié)構(gòu),即端粒.它能維持染色體的穩(wěn)定性.12、乙型肝炎病毒(HBV基因組白結(jié)構(gòu)：HB謹(jǐn)因組的長度為3.2kb,是帶有局部單鏈區(qū)的環(huán)狀雙鏈DN粉子,是目前已知感染人類最小的DNAT毒.HBV勺兩條鏈長度

6、不等,長的鏈為負(fù)鏈,用“L(-)表示,其長度是固定的,攜帶有病毒全部的編碼信息；短的為正鏈,用“S(+)表示,正鏈在不同的分子中長度不等,一般長約1.6-2.8kb,大約是負(fù)鏈的50%-100%并且短鏈的5端位置是固定的,而3端的位置是可變的.在負(fù)鏈的5端有一低分子量的蛋白質(zhì),在正鏈的末端那么有一段短RNA它們是引導(dǎo)DN給成的弓|物.兩條鏈的5端有約250-300bp可互補(bǔ)結(jié)合,所以也稱為黏性末端,這種互補(bǔ)結(jié)合是DN牌持雙鏈環(huán)狀的根底.止匕外,這局部核昔酸序列也是HB塌常整合到肝細(xì)胞染色體DN仲得序列.在黏性末端的兩側(cè)還各有11個核昔酸構(gòu)成的順向重復(fù)序列,分另I稱為DR休口DR2,DR傕負(fù)鏈5

7、端,DR在正鏈5端,中間相隔223個核昔酸.DFE域是DN微環(huán)及病毒復(fù)制的關(guān)鍵區(qū)域.HB謹(jǐn)因組已經(jīng)確定在負(fù)鏈DN般昔酸序列為模板轉(zhuǎn)錄的RNAt含有4個公認(rèn)的開放閱讀框,分別成為S、C、P、X區(qū).13、丙型肝炎病毒基因組(HCV燈結(jié)構(gòu)：呈球形顆粒,直徑約50nm,有一脂質(zhì)包膜.基因組為單鏈正鏈RN病毒,鏈長約9.5kb,整個基因組只有一個ORF編碼3011或3010個氨基酸.5端和3端分別有短的非編碼區(qū)UTRo5端UTR由324-341個核昔酸組成,可能在病毒的復(fù)制和譯過程中起重要的調(diào)節(jié)作用.5端UTR勺核昔酸序列保守性強(qiáng),可用于基因檢測診斷.3端UT曲27-55個核昔酸組成,其長度取決于病毒的

8、來源,由病毒固有順序與各種長度的“多U序列組成,是HCV勺獨(dú)特2構(gòu).HC遨因產(chǎn)物均來自一個大的多蛋白前體,經(jīng)宿主與病毒編碼的蛋白酶的聯(lián)合作用,在翻譯中或譯后被加工成為結(jié)構(gòu)蛋白及非結(jié)構(gòu)蛋白.結(jié)構(gòu)蛋白包括兩種：核心蛋白和包膜糖蛋白.非結(jié)構(gòu)蛋白包括四種：NS2NS3NS4NS514、人類免疫缺陷病毒基因組HIV的結(jié)構(gòu)：主要有兩型：HIV-1和HIV-2.兩型病毒的核昔酸序列差異超過40%世界范圍的AIDS大多由HIV-1所致,HIV-2只在西非呈地區(qū)性流行.HIV基因組由2條相同的正鏈RNA&5端通過氫鍵互相連接在一起形成二聚體,其單鏈RN的有9749個核昔酸.HIV基因組共有9個基因,其中3個是結(jié)

9、構(gòu)基因,6個是調(diào)控基因.在病毒基因組的5端和3端各有相同的一段核昔酸序列,稱為長末端重復(fù)序列LTR.LT珅含有啟動子、增強(qiáng)TAT峙列等,它們對病毒基因組轉(zhuǎn)錄的調(diào)控起關(guān)鍵作用.15、質(zhì)粒的一般性質(zhì)：質(zhì)粒作為一個完整的復(fù)制子,在轉(zhuǎn)化菌細(xì)胞后能自主復(fù)制,并對細(xì)菌的一些代謝活動和抗藥性表現(xiàn)具有一定的作用.在質(zhì)粒只有在宿主細(xì)胞內(nèi)才能完成自我復(fù)制,一旦離開宿主細(xì)胞就無法復(fù)制和擴(kuò)增,相反,宿主細(xì)胞失去了質(zhì)粒依舊能存活.質(zhì)粒也是一種游離基因,既可整合到細(xì)菌染色體中,又可在游離由來.質(zhì)粒具有不相容性.16、基因結(jié)構(gòu)異常：廣義上是指染色體畸變和基因突變,狹義上一般是指基因突變.17、基因結(jié)構(gòu)異常的類型：通常分為單

10、基因病和多基因病.單基因病包括：三聯(lián)體重復(fù)、血紅蛋白病、苯丙酮尿癥和遺傳性原發(fā)痛風(fēng).多基因病包括：原發(fā)性高血壓、糖尿病和實(shí)體瘤.18、端粒：真核細(xì)胞染色體末端存在著一種由DNAt段和蛋白質(zhì)組成的獨(dú)特結(jié)構(gòu),即為端粒.它對維持染色體的穩(wěn)定性具有重要作用.19、端粒的主要作用：(1)維持染色體的穩(wěn)定性,預(yù)防染色體重組及末端被降解.(2)保證細(xì)胞在有絲分裂時染色體準(zhǔn)確的別離,在減數(shù)分裂是保證染色體的成對及運(yùn)動.(3)端粒在細(xì)胞生長中有很大的作用,具與腫瘤和衰老有關(guān).20、人類基因組：包括細(xì)胞核內(nèi)的核基因組和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的線粒體基因組.核基因組由3,16x109bp組成,線粒體基因組由16569bp組成.2

11、1、核酸：是以核昔酸為根本組成單位的生物信息大分子.(天然存在的核酸有兩類,即DN刷RNA)22、核酸別離純化應(yīng)遵循的原那么：一是保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性,由于完整的一級結(jié)構(gòu)是核酸結(jié)構(gòu)和功能研究的根本要求；二是盡量排除其他分子的污染,保證核酸樣品的純度.23、簡述核酸別離純化技術(shù)路線的設(shè)計(jì)：(1)核酸的釋放：細(xì)胞破碎方法中機(jī)械剪切法不能用于基因組DNA勺提??；非機(jī)械法常用化學(xué)試劑或酶細(xì)胞溶解法.(2)核酸的別離與純化：除去蛋白質(zhì)、多糖、脂類等大分子物質(zhì)；除去非目的核酸組分；除去實(shí)驗(yàn)溶液和試劑.(3)核酸的濃縮、沉淀于洗滌：濃縮：提升樣品濃度；沉淀：常用的濃縮方法,如醋酸鈉、醋酸鏤等；洗滌：除去

12、共沉淀的鹽,常用70%-75%勺乙醇.24、簡述酚抽提法別離純化基因組DNA勺方法,并繪制出流程示意圖：(1)將分散好的真核生物組織、細(xì)胞在含EDTASD極無DNA酶裂解緩沖溶液裂解細(xì)胞,破壞細(xì)胞膜、核膜,EDTA1后抑制細(xì)胞中DNAS的活性,使DN盼子完整地以可溶形式存在于溶液中.SDSfc要引起細(xì)胞膜的降解并能乳化脂質(zhì)和蛋白質(zhì),并使它們沉淀,同時還有降解DNAS的作用.再經(jīng)蛋白酶KM理后,用PH8.0的Tris飽和酚抽提DNA重復(fù)抽提至一定純度后,得到的DN能液經(jīng)乙醇沉淀進(jìn)一步純化,此法可獲得100-200kb的DN時段.(2)書本82頁25、簡述低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠挖塊回收法如何回收基因組D

13、NA有何優(yōu)點(diǎn)：本方法是從低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中切由含待回收的DNA!膠塊,利用其純度高、熔點(diǎn)低及凝固溫度低的特點(diǎn),對DNAt段回收的方法.該法對高分子量的DN特別有用,也能有效的別離小分子量的DN席段.26、質(zhì)粒DNA屯化的主要方法與原理：(1)cscl-EB法：是一種沉降平衡離心法.經(jīng)超速離心,離心介質(zhì)cscl形成一連續(xù)的密度梯度,在過量E的在的條件下,各種不同密度的物質(zhì)經(jīng)離心平衡后得以分開.該法主要用于純化容易由現(xiàn)切口的極大質(zhì)粒DN/W具有某些特殊用途的閉環(huán)質(zhì)粒DNA(2)聚乙二醇沉淀法：是一種分級沉淀法.質(zhì)粒DNA勺粗制品首先用LiCl沉淀大分子RNA并用RNasel化小分子RNA然后在高鹽

14、條件下,用PE誕擇性地沉淀大的質(zhì)粒DNA沉淀的質(zhì)粒DNAS一步用酚/氯仿抽提和乙醇沉淀.PEGE淀法簡單、經(jīng)濟(jì)、試用廣泛,尤其對堿裂解法提取的質(zhì)粒純化效果好,適用于分子克隆中所有常規(guī)的酶學(xué)反響,也能用于高效的哺乳動物細(xì)胞學(xué)的轉(zhuǎn)染.但不能有效別離帶切口的環(huán)狀質(zhì)粒DNAf閉環(huán)質(zhì)粒DNA(3)柱層析法：柱層析法純化質(zhì)粒DNA勺關(guān)鍵是用于填充層析柱的樹脂.樹脂可分兩類：一類是利用疏水的相互作用純化質(zhì)粒DN群品；另一類是通過離子交換與吸附的相互作用進(jìn)行純化.以硅基質(zhì)作為填充材料的柱層析作用原理是：在多鹽條件下,依靠DNAJ硅基質(zhì)的可逆性結(jié)合進(jìn)行純化.多鹽造成磷酸二酯骨架的脫水,通過暴露的磷酸鹽殘基,是D

15、NA吸附到硅基質(zhì)上.以50%勺乙醇溶液洗去RN/W糖類等生物大分子后,參加TEg沖液或水溶液使DN份子重新水合,并通過離心洗脫由來.DNAJ硅基質(zhì)的吸附作用與DNA勺堿基組成和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)無關(guān),因此可用于環(huán)形質(zhì)粒DN厭口線性DNA勺純化.由于v100-200bp的DN份子與硅基質(zhì)的吸附力很弱,因此柱層析不能用于小分子DNAt段的純化.27、簡述RNA1取的關(guān)鍵步驟：91頁28、DNAt組：不同來源的DNAS過磷酸二酯鍵連接而重新組合成新的DN冊子的過程,稱為DNAt組.29、DNAt組技術(shù)(分子克隆或基因工程)：用人工手段對DNA0行改造和重新組合的技術(shù).包括對DN冊子的精細(xì)切割、局部序列的去除、

16、新序列的參加和連接、DN冊子擴(kuò)增、轉(zhuǎn)入細(xì)胞的復(fù)制繁殖、篩選、克隆、鑒定和序列測定等等,是基因工程技術(shù)的核心.30、克?。簛碜酝皇甲娴南嗤北净蚩截惖募?31、DN威?。菏侵笐?yīng)用DNAt組技術(shù),在體外對DNA0行重組,構(gòu)建成具有自主復(fù)制水平的重組DN粉子,再導(dǎo)入宿主細(xì)胞,然后從單個細(xì)胞開始大量擴(kuò)增,最終獲得大量同一的DN盼子.32、限制性內(nèi)切酶：是存在于細(xì)菌體內(nèi),能識別和水解雙鏈DN冊子內(nèi)特定序列的核昔酸水解酶類.33、DNA4接酶：催化雙鏈DN域RN仲并列的5-磷酸和3-羥基之間形成磷酸二酯鍵的酶.34、載體：時攜帶靶DNA目的DNA片段進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的運(yùn)載工具.35、作為載體

17、應(yīng)具備的條件：在宿主細(xì)胞中具有自主復(fù)制水平或能整合到宿主染色體上與染色體基因組一同復(fù)制的水平；有適宜的限制性酶切位點(diǎn)供外源DNAt段插入；分子量不宜過大,以便于容納較大的外源DNAt段并獲得較高的拷貝數(shù),也有利于體外重組操作；具有適宜的篩選標(biāo)記,以便于區(qū)分陽性重組體和陰性重組體,常用的篩選標(biāo)記有抗藥性、酶基因、營養(yǎng)缺陷型或形成噬菌斑的水平等；配備與宿主相適應(yīng)的調(diào)控元件,如啟動子、增強(qiáng)子和前導(dǎo)序列等.36、用作克隆載體的理想質(zhì)粒應(yīng)具備的特點(diǎn)：具有松弛復(fù)制子,復(fù)制子是質(zhì)粒自我增殖所必不可少的根本條件,并可協(xié)助維持使每個細(xì)胞含有一定數(shù)量的質(zhì)?？截?；在復(fù)制子外存在數(shù)個單一的酶切位點(diǎn),以便目的DNAt段

18、插入；具有插入失活的篩選標(biāo)志,理想的質(zhì)粒載體應(yīng)具有兩種抗生素抗性標(biāo)志；分子量相對較小和較高的拷貝數(shù).*37、重組DNA勺步驟：獲得目的基因；與克隆載體連接,形成新的重組DN冊子；用重組DN盼子轉(zhuǎn)化或感染宿主細(xì)胞,并能在宿主細(xì)胞中復(fù)制和遺傳；對重組子的篩選和鑒定；DN便列測定.38、原核生物表達(dá)體系對外源目的基因的要求：要求真核生物的目的基因不應(yīng)具有5端非編碼區(qū)以及內(nèi)含子結(jié)構(gòu).39、原核生物表達(dá)載體的特點(diǎn)：含大腸桿菌適宜的選擇標(biāo)志；具有能調(diào)控轉(zhuǎn)錄、生產(chǎn)大量mRNA啟動子；含適當(dāng)?shù)淖g調(diào)控序列；含合理設(shè)計(jì)的多接頭克隆位點(diǎn),以保證目的基因按一定的方向與載體正確連接.40、真核生物基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)

19、類型：包括融合型表達(dá)蛋白、非融合型表達(dá)蛋白和分泌型表達(dá)蛋白.41、醉母重組表達(dá)蛋白的別離與純化：包括醉母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白和分泌型蛋白的別離與與純化.(1)醉母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的重組蛋白的別離與純化：這種蛋白質(zhì)的別離與純化過程比擬簡單,以.-蛋白酶抑制劑的純化為例：收集醉母細(xì)胞一玻璃珠破碎一離心取上清液一DEAESepharose柱層析-梯度洗脫-收集活性局部-濃縮-葡聚糖凝膠G7就層析一收集、濃縮一SDS-PAG陞度鑒定.(2)醉母表達(dá)分泌型重組蛋白的別離與純化：以醉母表達(dá)干擾素純化為例：發(fā)醉液用0.45um孔徑濾膜過濾濃縮-DEAE-Trisacryl柱層析一梯度洗脫一收集干擾素局部一Sephad

20、exG7施層析一洗脫-收集干擾素-稀釋-層析聚焦緩沖液洗脫-電泳鑒定.42、RNAi(小干擾RNA的作用機(jī)制與設(shè)計(jì)原那么：(1)作用機(jī)制：起始階段：外源的DsRNAI過導(dǎo)入或者轉(zhuǎn)基因、病毒感染、轉(zhuǎn)座子活化及特異重復(fù)序列或其他未知方式進(jìn)入細(xì)胞,被Dicer酶識別并將dsRNAU割成21-23個核昔酸的由正反義鏈組成的小分子干擾RNA(siRNA);效應(yīng)階段：siRNAs的雙鏈結(jié)構(gòu)需被解螺旋后組裝到RN麟導(dǎo)的沉默復(fù)合物中,該復(fù)合物中解旋酶活性將siRNA雙鏈解開,并定位到siRNA的反義鏈互補(bǔ)的靶mRNA錄本上,在距離siRNA312個堿基的位置切割mRNA倍增階段：僅需少量siRNA即可弓|起強(qiáng)

21、烈的同源基因表達(dá)抑制.(2)設(shè)計(jì)原那么：siRNA中G+毓基含量：一般為30%-70%50%tsiRNA產(chǎn)生的沉默效應(yīng)較高,但過高的G+堿基含量會降消沉默活性；siRNA的作用位點(diǎn)：一般選擇2-4個不同序列針對目的DNA3端非編碼區(qū)域可以作為目的序列,預(yù)防選擇起始密碼下游500-100個堿基處、終止密石上游100堿基處及5端非編碼區(qū)域,由于此區(qū)域中含有阻止靶向識別的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)；siRNA序列：預(yù)防連續(xù)四個以上腺喋吟及3個鳥喋吟或胞喀陡核昔酸的序列；siRNA堿基數(shù)：選擇以A或G肝始的21-23堿基大小的目的mRNA環(huán)堿基數(shù)：一般為9個堿基,其序列為TTCAAGAGA對照系統(tǒng)：將以設(shè)計(jì)的si

22、RNA堿基序列隨機(jī)排列,以保證與其他基因無同源性,才可作為實(shí)驗(yàn)的對照系統(tǒng).43、核酸分子技術(shù)雜交：單鏈的核酸分子在適宜的條件下,與具有堿基互補(bǔ)序列的異源核酸形成雙鏈雜交體的過程稱作核酸分子雜交.44、探針：是用放射性核素或非放射性物質(zhì)標(biāo)記的一段單鏈或雙鏈核甘酸,可依堿基配對規(guī)律與具有互補(bǔ)序列的待測核酸進(jìn)行雜交,以探測它們的同源程度.45、變性：在一定條件下,雙螺旋之間氫鍵斷裂,雙螺旋解開,DN份子成為單鏈,形成無規(guī)那么線團(tuán),這一過程稱作變性.46、融解溫度：DNA勺變性會在一個狹窄的溫度范圍內(nèi)發(fā)生,這一溫度范圍的中點(diǎn)被稱為溶解溫度.47、復(fù)性：變性DNAR要消除變性條件,具有堿基互補(bǔ)區(qū)域的單鏈

23、又可以重新結(jié)合形成雙鏈,這一過程稱之為復(fù)性.48、雜交：將一種核酸單鏈標(biāo)記成為探針,再與另一種核酸單鏈進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對,可以形成異源核酸分子的雙鏈結(jié)構(gòu),這一過程稱作雜交.49、核酸分子雜交原理：互補(bǔ)的DN庫鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈,即能夠進(jìn)行雜交.這種結(jié)合是特異的,即嚴(yán)格根據(jù)堿基互補(bǔ)的原那么進(jìn)行,它不僅能在DN刷DN應(yīng)間進(jìn)行,也能在DN/WRN彷間進(jìn)行.因此,當(dāng)用一段基因的核酸序列作由探針,與變性后的單鏈基因組DNAS觸時,如果兩者的堿基完全配對,它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈,從而說明被測基因組DN卻含有的基因序列.50、雜交核酸分子的種類：液相雜交、固相雜交、原位雜交和基因芯片技術(shù).51、原位雜交：是應(yīng)用核酸探針與組織或細(xì)胞中的核酸按堿基互補(bǔ)配對原那么進(jìn)行特異性結(jié)合形成雜交體,然后應(yīng)用組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)法在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位的檢測技術(shù).52、試述Southern印記雜交的根本操作步驟：149頁53、簡述核酸分子雜交過程：包括核酸分子與固相介質(zhì)的結(jié)合、雜交和雜交后信號的檢測3個過程.而雜交又可分為預(yù)雜交、雜交和洗脫三個步驟.54、聚合酶鏈反響(PCR:一種在體外特異性地復(fù)制序列的DN盾段的重要技術(shù).55、PC反響原理及反響過程：(1)原理：P