方法學(xué)驗證方案

1、*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 1 頁 共 14 頁 含量測定含量測定方法學(xué)確認(rèn)方案方法學(xué)確認(rèn)方案日期：2016 年 1 月驗證方案審查與批準(zhǔn)驗證方案審查與批準(zhǔn)您下面的簽字表明您已審閱此份驗證方案并同意實施。您下面的簽字表明您已審閱此份驗證方案并同意實施。姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期起草人姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 2 頁 共 14 頁 審核人審核人姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期批準(zhǔn)人目錄目錄1.目的 42。范圍 43。驗證機(jī)構(gòu)與職責(zé) 44。定義 45。參考文件 56。風(fēng)險因素分析 57。驗證

2、準(zhǔn)備 58。檢測方法的描述 59。驗證實施 610。 偏差與變更 811。 確認(rèn)結(jié)果評定與結(jié)論 912。 確認(rèn)周期 9*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 3 頁 共 14 頁 13。 附錄目錄 91 1 目的目的對苦參膜中的含量測定檢測方法進(jìn)行確認(rèn)，確保方法的可行性，以便為有效控制苦參膜的含量提供依據(jù).2 2 范圍范圍本方案適用于本方案適用于* *藥業(yè)股份有限公司齊墩果酸片含量測定方法的確認(rèn)。藥業(yè)股份有限公司齊墩果酸片含量測定方法的確認(rèn)。3 3 驗證機(jī)構(gòu)與職責(zé)驗證機(jī)構(gòu)與職責(zé)3.1驗證小組成員姓 名所在部門在驗證中擔(dān)任職務(wù)簽名日期組長組員組員3.2 職責(zé)3.2.1 驗證小組組長職責(zé)

3、3.2.1.1保證確認(rèn)方案及各種檢查表的起草.3.2.1.2保證在執(zhí)行前完成對確認(rèn)方案及各種檢查表的審核和批準(zhǔn)。3.2.1.3負(fù)責(zé)對確認(rèn)小組成員進(jìn)行本方案的培訓(xùn)。3.2.1.4保證完全按照確認(rèn)方案實施。3.2.1.5確保能及時發(fā)現(xiàn)偏差，并按照已經(jīng)達(dá)成一致的偏差處理方法對其進(jìn)行記錄、糾正、調(diào)查和最終確認(rèn)。3.2.1.6確保確認(rèn)報告的生成、審核和批準(zhǔn)。3.2.2 QA 職責(zé)3.2.2.1執(zhí)行前完成對確認(rèn)方案及各種檢查表的審核。*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 4 頁 共 14 頁 3.2.2.2負(fù)責(zé)確認(rèn)過程的監(jiān)控和檢查，保證確認(rèn)方案的實施，參與確認(rèn)結(jié)果評價。3.2.2.3參與確認(rèn)偏

4、差的調(diào)查、處理、和評估。3.2.2.4確認(rèn)過程中,如有變更，保證按變更處理程序執(zhí)行.3.2.3 其它成員職責(zé)3.2.3.1執(zhí)行前確認(rèn)確認(rèn)方案已批準(zhǔn)，并經(jīng)過培訓(xùn)。3.2.3.2按確認(rèn)方案實施確認(rèn),收集、整理確認(rèn)數(shù)據(jù)，完成確認(rèn)記錄和報告。3.2.3.3參與確認(rèn)偏差的調(diào)查和處理，確認(rèn)通過偏差修訂和解決方案。3.2.3.4確認(rèn)確認(rèn)過程中的變更在實施前已經(jīng)批準(zhǔn)。4 4 定義定義4.1 線性：指在設(shè)計的范圍內(nèi),測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。4.2 準(zhǔn)確度：指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度,一般用回收率（%）表示。4.3 重復(fù)性：再規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品,用 6 個測

5、定結(jié)果進(jìn)行評價.4.4 中間精密度:在同一個實驗室,不同時間由不同分析人員或用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度。5 5 參考文件參考文件5.1藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010 年修訂版）5.2藥品生產(chǎn)驗證指南5.3中國藥典（2015 年版)二部5.4國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)5.5公司相關(guān)文件：5.5.1 苦參膜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢驗規(guī)程(）5.5.2 驗證管理（)5.5.3 變更控制操作規(guī)程(）5.5.4 偏差處理操作程序(）5.5.5 糾正措施與預(yù)防措施操作規(guī)程()*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 5 頁 共 14 頁 5.5.6 2016 年度驗證總計劃6 6 風(fēng)險

6、因素分析風(fēng)險因素分析風(fēng)險評估將采用失效模式及影響(FMEA）的工具來評估和衡量方法參數(shù)失效后對產(chǎn)品分析結(jié)果的影響。評估過程將參照公司質(zhì)量風(fēng)險管理的要求,風(fēng)險等級為低、中、高級別的必須給出合理的建議措施,之后再次對建議的風(fēng)險控制措施進(jìn)行評估以確保風(fēng)險的降低,分析、評估結(jié)果見附錄 1風(fēng)險評估表。7 7 驗證準(zhǔn)備驗證準(zhǔn)備7.1 確保所有方法 SOP 是最新版本且經(jīng)過批準(zhǔn)，將檢查結(jié)果記錄在附錄 2文件檢查內(nèi)。7.2 確認(rèn)參與驗證的人員都經(jīng)過此方案和相關(guān) SOP 的培訓(xùn),和識別所有簽字和草簽本方案任何數(shù)據(jù)表的人員.將檢查結(jié)果記錄在附錄 3培訓(xùn)檢查和簽名確認(rèn)內(nèi).7.3 確認(rèn)驗證過程中用到設(shè)備、計量儀器都是

7、經(jīng)過校驗,并在有效期內(nèi)，將檢查結(jié)果記錄在附錄 4確認(rèn)用儀器/儀表校準(zhǔn)檢查內(nèi)。8 8 檢測方法的描述檢測方法的描述8.18.1 藥品與試劑的準(zhǔn)備藥品與試劑的準(zhǔn)備*對照品（中國藥品生物制品檢定院提供）,（為*藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）；硅鎢酸試液、碘化汞鉀試液、苦味酸、氯仿、甲醇、濃氨、稀碘化鉍鉀試液、鹽酸液(0.2mol/L）、氫氧化鈉液（1mol/L）、氫氧化鈉滴定液（0。1mol/L)、硫酸滴定液（0。05mol/L)、甲基紅示液、磷酸、乙腈、無水乙醇。8 8。2 2 儀器分析條件儀器分析條件電子天平（FA2014)、超聲池（KQ-300DE）、電熱恒溫水浴鍋（DK981）、高效液相（LC10A

8、TVP)8.38.3 檢測方法檢測方法顯色鑒別、色譜鑒別、酸堿滴定法、高效液相色譜法*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 6 頁 共 14 頁 8.48.4 檢測操作檢測操作 8 8。4 4。1 1 鑒別鑒別8 8。4.1.14.1.1 顯色鑒別顯色鑒別：樣品連續(xù)三批,A、B 兩位組員各取樣品 1 號、樣品 2 號約 0.15g，分置三支試管中,加水 2ml 使溶解,分別加硅鎢酸試液、碘化汞鉀試液及苦味酸試液 12 滴，分別生成白色、淡黃色及黃色沉淀.8 8。4 4。1 1。2 2 薄層鑒別：薄層鑒別：樣品連續(xù)三批,A、B 兩位組員分別取本品 0.1g，加甲醇 10ml 使溶解，超

9、聲提取 15 分鐘，靜置，取上清液作為供試品溶液;另取苦參堿及氧化苦參堿對照品適量,加甲醇制成每 1ml 中各含 5mg 的溶液作為對照品溶液，照薄層色譜法（附錄 B）試驗,取上述三種溶液各 23l，分別點于同一以 0.5羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G 薄層板上，以三氯甲烷甲醇濃氨試液(5：0.6:0.3）為展開劑,展開，取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的兩個斑點。8.4.8.4.2 2。3 3 酸堿滴定法酸堿滴定法: :連續(xù)三批樣品，兩位組員分別取樣品 1、樣品 2，各 10 片，剪碎，取一片重兩份,各精密稱定，加氯仿 25ml 回流 3

10、 次,每次 1 小時，合并提取液，置水浴上揮干，殘渣用 0。2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過,濾液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml，搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次（25、20、10、10、10ml），每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過.合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液(0。05mol/L)10ml 及新沸過的冷水 20ml,振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴

11、上加熱,除去殘留的三氯甲烷,放冷至室溫，加甲基紅指示液 2 滴,用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定.每1ml 的硫酸液(0.05mol/L)相當(dāng)于 26。44mg 的 C15H24N2O2.本品每片含總生物堿以80。0%110.0。相對偏差(dr%）不得超過 0.6%計算公式：0043221100100100MmTCCVCCVCC1：硫酸滴定液的實際濃度（mol/L);C2：硫酸滴定液的理論濃度（mol/L）；*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 7 頁 共 14 頁 C3：氫氧化鈉滴定液的實際濃度（mol/L)； C4：氫氧化鈉滴定液的理論濃度（mol/L）;V1:加入硫酸

12、滴定液的體積(ml)； V2：消耗氫氧化鈉滴定液的體積（ml）；T ：標(biāo)示量(26.44mg）； ：該批 20 片苦參膜的平均重量（g）；M ：使用苦參膜的量（g）。8 8。4.24.2 。4 4 高效液相色譜法高效液相色譜法8.4。2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:用氨基鍵合硅膠為填充劑：以乙腈無水乙醇3磷酸溶液(85:7。5:7。5）為流動相；柱溫 30，檢測波長為 220nm，流速 1。0mlmin，理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計算，應(yīng)不低于 5000。6.2。2 對照品溶液的制備： 取*對照品適量，精密稱定，置同一量瓶中，加乙腈無水乙醇（85：15）制成每 1ml 含苦參堿 0.32m

13、g 和氧化苦參堿 35g 的溶液，搖勻，即得。8.4.2。2 供試品溶液的制備： 取已剪碎的樣品約 0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,加濃氨水 0。5ml，精密加入三氯甲烷 25ml,稱定重量,超聲處理 30 分鐘，放冷,加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量,濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml,水浴上揮干,用乙腈無水乙醇（85：15）定溶至25ml 量瓶中,搖勻，用 0.45m 濾膜濾過,即得.6.2.4 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510l，注入高效液相色譜儀，測定，即得.本品每片含*不得少于 22.0 mg。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過 2。計算公式:221AAA樣品平均片重稀釋倍數(shù)樣品稱量

14、對照品平均峰面積對照品濃度樣品峰面積gmgC/: 對照品進(jìn)兩針的平均峰面積;： 對照品第一針峰面積；*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 8 頁 共 14 頁 : 對照品第二針峰面積.9 9 驗證實施驗證實施9.19.1 線性實驗線性實驗?zāi)康?在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度應(yīng)符合規(guī)定。9.1.19.1.1 滴定法滴定法9.1.1。1 實驗過程同一人同時取同一批樣品，各 10 片,剪碎，取一片重樣品 1、樣品 2、樣品 3、樣品 4、樣品 5，各精密稱定，加氯仿 25ml 回流 3 次,每次 1 小時,合并提取液，置水浴上揮干，殘渣用 0。2mol/L

15、 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器,洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml,搖勻,用三氯甲烷振搖提取 5 次(25、20、10、10、10ml)，每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌,再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L)10ml 及新沸過的冷水 20ml，振搖提取后，分取酸層,氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml,合并酸液與洗滌液,置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫,加甲基紅指示液 2 滴，用氫氧

16、化鈉滴定液（0。1mol/L）滴定。每 1ml 的硫酸液(0.05mol/L)相當(dāng)于 26.44mg 的 C15H24N2O2。本品每片含總生物堿以氧化苦參堿（C15H24N2O）計，應(yīng)為標(biāo)示量的 80。0%110。0。相對偏差（dr%)不得超過 0。6。9.1。1.2 以樣品滴定過程中消耗氫氧化鈉的體積為橫坐標(biāo)，以樣品含量為縱坐標(biāo),繪制回歸方程。9。1。1。3 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) dr0.6%）。9。1。1.4 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定線性實驗記錄內(nèi)，見附錄.9 9。1 1。2 2 高效液相高效液相9。1。2。1 對照品配制：取*一瓶精密稱取置 25ml 容量瓶中、*對照品兩瓶

17、精密稱取置 50ml 量瓶中，加乙腈：無水乙醇（85：15)溶解至刻度.分別精密量取氧化苦參堿0。5ml、苦參堿 5ml;氧化苦參堿 1ml、苦參堿 10ml；氧化苦參堿 2ml、苦參堿 20ml,分別*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 9 頁 共 14 頁 置 25ml 容量瓶中,加乙腈：無水乙醇（85：15）至刻度。既得。9。1。2。2 樣品制備：取已剪碎的樣品約 0。6g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水0。5ml,精密加入三氯甲烷 25ml，稱定重量，超聲處理 30 分鐘，放冷,加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過,精密吸取續(xù)濾液 5ml，水浴上揮干，用乙腈-無水乙醇(85：1

18、5）定溶至 25ml量瓶中,搖勻，用 0。45m 濾膜濾過,即得。9。1.2.3 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510l,注入高效液相色譜儀,測定,即得。本品每片,不得少于 22。0 mg。9。1。2。4 以對照品的吸取量（峰面積)為橫坐標(biāo),以樣品含量（峰面積）為縱坐標(biāo)，繪制回歸方程9。1.2。5 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) RSD2%）。9。1。2。6 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*高效含量測定線性實驗記錄內(nèi),見附錄 5.9 9。2 2 重復(fù)性實驗重復(fù)性實驗?zāi)康模涸谝?guī)定范圍內(nèi)，取同一批次的樣品品，用 5 個測定結(jié)果進(jìn)行評價，得到的結(jié)果 RSD應(yīng)符合要求.9 9。2.12.1 滴定

19、法：滴定法：9。2.1.1 實驗過程取同一批樣品,10 片，剪碎，取一片重樣品 1、樣品 2、樣品 3、樣品 4、樣品 5 各精密稱定，加氯仿 25ml 回流 3 次,每次 1 小時，合并提取液,置水浴上揮干,殘渣用 0.2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml，搖勻,用三氯甲烷振搖提取 5 次(25、20、10、10、10ml)，每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過.合并三氯甲烷液，精密加硫

20、酸滴定液(0.05mol/L)10ml 及新沸過的冷水 20ml，振搖提取后，分取酸層,氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液 2 滴,用氫氧化鈉滴定液（0。1mol/L)滴定.每 1ml 的硫酸液（0.05mol/L）相當(dāng)于 26。44mg 的 C15H24N2O2.*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 10 頁 共 14 頁 本品每片含總生物堿以*80。0110。0%。相對偏差（dr%)不得超過0。6。9。1。1。2 可接受標(biāo)準(zhǔn)(相關(guān)系數(shù) dr0。6%)。9。1.1。3 記錄：將實驗結(jié)果

21、記錄在滴定含量測定重復(fù)性實驗記錄內(nèi),見附錄5。9 9。2 2。2 2 高效高效9。2。2 實驗過程9。1。2。1 對照品配制:對照品溶液的制備： 取苦參堿、氧化苦參堿對照品母液適量，置同一量瓶中,加乙腈無水乙醇（85：15）制成每 1ml 含苦參堿 0。32mg 和氧化苦參堿35g 的溶液，搖勻，即得。9。1。2。2 樣品制備：取同一批樣品 10 片，剪碎并分別取樣品 1、樣品 2、樣品 3、樣品4、樣品 5 約 0。6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水 0。5ml，精密加入三氯甲烷25ml,稱定重量,超聲處理 30 分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml,水浴上

22、揮干，用乙腈-無水乙醇（85：15）定溶至 25ml 量瓶中，搖勻，用 0。45m濾膜濾過，即得.9.1。2。3 測定法: 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510l，注入高效液相色譜儀,測定，即得。本品每片含苦參總堿以苦參堿(C15H24N2O)與氧化苦參堿（C15H24N2O2)的總量計，不得少于 22。0 mg。9。1。2.4 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) RSD2).9。1。2。5 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*高效含量測定重復(fù)性實驗記錄內(nèi)，見附錄5.9.39.3 中間精密度實驗中間精密度實驗9。3.1 目的：含量測定中,一個實驗室內(nèi)不同的人、在不同時間（通常是不同天）測定得到的結(jié)果 RS

23、D 應(yīng)符合要求。9 9。3.13.1 滴定含量滴定含量9。3。1.1 實驗過程*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 11 頁 共 14 頁 9.3。1.2 兩名實驗人員分別在不同時間（通常是不同天）各取同一批號苦參膜 10 片,精密稱定，剪碎，各精密稱取本品 3 份（每份約 0.6g)，加氯仿 25ml 回流 3 次,每次 1 小時，合并提取液，置水浴上揮干,殘渣用 0.2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解,濾過，濾液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液5ml，搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次（25、20、

24、10、10、10ml),每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌,再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液(0。05mol/L）10ml 及新沸過的冷水 20ml，振搖提取后,分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml,合并酸液與洗滌液,置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液 2 滴,用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L)滴定.每 1ml 的硫酸液（0。05mol/L）相當(dāng)于 26。44mg 的 C15H24N2O2。9。3.1。3 可接受標(biāo)準(zhǔn)（同一人實驗結(jié)果 RSD2。0；兩人間的 RSD2

25、。0%)9.3.1。4 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定中間精密實驗記錄內(nèi),見附錄 5。9 9。3.23.2 高效高效9。3。2.1 兩名實驗人員用同一批對照品分別在不同時間（通常是不同天)各取同一批號苦參膜 10 片,精密稱定，剪碎，各精密稱取本品 3 份（每份約 0。6g),置具塞錐形瓶中，加濃氨水 0。5ml,精密加入三氯甲烷 25ml，稱定重量,超聲處理 30 分鐘,放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量,濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml，水浴上揮干，用乙腈無水乙醇(85:15）定溶至25ml 量瓶中，搖勻,用 0.45m 濾膜濾過，即得.9.3。2。2 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l

26、與供試品溶液 510l,注入高效液相色譜儀，測定，即得.本品每片含苦參總堿以苦參堿(C15H24N2O）與氧化苦參堿(C15H24N2O2）的總量計,不得少于 22。0 mg。9。3.2。3 可接受標(biāo)準(zhǔn)(同一人實驗結(jié)果 RSD2.0;兩人間的 RSD2.0)。9。3。2。4 記錄:將實驗結(jié)果記錄在*高效含量測定中間精密度實驗記錄內(nèi)，見附5.9 9。4 4 含量測定準(zhǔn)確度實驗含量測定準(zhǔn)確度實驗*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測定方法學(xué)確認(rèn)第 12 頁 共 14 頁 9.4。1 目的：含量測定中,用已確定的方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，得到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合

27、要求。9。4。2 實驗過程精密稱取同一已知含量的供試品 9 份（每份約 0。6g），分別置于圓底燒瓶中，分成三組，分別向第一組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的氧化苦參堿對照品 2 ml;向第二組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的氧化苦參堿對照品 5ml；向第三組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml)的氧化苦參堿對照品 7 ml.加氯仿 25ml 回流 3 次，每次 1 小時，合并提取液，置水浴上揮干,殘渣用 0。2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器,洗液并入分液漏斗中,加氯化鈉約 6g 與1mol/L 氫氧化鈉液

28、 5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次（25、20、10、10、10ml），每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0。05mol/L)10ml 及新沸過的冷水 20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液 2滴,用氫氧化鈉滴定液（0。1mol/L）滴定.每 1ml 的硫酸液(0.05mol/L）相當(dāng)于 26.44mg的 C15H24N2O2.9。4。2。1 測定法將

29、測得的總含量減去供試品中已知含量,計算每組的回收率.9.4。2。2 可接受標(biāo)準(zhǔn)（實驗結(jié)果回收率 98。0102.0)。9.4。2.3 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定準(zhǔn)確度實驗記錄內(nèi)，見附錄8。9 9。4 4。3 3 高效高效9。4。3。1 對照品制備：對照品溶液的制備： 取苦參堿、氧化苦參堿對照品母液適量，置同一量瓶中，加乙腈-無水乙醇（85：15）制成每 1ml 含苦參堿 0.32mg 和 35g 的溶液，搖勻,即得。9.4。3。2 供試品制備:精密稱取同一已知含量的供試品 9 份(每份約 0.6g），置具塞錐形瓶中,加濃氨水 0。5ml,精密加入三氯甲烷 25ml,稱定重量，超聲處理 30 分鐘,放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，*藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)*含量測