原核真核啟動子及BL21相關(guān)知識

1、感受態(tài)BL21、BL21(DE3)及BL21(DE3)pLysSBL21沒有T7RNA聚合酶基因，因此不能表達(dá)T7啟動子控制的目的基因，但是可以表達(dá)大腸桿菌啟動子lac、tac、trc及trp控制的基因。BL21(DE3)是入DE3溶原菌，帶有T7RNA聚合酶，可用于表達(dá)T7啟動子控制的目的基因，也可以表達(dá)大腸桿菌啟動子lac、tac、trc及trp控制的基因。BL21(DE3pLysS含有pLysS質(zhì)粒，一種與pET共存的表達(dá)T7裂解酶的質(zhì)粒，可以減少目的基因的本底表達(dá)，提供更嚴(yán)緊的控制。真核原核啟動子原核：幾個常用的啟動子和誘導(dǎo)調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)1.最早應(yīng)用于的表達(dá)系統(tǒng)的是Lac乳糖操縱子，由啟

2、動子lacP+操縱基因lacO+結(jié)構(gòu)基因組成。其轉(zhuǎn)錄受CAP正調(diào)控和lacI負(fù)調(diào)控。1.1 acUV5突變能夠在沒有CAP勺存在下更有效地起始轉(zhuǎn)錄，該啟動子在轉(zhuǎn)錄水平上只受lacI的調(diào)控，因而隨后得到了更廣泛采用。lacI產(chǎn)物是一種阻遏蛋白，能結(jié)合在操縱基因lacO上從而阻遏轉(zhuǎn)錄起始。乳糖的類似物IPTG可以和lacI產(chǎn)物結(jié)合，使其構(gòu)象改變離開lacO,從而激活轉(zhuǎn)錄。這種可誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控成為了大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)載體構(gòu)建的常用元件。.tac啟動子是trp啟動子和lacUV5的拼接雜合啟動子，且轉(zhuǎn)錄水平更高，比lacUV5更優(yōu)越。.trc啟動子是trp啟動子和lac啟動子的拼合啟動子，同樣具有比tr

3、p更高的轉(zhuǎn)錄效率和受lacI阻遏蛋白調(diào)控的強(qiáng)啟動子特性。.在常規(guī)的大腸桿菌中，lacI阻遏蛋白表達(dá)量不高，僅能滿足細(xì)胞自身的lac操縱子，無法應(yīng)付多拷貝的質(zhì)粒的需求，導(dǎo)致非誘導(dǎo)條件下較高地表達(dá)，為了讓表達(dá)系統(tǒng)嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控產(chǎn)物表達(dá)，能過量表達(dá)lacI阻遏蛋白的lacIq突變菌株常被選為Lac/Tac/trc表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)菌株?，F(xiàn)在的Lac/Tac/trc載體上通常還帶有l(wèi)acIq基因，以表達(dá)更多l(xiāng)acI阻遏蛋白實(shí)現(xiàn)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼T導(dǎo)調(diào)控。6.IPTG廣泛用于誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，但是IPTG有一定毒性，有人認(rèn)為在制備醫(yī)療目的的重組蛋白并不合適，因而也有用乳糖代替IPTG作為誘導(dǎo)物的研究。另外一種研究方向是用lacI

4、的溫度敏感突變體，30c下抑制轉(zhuǎn)錄，42c開始發(fā)揮作用。熱誘導(dǎo)不用添加外來的誘導(dǎo)物，成本低，但是由于發(fā)酵過程中加熱升溫比較慢而影響誘導(dǎo)效果，而且熱誘導(dǎo)本身會導(dǎo)致大腸桿菌的熱休克蛋白激活，一些蛋白酶會影響產(chǎn)物的穩(wěn)定。7.以入噬菌體轉(zhuǎn)錄啟動子PL、PR構(gòu)建的載體也為大家所熟悉。這兩個強(qiáng)啟動子受控于入噬菌體cI基因產(chǎn)物。cI基因的溫度敏感突變體cI857(ts)常常被用于調(diào)控PL、PR啟動子的轉(zhuǎn)錄。同樣也是30c下阻遏啟動子轉(zhuǎn)錄，42c下解除抑制開始轉(zhuǎn)錄。同樣的，PL、PR表達(dá)載體需要以cI857(ts)作為表達(dá)菌株，現(xiàn)在更常見的做法是在載體上攜帶cI857(ts)基因，所以可以有更大的宿主選擇范圍

5、。另外一種思路是通過嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控cI產(chǎn)物來間接調(diào)控PL、PR啟動子的轉(zhuǎn)錄。比如Invitrogen的PL表達(dá)系統(tǒng)，就是將受trp啟動子嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控的cI基因溶源化到宿主菌染色體上，通過加入酪氨酸誘導(dǎo)抑制trp啟動子，抑制cl基因的表達(dá)，從而解除強(qiáng)大的PL啟動子的抑制。8.T7啟動子是當(dāng)今大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的主流，這個功能強(qiáng)大兼專一性高的啟動子經(jīng)過巧妙的設(shè)計而成為原核表達(dá)的首選，尤其以Novagen公司的pET系統(tǒng)為杰出代表。強(qiáng)大的T7啟動子完全專一受控于T7RNA聚合酶，而高活性的T7RNA聚合酶合成mRNA勺速度比大腸桿菌RNA聚合酶快5倍一一當(dāng)二者同時存在時，宿主本身基因的轉(zhuǎn)錄競爭不過T7表達(dá)系統(tǒng)，

6、幾乎所有的細(xì)胞資源都用于表達(dá)目的蛋白；誘導(dǎo)表達(dá)后僅幾個小時目的蛋白通?？梢哉嫉郊?xì)胞總蛋白的50%±o由于大腸本f菌本身不含T7RNA聚合酶，需要將外源的T7RNA聚合酶引入宿主菌，因而T7RNA聚合酶的調(diào)控模式就決定了T7系統(tǒng)的調(diào)控模式一一非誘導(dǎo)條件下，可以使目的基因完全處于沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄，從而避免目的基因毒性對宿主細(xì)胞以及質(zhì)粒穩(wěn)定性的影響；通過控制誘導(dǎo)條件控制T7RNA聚合酶的量，就可以控制產(chǎn)物表達(dá)量，某些情況下可以提高產(chǎn)物的可溶性部分。有幾種方案可用于調(diào)控T7RNA聚合酶的合成，從而調(diào)控T7表達(dá)系統(tǒng)。1.噬菌體DE3是lambda噬菌體的衍生株，含有l(wèi)acI抑制基因和位于lac

7、UV5啟動子下的T7RNA聚合酶基因。DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)就是最常用的表達(dá)菌株，構(gòu)建好的表達(dá)載體可以直接轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株中，誘導(dǎo)調(diào)控方式和lac一樣都是IPTG誘導(dǎo)。2.另一種策略是用不含T7RNA聚合酶的宿主菌克隆目的基因，即可完全避免因目的蛋白對宿主細(xì)胞的潛在毒性而造成的質(zhì)粒不穩(wěn)定。然后用入CE6噬菌體侵染宿主細(xì)胞一一CE6是lambda噬菌體含溫度敏感突變(cI857ts)和pL/pR啟動子控制T7RNA聚合酶表達(dá)的衍生株，在熱誘導(dǎo)條件下可以激活T7RNA聚合酶的合成。此了噬菌體之外，還可以通過共轉(zhuǎn)化質(zhì)粒提供T7RNA聚合酶。比如有人用受溶氧濃度控制的啟動子調(diào)控T7RNA聚

8、合酶合成，據(jù)說這比較適合工業(yè)化發(fā)酵的條件控制。由于T7RNA聚合酶的調(diào)控方式仍有可能有痕量的本底表達(dá)，控制基礎(chǔ)表達(dá)的手段之一是培養(yǎng)基外加葡萄糖，有助于控制本底表達(dá)水平；之二是采用帶有T7lac啟動子的載體一一在緊鄰T7啟動子的下游有一段lacI操縱子序列編碼表達(dá)lac阻遏蛋白(lacI),lac阻遏蛋白可以作用于宿主染色體上T7RNA聚合酶前的lacUV5啟動子并抑制其表達(dá)，也作用于載體T7lac啟動子，以阻斷任何T7RNA聚合酶導(dǎo)致的目的基因轉(zhuǎn)錄。pLacI工轉(zhuǎn)化也是同樣的原理。如果這還不夠，更為嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控手段還有在宿主菌中表達(dá)另一個可以結(jié)合并抑制T7RNA聚合酶的基因一一T7溶菌酶基因，降低

9、本底。常用的帶溶菌酶質(zhì)粒有pLysS和pLysE,相容的ori都不會影響后繼的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，前者表達(dá)的溶菌酶的水平要比后者低得多，對細(xì)胞生長影響小，而pLysE會明顯降低宿主菌的生長水平，容易出現(xiàn)過度調(diào)節(jié)，增加蛋白表達(dá)的滯后時間，從而降低表達(dá)水平。通過幾種不同方法來工5妙調(diào)控T7聚合酶合成，T7啟動子發(fā)展出了史上功能最強(qiáng)大，最豐富的表達(dá)系統(tǒng)。真核：真核表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展自上世紀(jì)70年代基因工程技術(shù)誕生以來，基因表達(dá)技術(shù)已滲透到生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域。并隨著人類基因組計劃實(shí)施的進(jìn)行，在技術(shù)方法上得到了很大發(fā)展，時至今日已取得令人矚目的成就。在各種表達(dá)系統(tǒng)中，最早被采用進(jìn)行研究的是原核表達(dá)系統(tǒng)，這

10、也是目前掌握最為成熟的表達(dá)系統(tǒng)。該項技術(shù)的主要方法是將已克隆入目的基因DNA片段的載體(一般為質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化細(xì)菌（通常選用的是大腸桿菌），通過IPTG誘導(dǎo)并最終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點(diǎn)在于能夠在較短時間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，而且所需的成本相對比較低廉。但與此同時原核表達(dá)系統(tǒng)還存在許多難以克服的缺點(diǎn)：如目的蛋白常以包涵體形式表達(dá)，導(dǎo)致產(chǎn)物純化困難；而且原核表達(dá)系統(tǒng)翻譯后加工修飾體系不完善，表達(dá)產(chǎn)物的生物活性較低。因此，利用真核表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)目的蛋白越來越受到重視。目前，基因工程研究中常用的真核表達(dá)系統(tǒng)有酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。.酵母表達(dá)系統(tǒng)最早應(yīng)用于基因工程的酵母是

11、釀酒酵母后來人們又相繼開發(fā)了裂殖酵母、克魯維酸酵母、甲醇酵母等，其中，甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣泛的酵母表達(dá)系統(tǒng)。目前甲醇酵母主要有HPolymorpha,CandidaBodini,PichiaPastris3種。以PichiaPastoris應(yīng)用最多。甲醇酵母的表達(dá)載體為整合型質(zhì)粒，載體中含有與酵母染色體中同源的序列，因而比較容易整合入酵母染色體中。大部分甲醇酵母的表達(dá)載體中都含有甲醇酵母醇氧化酶基因一1（A0x1）,在該基因的啟動子（PAXOI）作用下，外源基因得以表達(dá)。PAXOI是一個強(qiáng)啟動子，在以葡萄糖或甘油為碳源時。甲醇酵母中AOx1基因的表達(dá)受到抑制，而在以甲醇為唯一碳源時P

12、AXOI可被誘導(dǎo)激活，因而外源基因可在其控制下表達(dá)，將目的基因多拷貝整合入酵母染色體后可以提高外源蛋白的表達(dá)水平及產(chǎn)量。此外甲醇酵母的表達(dá)載體都為E.coli/PichiaPastoris的穿梭載體，其中含有E.coli復(fù)制起點(diǎn)和篩選標(biāo)志，可在獲得克隆后采用E.coli細(xì)胞大量擴(kuò)增.目前，將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入酵母菌的方法主要有原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法、電擊法及氯化鋰法等。甲醇酵母一般先在含甘油的培養(yǎng)基中生長。培養(yǎng)至高濃度。再以甲醇為碳源。誘導(dǎo)表達(dá)外源蛋白。這樣可以大大提高表達(dá)產(chǎn)量。利用甲醇酵母表達(dá)外源性蛋白質(zhì)其產(chǎn)量往往可達(dá)克級。與釀酒酵母相比其翻譯后的加工更接近哺乳動物細(xì)胞，不會發(fā)生超糖基化。利用PAXOI表

13、達(dá)外源蛋白時，一般需很長時間才能達(dá)到峰值水平，而甲醇是高毒性、高危險性化工產(chǎn)品。使得實(shí)驗(yàn)操作過程中存在不小的危害性。且不宜于食品等蛋白生產(chǎn)。因此那些不需要甲醇誘導(dǎo)的啟動子受到青睞包括GAPFLD1、PEX8YPTI等多種。利用三磷酸甘油醛脫氫酶（GAP）啟動子代替PAXOI,不需要甲醇誘導(dǎo)。培養(yǎng)過程中無需更換碳源，操作更為簡便，可縮短外源蛋白到達(dá)峰值水平的時間。酵母表達(dá)系統(tǒng)作為一種后起的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，由于兼具原核以及真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，正在基因工程領(lǐng)域中得到日益廣泛的應(yīng)用。.昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣的昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)通常采用目宿銀紋夜蛾桿狀病毒（AcNPV）作

14、為表達(dá)載體。在AcNPVgj染昆蟲細(xì)胞的后期，核多角體基因可編碼產(chǎn)生多角體蛋白，該蛋白包裹病毒顆粒可形成包涵體。核多角體基因啟動子具有極強(qiáng)的啟動蛋白表達(dá)能力，故常被用來構(gòu)建桿狀病毒傳遞質(zhì)粒。克隆入外源基因的傳遞質(zhì)粒與野生型AcNPV共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后可發(fā)生同源重組，重組后多角體基因被破壞，因而在感染細(xì)胞中不能形成包涵體，利用這一特點(diǎn)可挑選出含重組桿狀病毒的昆蟲細(xì)胞但效率比較低，且載體構(gòu)建時間長，一般需要46周。此外，昆蟲細(xì)胞不能表達(dá)帶有完整N聯(lián)聚糖的真核糖蛋白。在病毒感染晚期，由于大量外源蛋白的表達(dá)引起昆蟲細(xì)胞的裂解，胞質(zhì)內(nèi)的物質(zhì)釋放出來，與目的蛋白混在一起，從而使蛋白的純化工作變得很困難，另外

15、水解酶的釋放會降解重組蛋白。為了克服以上這些困難，科學(xué)工作者先后嘗試用絲蛾肌動蛋白基因啟動子或桿狀病毒ie-1基因啟動子表達(dá)外源蛋白，但效果都不明顯。Farrel等介紹了一種新型的鱗翅目昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要包括3個調(diào)節(jié)外源蛋白表達(dá)序列：（1）Bombyxmori的肌動蛋白基因啟動子；（2）Bombyxmori的核型多角體病毒（BmNPV兩立早基因ie-1（編碼俄IE-1蛋白，該蛋白是種轉(zhuǎn)錄激活因子，可在體外激活肌動蛋白基因啟動子）；（3）BmNPV的同源重復(fù)序列3（HR3）可作為肌動蛋白基因啟動子的增強(qiáng)子。三者協(xié)同作用，可使轉(zhuǎn)錄活性提高1000倍以上，從而大大地提高外源蛋白的表達(dá)水平。

16、另外目前還有一種新型的宿主范圍廣的雜合核多角體病毒（HyNPV）被應(yīng)用于昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建，該病毒由AcNPV及Bni'qP發(fā)展而來。一般情況下桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)所能表達(dá)的外源蛋白只有少部分是分泌性的，大部分為非分泌性。為了解決這個問題將Hsp70（熱休克蛋白70）與外源蛋白共表達(dá)可明顯提高重組蛋白的分泌水平，這是因?yàn)榉置谛远嚯谋环g后必須到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行加工才能被分泌至胞外。如果到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)前，前體多肽就伸展開來，暴露出疏水殘基，殘基間的相互作用可引起多肽的凝聚，這對最終的表達(dá)水平有很大影響。而Hsp70是一種分子伴侶，能夠與新翻譯的多肽結(jié)合，抑制前體肽的凝聚使前體肽順利到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行

17、加工，從而提高蛋白的分泌水平。最近，人們又構(gòu)建了桿狀病毒-S2表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)能將重組桿狀病毒轉(zhuǎn)染果蠅S2細(xì)胞，以前人們認(rèn)為桿狀病毒僅能在鱗翅目昆蟲細(xì)胞（如sf9、sf21）中復(fù)制，不能在其他昆蟲細(xì)胞（如果蠅細(xì)胞）中復(fù)制，然而目前研究表明在一定條件下，桿狀病毒也能感染果蠅細(xì)胞。在果蠅細(xì)胞中，桿狀病毒的多角體基因啟動子幾乎不發(fā)生作用。桿狀病毒-S2表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)載體利用的是果蠅啟動子如Hsp70啟動子、肌動蛋白5c啟動子、金屬硫蛋白基因啟動子等，其中，Hsp70啟動子的作用最強(qiáng)。重組桿狀病毒感染S2細(xì)胞后不會引起宿主細(xì)胞的裂解，且蛋白表達(dá)水平與鱗翅目細(xì)胞相似，因此，桿狀病毒-S2系統(tǒng)是一個很有應(yīng)

18、用前景的昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，特別是桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)由于其操作安全，表達(dá)量高，目前與酵母表達(dá)系統(tǒng)一樣被廣泛應(yīng)用于基因工程的各個領(lǐng)域中。.哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)由哺乳動物細(xì)胞翻譯后再加工修飾產(chǎn)生的外源蛋白質(zhì)，在活性方面遠(yuǎn)勝于原核表達(dá)系統(tǒng)及酵母、昆蟲細(xì)胞等真核表達(dá)系統(tǒng)，更接近于天然蛋白質(zhì)。哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體包含原核序列、啟動子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記基因、終止子和多聚核甘酸信號等。將外源基因?qū)氩溉閯游锛?xì)胞主要通過2類方法：一是感染性病毒顆粒感染宿主細(xì)胞，二是通過脂質(zhì)體法、顯微注射法、磷酸鈣共沉淀法及DEA1葡聚糖法等非病毒載體的方式將基因?qū)氲郊?xì)胞中。外源基因的體外表達(dá)一般采用質(zhì)粒表達(dá)載

19、體，如將重組質(zhì)粒導(dǎo)入CHO細(xì)胞可建立高效穩(wěn)定的表達(dá)系統(tǒng)，而利用COSffl胞可建立瞬時表達(dá)系統(tǒng)。目前，病毒載體已成為動物體內(nèi)表達(dá)外源基因的有力工具，在臨床基因治療的探索中也發(fā)揮了重要作用。痘苗病毒由于其基因的分子量相當(dāng)大（約187kb）,利用它作為載體可同時插入幾種外源基因，從而構(gòu)建多價疫苗。另外，逆轉(zhuǎn)錄病毒感染效率高，某些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系也可通過其導(dǎo)入外源基因，但要注意的是逆轉(zhuǎn)錄病毒可整合入宿主細(xì)胞染色體，具有潛在的危險性。由于腺病毒易于培養(yǎng)、純化，宿主范圍廣，故采用該類病毒構(gòu)建的載體被廣泛應(yīng)用腺病毒載體的構(gòu)建依賴于腺病毒穿梭質(zhì)粒和包裝載體之間的同源重組。但是哺乳動物細(xì)胞內(nèi)的這種同源重組效率很

20、低，利用細(xì)菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建重組體效率會大大提高，即將外源基因插入到腺病毒穿梭質(zhì)粒中，形成轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，將其線性化后與腺病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化大腸埃希菌。另一種方法是通過CrelaxP系統(tǒng)構(gòu)建重組腺病毒載體，在轉(zhuǎn)移質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒中都插入laxP位點(diǎn)，然后將兩個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染表達(dá)Cre重組酶的哺乳動物細(xì)胞，通過Cre介導(dǎo)兩個laxP位點(diǎn)之間的DNA發(fā)生重組，可獲得重組腺病毒，這種重組效率比一般的細(xì)胞內(nèi)同源效率高30倍。最近，人們在桿狀病毒中插入巨細(xì)胞病毒的啟動子建立了高效的基因轉(zhuǎn)移載體。由于桿而且載體的構(gòu)建容易，因但當(dāng)表達(dá)產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性哺乳動物細(xì)胞中用到的誘還有重金屬、糖皮質(zhì)激狀病毒是昆蟲病毒，在哺乳動物

21、細(xì)胞中不會引起病毒基因的表達(dá),而利用桿狀病毒進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移為我們提供了很好的途徑。利用哺乳動物細(xì)胞表達(dá)外源基因時，大多數(shù)情況下不需要誘導(dǎo)，時應(yīng)采取誘導(dǎo)，這樣可避免表達(dá)產(chǎn)物產(chǎn)生早期就對細(xì)胞產(chǎn)生影響。導(dǎo)型載體主要與啟動子有關(guān)如熱休克蛋白啟動子可在高溫下被誘導(dǎo),素誘導(dǎo)的啟動子。但這些系統(tǒng)存在一些共同的缺陷，如誘導(dǎo)表達(dá)特異性差；當(dāng)系統(tǒng)處于關(guān)閉狀態(tài)時表達(dá)有泄漏誘導(dǎo)劑本身有毒性，常對細(xì)胞造成損傷等。為此，Gossen等構(gòu)建了受四環(huán)素負(fù)調(diào)節(jié)的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)由調(diào)節(jié)質(zhì)粒和反應(yīng)質(zhì)粒組成。調(diào)節(jié)質(zhì)粒中具有編碼轉(zhuǎn)錄激活因子(fIA)的序列，在沒有四環(huán)素或強(qiáng)力毒素存在的情況下tTA可引起下游目的基因表達(dá)。隨后Gossen等又對tTA的氨基酸序列進(jìn)行了改造，構(gòu)建了受四環(huán)素正調(diào)節(jié)的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)在沒有四環(huán)素的情況下啟動子不被激活，而在加入四環(huán)素或強(qiáng)力毒素后目的基因高效表達(dá)。四環(huán)素誘導(dǎo)的基因表達(dá)系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣泛的哺乳動物細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有嚴(yán)密、高效可控制性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。外源蛋白的表達(dá)會對哺乳動物細(xì)胞產(chǎn)生不利影響，因此利用哺乳動物細(xì)胞表