益生菌檢測方法

1、附錄A（規(guī)范性附錄）測定用培養(yǎng)基A.1生化試驗培養(yǎng)基蛋白月東10g;牛肉膏10g;酵母膏3g；葡萄糖10g;KHPO2g;NaCl1g;瓊脂20g;蒸儲水1000ml;PH值6.6-6.8。A.2麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基12°Be麥芽汁1000mlKHPO2g;瓊脂15g(A.3MRS瓊脂培養(yǎng)基：酪蛋白月東10.0g牛肉浸膏10.0g酵母浸膏5.0g;葡萄糖5.0g;乙酸鈉5.0g;檸檬酸二胺2.0g;Tween801.0g&HPO2.0g;MgSO7H2O0.2g;MnSOH2O0.05gCaCO20.0g;瓊脂15.0g蒸儲水1000mlPH6.8。A.4LB培養(yǎng)基：胰蛋白月東1

2、0g;葡萄糖5g;酵母浸出物5g;氯化鈉10g;瓊脂20g；蒸儲水1000ml;pH7.0附錄B（規(guī)范性附錄）嗜酸乳酸菌活菌檢測方法材料儀器恒溫培養(yǎng)箱、厭氧罐、超凈工作臺、分析天平、恒溫水浴鍋、勻漿器、可調(diào)式移液器、便攜式高壓滅菌鍋、pH電極、酒精燈及常規(guī)玻璃儀器培養(yǎng)基：MR甌脂培養(yǎng)基（A.3）方法：采用活菌平板計數(shù)法樣品處理：稱取1ml樣品溶于99ml滅菌生理鹽水中，充分震蕩搖勻，搖勻后依次稀釋至一定濃度B2.2平板制備與培養(yǎng)：將附錄A的培養(yǎng)基于三角瓶中滅菌（15磅、15分鐘），培養(yǎng)基冷卻至50c左右，取0.1ml稀釋好的樣品于滅菌平皿中，傾注培養(yǎng)基，搖勻，凝固后置于厭氧罐。每個樣品應(yīng)不少于

3、3個平板，于恒溫培養(yǎng)箱中37c培養(yǎng)72小時。計數(shù)：用計數(shù)器計算菌落數(shù)，有效計數(shù)范圍30-300個菌落。每ml樣品中含乳酸菌數(shù)量=每個平板平均菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)x10（cfu）菌落形態(tài)：菌落圓形、白色、周圍有透明圈。不符合上述形態(tài)特征的為雜菌并計數(shù)。判定標(biāo)準(zhǔn)：每個稀釋樣至少3個平板，每個平板中菌落均勻，有效計數(shù)范圍為30-300個。雜菌計數(shù)雜菌率按公式（1）計算：M=1X100(1)n1n式中：M樣品雜菌率，%n1雜菌數(shù)，億/g;附錄C（規(guī)范性附錄）產(chǎn)骯假絲酵母菌檢測方法C.1材料：C1.1儀器恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、分析天平、恒溫水浴鍋、勻漿器、可調(diào)式移液器、便攜式高壓滅菌鍋、pH電極、接種針、

4、涂布棒、酒精燈及常規(guī)玻璃儀器C1.2培養(yǎng)基：麥芽汁瓊脂（A.2）C.2方法：采用活菌平板計數(shù)法C2.1平板制備：將上述培養(yǎng)基于三角瓶中滅菌（10磅、20分鐘），倒于滅菌平皿中，凝固后備用C2.2樣品處理：稱取1ml樣品溶于99ml滅菌生理鹽水中，充分震蕩搖勻，搖勻后依次稀釋至一定濃度。C2.3涂布平板：取0.1ml稀釋好的樣品均勻涂布于平板中，每個樣品應(yīng)不少于3個平板，于恒溫培養(yǎng)箱中30c培養(yǎng)24-48小時。C2.4計數(shù)：用計數(shù)器計算菌落數(shù)，有效計數(shù)范圍30-300個菌落。每克樣品中含芽抱桿菌數(shù)量=每個平板平均菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)x10（cfu）C2.5菌落形態(tài)：菌落圓形、白色或灰白色、表面濕潤C(jī)2.6不符合上述形態(tài)特征的為雜菌并計數(shù)。C2.7判定標(biāo)準(zhǔn)：每個稀釋樣至少3個平板，每個平板中菌落均勻，有效計數(shù)范圍為30