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1、附錄A(規(guī)范性附錄)測(cè)定用培養(yǎng)基A.1生化試驗(yàn)培養(yǎng)基蛋白月東10g;牛肉膏10g;酵母膏3g;葡萄糖10g;KHPO2g;NaCl1g;瓊脂20g;蒸儲(chǔ)水1000ml;PH值6.6-6.8。A.2麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基12°Be麥芽汁1000mlKHPO2g;瓊脂15g(A.3MRS瓊脂培養(yǎng)基:酪蛋白月東10.0g牛肉浸膏10.0g酵母浸膏5.0g;葡萄糖5.0g;乙酸鈉5.0g;檸檬酸二胺2.0g;Tween801.0g&HPO2.0g;MgSO7H2O0.2g;MnSOH2O0.05gCaCO20.0g;瓊脂15.0g蒸儲(chǔ)水1000mlPH6.8。A.4LB培養(yǎng)基:胰蛋白月東1
2、0g;葡萄糖5g;酵母浸出物5g;氯化鈉10g;瓊脂20g;蒸儲(chǔ)水1000ml;pH7.0附錄B(規(guī)范性附錄)嗜酸乳酸菌活菌檢測(cè)方法材料儀器恒溫培養(yǎng)箱、厭氧罐、超凈工作臺(tái)、分析天平、恒溫水浴鍋、勻漿器、可調(diào)式移液器、便攜式高壓滅菌鍋、pH電極、酒精燈及常規(guī)玻璃儀器培養(yǎng)基:MR甌脂培養(yǎng)基(A.3)方法:采用活菌平板計(jì)數(shù)法樣品處理:稱取1ml樣品溶于99ml滅菌生理鹽水中,充分震蕩搖勻,搖勻后依次稀釋至一定濃度B2.2平板制備與培養(yǎng):將附錄A的培養(yǎng)基于三角瓶中滅菌(15磅、15分鐘),培養(yǎng)基冷卻至50c左右,取0.1ml稀釋好的樣品于滅菌平皿中,傾注培養(yǎng)基,搖勻,凝固后置于厭氧罐。每個(gè)樣品應(yīng)不少于
3、3個(gè)平板,于恒溫培養(yǎng)箱中37c培養(yǎng)72小時(shí)。計(jì)數(shù):用計(jì)數(shù)器計(jì)算菌落數(shù),有效計(jì)數(shù)范圍30-300個(gè)菌落。每ml樣品中含乳酸菌數(shù)量=每個(gè)平板平均菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)x10(cfu)菌落形態(tài):菌落圓形、白色、周圍有透明圈。不符合上述形態(tài)特征的為雜菌并計(jì)數(shù)。判定標(biāo)準(zhǔn):每個(gè)稀釋樣至少3個(gè)平板,每個(gè)平板中菌落均勻,有效計(jì)數(shù)范圍為30-300個(gè)。雜菌計(jì)數(shù)雜菌率按公式(1)計(jì)算:M=1X100(1)n1n式中:M樣品雜菌率,%n1雜菌數(shù),億/g;附錄C(規(guī)范性附錄)產(chǎn)骯假絲酵母菌檢測(cè)方法C.1材料:C1.1儀器恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、分析天平、恒溫水浴鍋、勻漿器、可調(diào)式移液器、便攜式高壓滅菌鍋、pH電極、接種針、
4、涂布棒、酒精燈及常規(guī)玻璃儀器C1.2培養(yǎng)基:麥芽汁瓊脂(A.2)C.2方法:采用活菌平板計(jì)數(shù)法C2.1平板制備:將上述培養(yǎng)基于三角瓶中滅菌(10磅、20分鐘),倒于滅菌平皿中,凝固后備用C2.2樣品處理:稱取1ml樣品溶于99ml滅菌生理鹽水中,充分震蕩搖勻,搖勻后依次稀釋至一定濃度。C2.3涂布平板:取0.1ml稀釋好的樣品均勻涂布于平板中,每個(gè)樣品應(yīng)不少于3個(gè)平板,于恒溫培養(yǎng)箱中30c培養(yǎng)24-48小時(shí)。C2.4計(jì)數(shù):用計(jì)數(shù)器計(jì)算菌落數(shù),有效計(jì)數(shù)范圍30-300個(gè)菌落。每克樣品中含芽抱桿菌數(shù)量=每個(gè)平板平均菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)x10(cfu)C2.5菌落形態(tài):菌落圓形、白色或灰白色、表面濕潤(rùn)C(jī)2.6不符合上述形態(tài)特征的為雜菌并計(jì)數(shù)。C2.7判定標(biāo)準(zhǔn):每個(gè)稀釋樣至少3個(gè)平板,每個(gè)平板中菌落均勻,有效計(jì)數(shù)范圍為30
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