消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案

1、制藥有限公司GMP文件文件編碼：ZL-YF00505CleaningandSanitizingCompoundstheEffectoftheProgrammeValidationProtocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案起草：日期：審核：批準(zhǔn)：日期：實(shí)施日期：頒發(fā)部門：質(zhì)量部分發(fā)部門：質(zhì)量部、工程部驗(yàn)證小組名單組長姓名職務(wù)/職稱部門成員姓名職務(wù)/職稱部門文件編碼：RVP-CV-006a-00立項(xiàng)申請審批表立項(xiàng)題目消毒劑消毒效果及肩效期確認(rèn)立項(xiàng)編號VP-CV-006-a-00立項(xiàng)部門生產(chǎn)部申請日期年月日確認(rèn)對象消母劑確認(rèn)內(nèi)容1、先決條件確認(rèn)2、人員資質(zhì)確認(rèn)3、文件確認(rèn)4、檢測儀器儀表確認(rèn)

2、5、菌種確認(rèn)6、培養(yǎng)基和稀釋液的配制確認(rèn)7、中和劑鑒定試驗(yàn)9、75叱醇溶液、0.2%新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)10、消毒效力現(xiàn)場考察試驗(yàn)11、消毒劑儲存后效期確認(rèn)120.2%新潔爾火溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)審核意見簽名：年月日方案編制及實(shí)施要求方泵編制要求：消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案由生產(chǎn)部起草。實(shí)施要求：消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案實(shí)施的時間為2012年月確認(rèn)總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)簽名：年月日方案審核和批準(zhǔn)文件名稱：消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)文件編碼：'VP-CV-006-a-00編寫人日期：年月日姓名職務(wù)簽名日期審核人批準(zhǔn)人:日期：年月日執(zhí)行日期:年月日4三月日驗(yàn)證小組人

3、員名單：小組職務(wù)姓名所在部門職務(wù)組長生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員工程部TabletofContent目錄1 .目的和范圍234 .定義與縮寫5 .參考文件6 .概述錯誤！未定義書簽錯誤！未定義書簽錯誤！未定義書簽錯誤！未定義書簽錯誤！未定義書簽錯誤！未定義書簽7 .確認(rèn)前準(zhǔn)備88 .消毒劑消毒效力試驗(yàn)錯誤！未定義書簽9 .消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)1310 .驗(yàn)證偏差和變更錯誤！未定義書簽11 .附錄列表錯誤！未定義書簽1目的通過消毒劑消毒效果及有效期的確認(rèn)，科學(xué)制訂消毒程序，以

4、保證各潔凈級別的操作問及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達(dá)到消毒防止污染的效果，2適用范圍本方案適用于潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機(jī)器設(shè)備、儀器、操作臺、地漏、推車、記錄臺、凳子等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。3職責(zé)3.1 消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)小組組長職責(zé)3.1.1 負(fù)責(zé)組織編寫消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案，組織消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案的培訓(xùn)和實(shí)施。3.1.2 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案實(shí)施過程的監(jiān)控。3.1.3 負(fù)責(zé)組織收集各項(xiàng)確認(rèn)數(shù)據(jù)，并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，制訂消毒操作程序。3.2 生產(chǎn)部3.2.1 負(fù)責(zé)消毒劑的配制，及消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)的

5、實(shí)施。3.2.2 負(fù)責(zé)消毒劑配制相關(guān)記錄的填寫，及消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)實(shí)施過程關(guān)鍵項(xiàng)目參數(shù)的記錄。3.2.3 負(fù)責(zé)配合質(zhì)量部進(jìn)行消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)的實(shí)施。3.3 質(zhì)量部3.3.1 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案的審核、實(shí)施、實(shí)施過程的監(jiān)控、歸檔；確認(rèn)報(bào)告的發(fā)放、文件資料的保存。3.3.2 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)實(shí)施過程中的取樣送檢，檢驗(yàn)結(jié)果的跟蹤。3.3.3 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)實(shí)施過程中樣品的檢驗(yàn)，并出檢驗(yàn)報(bào)告。3.3.4 負(fù)責(zé)組織對確認(rèn)過程中的偏差進(jìn)行調(diào)查、處理、評估。3.4 工程部3.4.1 負(fù)責(zé)保證提供消毒劑消毒效果及

6、有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)的條件。4描述本公司的潔凈區(qū)分為十萬級、萬級和百級，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有2種消毒劑：75叱酉1、0.2%新潔爾滅溶液。本次驗(yàn)證方案將選用以上2種消毒劑分別進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為兩部分：一是實(shí)驗(yàn)室考察部分；二是現(xiàn)場考察部分消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期如下表：消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期序號名稱消毒對象消毒方法后效期175%乙醇用于地面、墻向、器具、工作服、清潔布、拖布、潔凈鞋水池、地漏和手的消毒。米用擦拭、噴灑、浸泡和液封方式密閉保存試驗(yàn)6天20.2%新潔爾火溶液用于地面、墻向、器具、工作服、清潔布、拖布、潔凈鞋水池、地漏和手的消毒。米用擦拭、噴灑

7、、浸泡和液封方式密閉保存試驗(yàn)6天作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時間應(yīng)不少于10分鐘，利用消毒劑進(jìn)行浸泡消毒的不少于10分鐘。實(shí)驗(yàn)室考察部分，定量懸浮試驗(yàn)法適用于浸泡或液封方式的消毒方法；表面實(shí)驗(yàn)法適用于擦拭或噴灑方式的消毒方法。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)有不銹鋼、鍍鋅板及玻璃三種，故表面試驗(yàn)法選用不銹鋼載片、鍍鋅板及玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。兩種試驗(yàn)方法作用的消毒劑廳P試驗(yàn)方法消母劑1表面實(shí)驗(yàn)法75叱醇20.1%新潔爾火溶液3定量懸浮試驗(yàn)法75叱醇40.1%新潔爾火溶液現(xiàn)場考察試驗(yàn)部分選擇10萬級潔凈區(qū)、萬級的

8、微生物限度室、超凈工作臺設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣，測定其微生物數(shù)量。5確認(rèn)程序菌種序號名稱序列號1金黃色葡萄球菌CMCC(B)260032大腸埃布國CMCC(B)44102白色念珠菌CMCC(F)98001培養(yǎng)基序號名稱備注1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基經(jīng)121C,20min滅菌備用2營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基4改良馬丁液體培養(yǎng)基5大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：BZW12085）一一.一-2規(guī)格：幀5mm,取樣面積為25m6玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)接觸碟（編號：BZW15129）消毒液擬定選用的中和劑序號消毒劑名稱中和劑備注175%乙醇1%卵磷脂+0.1%聚山梨酯80中和劑經(jīng)121C,2

9、0min火菌備用。20.1%新潔爾火溶液器具及設(shè)備序號名稱1尢菌移液官2錐形瓶3尢菌試管4漩渦混合器5恒溫水浴鍋6恒溫恒濕培養(yǎng)箱7恒溫恒濕培養(yǎng)箱稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液、PH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液6中和劑鑒定試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^該試驗(yàn)，確認(rèn)所用的中和劑對對應(yīng)的消毒劑有良好的中和作用，對試驗(yàn)用菌劑及其恢復(fù)期培養(yǎng)示范有害或不良影響。菌液的制備及計(jì)數(shù)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌工作菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035c培養(yǎng)1824小時。取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成1M085X108CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為1

10、X1085X108CFU/ml,可不再用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋）。計(jì)數(shù)時，將1X1085M08CFU/ml的工作菌液10倍系列稀釋成含50100CFU/ml菌液，并同時采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基3035c培養(yǎng)2天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。白色念珠菌工作菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，2328c培養(yǎng)2448小時。取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成1X1085X108CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為1X1085X108CFU/ml,可不再用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋）。計(jì)數(shù)時，將1X1085X108C

11、FU/ml的工作菌液10倍系列稀釋成含50100CFU/ml菌液，并同時采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2328c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。鑒定試驗(yàn)操作配制75%乙醇、0.2%新潔爾滅溶液，具體操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20c±1。叵溫水浴鍋中備用。分組操作試驗(yàn)分組及稀釋操作方法簡表組號混合液A混勻作用混合液B混勻作用取混合液B或混合液取0.5ml工作菌液加入卜列溶液中10min取混合液A0.5ml加入卜列溶液10minB的稀釋級溶液0.5ml平板計(jì)數(shù)（2皿/組）1消場劑4.5ml稀釋液4.5ml一一、-1混合放B、102

12、消場劑4.5ml中和劑4.5ml一一、-1混合放B、103中和劑4.5ml稀釋液4.5ml10-2、10-34中和產(chǎn)物4.5ml（消毒液與中和劑比例為1:1）稀釋液4.5ml10-2、0-35稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml10-2、10-36稀釋液和中和劑各1.0ml注入尢菌平皿中，各制備2皿。具體操作第1組目的：觀察消毒液對試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制能力。操作：取消毒劑4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min后，取混合液0.5ml+稀釋液4.5ml,混勻作用10min,取0.5ml注皿，平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)

13、；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置2328c培養(yǎng)5大計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第2組目的：觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否恢復(fù)生長。操作：取消毒劑4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min后，取混合液0.5ml+中和齊1J4.5ml,混勻作用10min,用稀釋液稀釋成10-1。分別取未稀釋溶液（混合液0.5mll+中和劑4.5ml的混合液）及10-10.5ml注皿，各平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于3035c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于2328c培養(yǎng)5大計(jì)數(shù)。第3組目的：觀察中和劑是否有抑菌性操作：取中和劑4

14、.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min,取混合液0.5mll+稀釋液4.5ml,混勻作用10min后，用稀釋液進(jìn)行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級0.5ml注皿,各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035C培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第4組目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對試驗(yàn)菌的生長繁殖是否有影響。操作：取消毒劑和中和劑1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min,取混合液0.5mll+稀釋液4.5ml,混勻作用10min后，用稀釋液

15、進(jìn)行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級0.5ml注皿，各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035c培養(yǎng)3天計(jì)。第5組目的：作菌落數(shù)對照用操作：取稀釋液4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min,取混合液0.5mll+稀釋液4.5ml,混勻作用10min后，用稀釋液進(jìn)行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級0.5ml注皿,各稀釋級平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂

16、培養(yǎng)基，倒置3035C培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)。第6組目的：作為陰性對照用操作：分別取稀釋液和中和劑各1.0ml注入無菌平皿中，各制備2皿。結(jié)果判斷試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。第1組無菌生長，或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長。第2組菌落數(shù)比第1組菌落數(shù)多，但比第3、4、5組菌落數(shù)少，且符合下表要求第1組平板平均菌落數(shù)第2組平板平均菌落數(shù)0>5x>(x+5)y>(y+0.5y)第3、4、5組有相似菌落數(shù)生長，其每組間菌落數(shù)誤差率不超過15%。計(jì)算公式如下：（3組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù)）的絕對值之和誤差率=X100%3M組間菌落平均數(shù)第6組無菌生長。否則，說明試劑有污染，應(yīng)

17、重新進(jìn)行試驗(yàn)。7定量懸浮試驗(yàn)0.2%新潔爾滅溶液、75%乙醇溶液消毒效力的確認(rèn)（定量懸浮試驗(yàn)法）目的：由于0.2%新潔爾滅溶液、75%乙醇溶液要通過浸泡或液封消毒，采用將消毒劑置于無菌具塞試管中通過定量懸浮試驗(yàn)法，確定其消毒效力是否符合要求。程序：（1）菌種的選擇由于0.2%新潔爾滅溶液、75%乙醇溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽抱，故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌；（2）菌液制備：取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035c培養(yǎng)1824h即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于106cfu/ml。取白色念珠菌接種于改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于2328c培養(yǎng)244

18、8h即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于106cfu/ml。（3）消毒劑的配制：按照清潔劑、消毒劑配制使用程序進(jìn)行配制0.2%新潔爾滅溶液、75%乙醇溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。（4）試驗(yàn)方法：（a）在室溫條件下將配制好的0.2%新潔爾滅溶液（或75%乙醇溶液）按9ml/支分注于27支無菌具塞試管中，按照“分鐘組”、“1的鐘組”和“1分鐘組”共3組每組9支，進(jìn)行分組編號。（b）取供試菌液（106cfu/ml的金黃色葡萄球菌菌液，106cfu/ml的大腸埃希菌菌液，106cfu/ml的白色念珠菌菌液）1ml按照下表，分別接入到盛有9ml0.2%新潔爾滅溶液（或75%乙醇溶液）的試管中（已進(jìn)行10倍稀釋），輕輕搖動

19、，混合均勻，并立即開始計(jì)時。5分鐘組10分鐘組15分鐘組金黃色葡錮球菌1ml/支，共3支1ml/支，共3支1ml/支，共3支大腸埃希菌1ml/支，共3支1ml/支，共3支1ml/支，共3支白色念珠菌1ml/支，共3支1ml/支，共3支1ml/支，共3支(c)消毒劑的稀釋分別在5分鐘、10分鐘和15分鐘時迅速吸取1ml菌藥混合液，加入到9ml(1%卵磷脂+0.1%聚山梨酯80)中和劑中，迅速混勻中和10分鐘，分別取上述經(jīng)中和的“辦鐘組”、“1的鐘組”和“1分鐘組”的接種細(xì)菌的消毒液，傾入過濾杯濾過，然后各用0.9%無菌生理鹽水50ml清洗濾膜，濾過，重復(fù)用50m10.9%無菌生理鹽水的洗滌共3次

20、。取下濾膜，含細(xì)菌的膜放入營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，含真菌的膜放入玫瑰紅鈉瓊脂平板內(nèi)，含菌膜面向上。細(xì)菌于30-35C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3d,真菌于23-28C的霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5do培養(yǎng)后在明亮處，對平板上的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。d陽性對照分別將106cfu/m1金黃色葡萄球菌菌液、106cfu/m1大腸埃希菌菌液、106cfu/m1的白色念珠菌菌液用無菌注射用水進(jìn)行梯度稀釋至濃度為10100cfu/m1,取稀釋液體1ml于平皿中，傾注冷卻至45c營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基混勻，待凝固后于細(xì)菌于30-35C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3d,真菌于23-28C的霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d。培養(yǎng)結(jié)束后對平

21、板上的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。0.2%新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)與消毒劑作用時間菌種名稱試驗(yàn)組菌落數(shù)(cfu/ml)10-1平均菌落數(shù)(cfu/ml)殺菌率1235分鐘金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌10分鐘金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌15分鐘金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌陽性對照釋級10-3-410410-5平均菌落數(shù)（cfu/ml）金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價:操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：年月日75%乙醇溶液消毒效力的確認(rèn)與消毒劑作用時間菌種名稱試驗(yàn)組菌落數(shù)（cfu/ml）10-1平均菌落數(shù)（cfu/ml）殺菌率1235分鐘金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌

22、白色念珠菌10分鐘金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌15分鐘金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌陽性對照級10-310-410-5平均菌落數(shù)（cfu/ml）金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價:操作人:日期:月日復(fù)核人:日期:8表面試驗(yàn)75%乙醇溶液、0.2%新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)(表面試驗(yàn)法)目的:由于75%乙醇溶液、0.2%新潔爾滅溶液要通過擦拭消毒，故選用不銹鋼載片、鍍鋅片及玻璃裁片進(jìn)行表面試驗(yàn)法，確定其消毒效力是否符合要求。程序：(1)菌種選擇：由于75%乙醇、0.2%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽抱，故表面試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌。(2)工

23、作菌液制備取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌分別接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035c培養(yǎng)1824h即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于106cfu/ml。取白色念珠菌接種于改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于2328c培養(yǎng)2448h即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于106cfu/mL(3)染菌不銹鋼載片制備：將經(jīng)滅菌的不銹鋼載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌含菌量為1X1085X108CFU/ml的菌液0.1ml,并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晾干后備用。每種菌平行制備兩個染菌不銹鋼載片；染菌鍍鋅載片制備：將經(jīng)滅菌的鍍鋅載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、大腸埃

24、希菌和白色念珠菌含菌量為1X1085X108CFU/ml的菌液0.1ml,并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晾干后備用。每種菌平行制備兩個染菌鍍鋅載片；染菌玻璃載片制備：因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進(jìn)行染菌試驗(yàn)。進(jìn)行菌液滴染前，用記號筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50mrK50mm）,標(biāo)注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。（4）取樣試驗(yàn)組：將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時間分別為5min、10min、15min,不銹鋼載片、鍍鋅載片及玻璃載片每個作用時間分別制備2個。作用結(jié)束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格：*55mm,取樣面積為2

25、5m2）。取金黃色葡萄球菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：BZW12085）;取大腸埃希菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：BZW12085）;取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：BZW15129）。接觸碟取樣方法：打開接觸碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，蓋上碟蓋。對照組：對照組的活菌濃度同工作菌液的制備。陰性對照：用接觸碟在已滅菌的載片上（未染菌片的載片）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。（5）培養(yǎng)：將取樣金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的接觸碟倒置于3035c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；取樣白色念

26、珠菌的接觸碟倒置于2328c培養(yǎng)5大計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。（6）結(jié)果計(jì)算：計(jì)算試驗(yàn)組和對照組的活菌濃度（CFU/ml）,并換算為對數(shù)值（N）,并按下式計(jì)算殺滅對數(shù)值:殺滅對數(shù)值出口=對照組平均活菌濃度的對數(shù)值（NO）-試驗(yàn)組活菌濃度對數(shù)值（NX）可接受標(biāo)準(zhǔn)：殺滅對數(shù)值（KL）應(yīng)不低于3個對數(shù)單位。75%乙醇溶液、0.2%新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)序號消毒齊IJ名稱工作菌液殺滅對數(shù)平均值（KL）不銹鋼載片（min）玻璃載片（min）鍍鋅載片（min）510155101551015175%乙醇金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌20.2%新潔爾火溶液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌可接受標(biāo)至陰性對照無菌生長；

27、殺滅對數(shù)值（KL）應(yīng)不低T3個對數(shù)單位確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：年月日9消毒效力現(xiàn)場考察試驗(yàn)?zāi)康模捍_認(rèn)消毒劑對相應(yīng)設(shè)施的實(shí)際消毒效力。操作：(1)生產(chǎn)車間崗位操作人員按照潔凈區(qū)衛(wèi)生清潔程序、地漏的清潔消毒程序、10萬級潔凈區(qū)潔具清潔消毒程序、萬級潔凈區(qū)潔具清潔消毒程序、地漏清潔程序進(jìn)行清潔。(2)生產(chǎn)車間崗位操作人員，使用放冷的注射用水，按照清潔劑、消毒劑配制使用程序進(jìn)行75%乙醇溶液、0.2%的新潔爾滅溶液配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。按照潔凈區(qū)衛(wèi)生清潔程序進(jìn)行清潔消毒，分別清潔消毒10萬級潔凈區(qū)各房間的頂棚、墻面、工作臺面和墻面、地漏、水池下水；10萬級潔凈區(qū)的工作鞋、清潔布、拖布

28、；萬級區(qū)微生物限度室等房間頂棚、墻面、工作臺面和墻面、地漏、水池下水，萬級潔凈區(qū)的工作鞋、清潔布、拖布等區(qū)域。(3)消毒15分鐘后，由QA人員到車間按照接觸碟法取樣程序進(jìn)行潔凈區(qū)表面微生物的采樣；用浸泡或液封方式的采用無菌吸管取浸泡液或液封液1ml,連續(xù)逐日測定，共測定3次。記錄測定結(jié)果?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：所監(jiān)測的潔凈區(qū)的微生物均在公司環(huán)境質(zhì)量控制范圍內(nèi)，各潔凈區(qū)符合各自的潔凈級別要求。75%乙醇溶液消毒后環(huán)境監(jiān)測表面微生物測定結(jié)果單位：cfu/皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪問10萬級2<50CFU/25cm口是口否包裝問口是口否潔具問口是口否無菌檢查室萬

29、級2<25CFU/25cm2口是口否微生物限度室操作臺百級2<1CFU/25cm口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期：年月曰復(fù)核人：日期：不尹月曰0.2%新潔爾面溶液消毒后環(huán)境監(jiān)測表面微生物測定結(jié)果單位：cfu/皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪問10萬級2<50CFU/25cm口是口否包裝問口是口否潔具問口是口否無菌檢查室萬級2<25CFU/25cm2口是口否微生物限度室操作臺百級2<1CFU/25cm2口是口否確認(rèn)結(jié)果評價:操作人：日期：年月曰復(fù)核人：日期：年月曰0.2%新潔爾滅溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)果單位：cfu/皿監(jiān)測區(qū)

30、域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪問地漏10萬級2<50CFU/25cm口是口否包裝間地漏口是口否潔具間水池下水口是口否微生物限度室地漏萬級2<25CFU/25cm口是口否微生物限度室水池下水口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：仝巨月日75%溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)果單位：cfu/皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪問地漏10萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間地漏口是口否潔具間水池下水口是口否微生物限度室地漏萬級2<25CFU/25cm口是口否微生物限度室水池下水口是口否確認(rèn)結(jié)果評價

31、：操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：仝巨月日75%乙醇溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)果單位：cfu/皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)第一次第二次第三次可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格工作鞋10萬級_2<50CFU/25cm口是口否口是口否清潔布拖布口是口否工作鞋萬級2<25CFU/25cm口是口否清潔布口是口否拖布口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期：1年月曰復(fù)核人：日期：年月00.2%新潔爾滅溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)果單位：cfu/皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)第一次第二次第三次可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格工作鞋10萬級2<50CFU/25cm口是口否清潔布口是口否拖布口是口否工作鞋萬級2<25CFU

32、/25cm口是口否清潔布口是口否拖布口是口否確認(rèn)結(jié)果評價:操作人：日期：年月曰復(fù)核人：日期：年月10消毒劑儲存有效期確認(rèn)試驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^該試驗(yàn)，確定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，并且消毒效力不會發(fā)生變化，符合要求。程序：(1)在進(jìn)行消毒劑有效期確認(rèn)時，每天開啟裝消毒劑的容器不少于5次，其每次開啟時間在12分鐘，以模擬實(shí)際操作的最差條件。(2)按照清潔劑、消毒劑管理規(guī)程和清潔劑、消毒劑配制使用程序配制75%乙醇、0.2%新潔爾滅溶液。(3)分別在消毒劑儲存的第3天、第4天、第5天、第6天進(jìn)行取樣做消毒劑消毒效力的確認(rèn)。分別按照上述7或8做0.2%新潔爾滅溶液、75%L醇溶液消毒效力的確認(rèn)。(4)結(jié)果計(jì)

33、算：計(jì)算試驗(yàn)組和對照組的活菌濃度(CFU/ml),并換算為對數(shù)值(N),并按下式計(jì)算殺滅對數(shù)值：殺滅對數(shù)值(KL)=對照組平均活菌濃度的對數(shù)值(NO-試驗(yàn)組活菌濃度對數(shù)值(NX可接受標(biāo)準(zhǔn)：在消毒液有效期末，殺滅對數(shù)值(KL)應(yīng)不低于3個對數(shù)單位。消毒劑儲存有效期確認(rèn)序號方法消毒劑名稱工作菌液殺滅對數(shù)平均值KL(天)可接受標(biāo)準(zhǔn)34561定量懸浮試驗(yàn)75%乙醇金黃色葡萄球菌陰性對照無菌生長；殺滅對數(shù)值(KL)應(yīng)小氐于3個對數(shù)單位大腸埃布國白色念珠菌20.2%新潔爾火溶液金黃色葡萄球菌大腸埃布國白色念珠菌3表面試驗(yàn)75%乙醇金黃色葡萄球菌大腸埃布國白色念珠菌40.2%新潔爾火溶液金黃色葡萄球菌大腸埃

34、布國白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價:操作人：日期：年月曰復(fù)核人：日期：年月曰110.2%新潔爾滅溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)0.2%新潔爾滅溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)目的：確認(rèn)消毒劑在實(shí)際應(yīng)用中，其消毒效力能夠保持的期限。程序：(1)在萬級實(shí)驗(yàn)室的墻面和百級級層流下設(shè)備表面作為驗(yàn)證對象。實(shí)驗(yàn)室墻面編號為1號、百級層流下設(shè)備表面2號，分別使用0.2%新潔爾滅溶液、75%乙醇溶液進(jìn)行擦拭消毒(1號為0.2%新潔爾滅溶液消毒劑、2號為75%乙醇溶液)。(2)采用接觸碟法在消毒過的實(shí)驗(yàn)室墻面和百級層流下設(shè)備表面取樣。(3)取樣完畢完畢后第24、48、72小時取樣送QC做微生物限度?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：百級：1CFU/25cm2、萬級：25CFU/25cm2。0.1%新潔爾滅溶液和75%乙醇溶液消毒效力周期確認(rèn)(單位：cfu/25cm2)次序平均菌落數(shù)第一次區(qū)域消