厚樸酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用與γ-氨基丁酸的關(guān)系

1、厚樸酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用與-氨基丁酸的關(guān)系 08-06-03 11:24:00 作者：劉可云，黃賢珍編輯：studa20【關(guān)鍵詞】 厚樸酚；,腦缺血再灌注；,-氨基丁酸；,谷氨酸摘要：目的研究厚樸酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用與氨基丁酸（GABA）的關(guān)系。方法采用線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，用高效液相熒光法測定大鼠腦組織谷氨酸（GLU）和GABA的含量。結(jié)果厚樸酚可以明顯降低腦缺血再灌注后GLU含量，增加GABA的含量。結(jié)論 厚樸酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有明顯的保護作用，該作用與其提高抑制性氨基酸GABA的含量，產(chǎn)生抑制性保護作用有關(guān)。關(guān)鍵詞：

2、厚樸酚； 腦缺血再灌注； -氨基丁酸； 谷氨酸 Neuroprotective Effect of Magnolol against Focal Cerebral Ischemia-reperfusion Injury and the Relation to GABA in RatsAbstract：Objective To study the protective effect of magnolol against focal cerebral ischemia-reperfusion injury and the relation to gamma- aminobutyric acid

3、（GABA）in rats. MethodsThe middle cerebral artery occlusion(MCAO) model in rats was established to investigate the role of magnolol. The levels of glutamate (GLU) and GABA in cerebral tissue were measured by high performance liquid chromatography-fluorometer (HPCLFR) method. ResultsThe levels of GLU

4、markedly decreased while the levels of GABA obviously increased by magnolol in MCAO rats.ConclusionMagnolol could prevent MCAO rats from ischemia-reperfusion injury, the pretective effect is related to magnolol keeping dynamic balance of excition-inhibition ,and persisting inhibitiondepended effect.

5、Key words：Magnolol; Cerebral ischemia-reperfusion injury; Gama-aminobutyric acid; Glutamate 缺血性腦血管疾病是臨床常見、多發(fā)且預(yù)后較差的疾病。腦缺血再灌注損傷的機理非常復(fù)雜，目前研究提出的興奮抑制失衡假說認為：腦缺血時腦內(nèi)氨基丁酸(aminobutyric acid,GABA)的含量進行性下降，內(nèi)源性抑制作用降低，興奮性毒性增加，引起興奮抑制失衡，是腦缺血損傷的重要因素之一1。另有報道，GABA及其擬似劑可以治療腦缺血后因興奮性氨基酸大量釋放引起大腦的神經(jīng)損傷2。因此抑制性神經(jīng)遞質(zhì)可能成為臨床防治腦缺血

6、損傷新的靶點。厚樸酚(magnolol)是中藥厚樸的主要活性成分，有報道3對腦缺血有保護作用。另有研究發(fā)現(xiàn)厚樸酚在體外對GABAA受體有激動作用4。但有關(guān)厚樸酚對腦缺血再灌注損傷保護作用與GABA的關(guān)系的研究目前國內(nèi)外還沒有報道。本實驗采用大鼠大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型，觀察厚樸酚對局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用與GABA的關(guān)系。1 材料與方法1.1 主要藥品和試劑厚樸酚由重慶醫(yī)科大學藥學院提供，純度90。甲醇(色譜醇)購自上海凌峰化學試劑廠。谷氨酸 (GLU)和GABA標準品購自上海試劑三廠。1.2 主要儀器美國惠普公

7、司HP1050型高效液相色譜儀。德國BeckmanJ221型高速離心機。1.3 實驗動物分組及給藥方法40只健康清潔級Wistar大鼠，體重為（30020）g，雌雄不限，購自重慶醫(yī)科大學實驗動物中心。隨機分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注模型組、小劑量厚樸酚預(yù)處理組、大劑量厚樸酚預(yù)處理組，每組10只。其中厚樸酚預(yù)處理組于實驗前3 d開始灌胃給藥，給藥劑量分別為25 mg/kg和75 mg/kg。1.4 大腦中動脈閉塞(MCAO)模型的制作 參照Longa等5的線栓法，用10水合氯醛(4 ml kg1，ip)麻醉大鼠，將麻醉后的大鼠仰臥位固定，消毒皮膚，鋪無菌孔巾，頸正中切口，分離左側(cè)頸總動脈，頸外動脈

8、，頸內(nèi)動脈，結(jié)扎頸總動脈、頸外動脈，于頸總動脈分叉切口處向頸內(nèi)動脈插入栓線約(18.50.5) mm，感覺有阻力即達大腦中脈起始部，完全阻斷其血流，結(jié)扎頸內(nèi)動脈。2 h后拔出栓線，再灌注24 h，即造成缺血再灌注模型。所用栓線為直徑0.2 mm尼龍漁線，頭段燒圓，頂端直徑約0.250.28 mm。術(shù)中室溫在（270.5）。術(shù)后縫合傷口，動物回籠。術(shù)中保持肛溫恒定。動物清醒后出現(xiàn)以左前肢偏癱為主的神經(jīng)功能缺失表現(xiàn)為模型成功的標志。凡呼吸困難、術(shù)中出血量較大、術(shù)后30 min仍未蘇醒者均棄之不用。假手術(shù)組除了不插栓線外，其余步驟同手術(shù)組。1.5 標本處理全部大鼠剪斷頭部，迅速取腦，在冰盤上分離缺血

9、側(cè)腦組織，電子天平準確稱重，即刻凍存在-20冰箱。取腦組織于勻漿器內(nèi)用甲醇反復(fù)充分溶漿3次，轉(zhuǎn)移合并提取液至離心管內(nèi)，置超聲波上處理30 min，10 000 rmin1，10以下冷凍離心30 min，將上清液轉(zhuǎn)入液閃瓶內(nèi)，80水浴使甲醇蒸發(fā)干,瓶內(nèi)準確加入1.35 ml 0.1molL1的HC1，再超聲處理30 min，使氨基酸充分溶出。將溶出物再次冷凍離心30 min，取上清液用于氨基酸分析。1.6 氨基酸分析 色譜條件：HP Hypersil ODS (4 mm125 mm)5m ，流動相A：8.0 mmolL1磷酸緩沖液(pH 7.2)，流動相B：8.0 mmolL1 磷酸緩沖液(pH7.2)+甲醇+乙腈(50+35+15)，流量1.0 mlmin1，柱前自動衍生程序：設(shè)置自動進樣程序為依次吸取1l OPA試劑，5l 0.1 molL1，pH 10.4硼酸緩沖液和1 l樣品，梯度洗脫程序：0 min，0B；