實驗D防腐劑測定

1、實驗 9（序號待統(tǒng)編）紫外分光光度法測定雪碧中苯甲酸的含量一、目的要求1、掌握用紫外可見分光光度法測定防腐添加劑的原理和方法2、加深對蒸餾分離不同有機物的方法理解和操作技術(shù)的掌握二、原理將樣品酸化后進行蒸餾，苯甲酸隨蒸汽餾出。收集餾出的餾分，加入強氧化劑將餾出液中的有機物完全氧化分解，再次蒸餾，并用堿吸收得苯甲酸鈉。用紫外分光光度計于225nm處進行測定。采用標準曲線法并計算樣品中苯甲酸的含量。三、儀器與試劑紫外分光光度計，蒸餾裝置。NaOH溶液： 0.1mol ·L-1 , 0.01mol · L-1 ； K2Cr2 O7溶液： 0.03333mol ·L-1

2、；H2SO4 溶液： 2-1苯甲酸（經(jīng) 105烘干）于 250mL燒杯mol·L ；苯甲酸標準溶液： 100mg/L，稱取 0.1000g中，加入-11000mL容量瓶中，用水定容； Na SO0.1mol ·L NaOH100mL，攪拌溶解后，轉(zhuǎn)移入2434（無水）； H PO。四實驗步驟1、標準曲線的繪制（1）、移取 50.00mL 苯甲酸標準液于 250mL蒸餾瓶中，加H3PO41mL，Na2SO4（無水） 20g，水70mL，玻璃珠（防爆沸）-13-4 粒進行蒸餾。用 50mL容量瓶（預(yù)先加有 5mL0.1mol ·L NaOH）收集餾出液。當(dāng)餾出液約為4

3、0mL時，停止蒸餾，用少量水吹洗冷凝器，洗液并入容量瓶，最后用水定容。（2）、移取第一次餾出液于另一個250mL蒸餾瓶中，加入-1溶液 25mL，0.03333 mol·L K2Cr2O72mol·L-1 H2SO4 溶液 6.5mL，連接冷凝裝置，在水浴上加熱約10min，冷卻，加入H3PO41mL，Na2 SO4（無水） 20g，水 40mL，玻璃珠（防爆沸） 3-4粒進行蒸餾。以下操作同（1）。（3）、移取第二次餾出液2.00 ， 4.00 ， 6.00 ， 8.00 ， 10.00mL，分別置于 50mL 容量瓶中，用 0.01mol ·L-1 NaOH溶

4、液定容。 以 0.01mol ·L-1 NaOH溶液為參比， 在 225nm處測定吸光度，繪制工作曲線。2. 樣品的測定（ 1）樣品溶液的制備準確稱取 8-10g 均勻的樣品置于250mL蒸餾瓶中，以下操作按標準曲線的（1）和（ 2）進行。（ 2）移取 5-20mL 試樣的第二次蒸出液（按樣品中苯甲酸含量的多少選擇試樣第二次蒸出液體積）于 50mL容量瓶中，用 0.01mol ·L-1 NaOH溶液定容。以 0.01mol ·L-1 NaOH溶液為參比，在225nm 處測定吸光度。（3）空白試驗：取與樣品量同樣的水，加入-11mol·L NaOH5mL（

5、不加 H3PO4），以下操作同樣品測定步驟測定空白試樣的吸光度。五結(jié)果計算苯甲酸的含量（C C0）× 1000/(m × 25/50×V/50 × 1000)(g/kg)式中：C：樣品溶液中苯甲酸的含量（mg）；C0：空白溶液中苯甲酸的含量（mg）； m：樣品質(zhì)量(g) ； V：樣品溶液（第二次蒸餾液）體積（ mL）。執(zhí)筆人：訾言勤實驗 10（序號待統(tǒng)編）可見光分光光度法測定橙汁中山梨酸的含量一、目的要求1、掌握用可見分光光度法測定山梨酸添加劑的原理和方法2、加深對分光光度法測定不同有機物的方法理解和分光光度計操作技術(shù)的掌握二原理山梨酸（或其鹽類）在硫酸

6、和重鉻酸鉀的氧化作用下，產(chǎn)生丙二醛，丙二醛和硫代巴比妥酸作用產(chǎn)生紅色化合物，其最大吸收波長在530nm，在一定濃度范圍內(nèi)，其紅色產(chǎn)物的吸光度與丙二醛的濃度成正比。可用分光光度法測定。三儀器與試劑分光光度計（任一型號） ； 25mL比色管7 支（ 10mL處有刻度）。-1-1HCl 溶 液 ： 1mol·L ； NaOH 溶 液 ：1mol·L ； 重 鉻 酸 鉀 硫 酸 混 合 溶 液 ：-1227-1240.01667mol ·L K Cr O 溶液和 0.15mol·L H SO溶液等體積混合； 硫代巴比妥酸溶液： 準確-1稱取 0.5g 硫代巴比妥

7、酸于 100mL燒杯中，加入 20mL水和 10mL1 mol ·L NaOH溶液，攪拌至-1100mL容量瓶中，用水定容。完全溶解，再加入 11mL1 mol ·L HCl 溶液，攪拌均勻，轉(zhuǎn)移入此溶液現(xiàn)配現(xiàn)用（若保存在冰箱中，可保存2 個月）；山梨酸標準貯備液： 200g/mL，稱取0.2000g 山梨酸于 100 mL燒杯中，用0.1 mol · L-1 NaOH溶液溶解后，轉(zhuǎn)移入 1000mL容量瓶中，用水定容； 山梨酸標準工作液：2.00 g/mL，移取 1.00mL 山梨酸標準貯備液于 100mL容量瓶中，用水定容。四標準曲線的繪制移取山梨酸標準工作液

8、 0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL分別置于 6 支 25mL比色管中，加入水至約 5mL，再加入 2mL重鉻酸鉀硫酸混合溶液，在100水浴中加熱 7min，立即加入 1.50mL 硫代巴比妥酸溶液，繼續(xù)在水浴中加熱10min，取出，迅速用冷水冷卻，用水定容至 10mL，用 1cm 比色皿，以試劑空白溶液為參比，于530nm處測定吸光度，繪制工作曲線。五樣品的測定移取 2.00mL 橙汁飲料于 25mL比色管中，按標準曲線繪制操作步驟，測定吸光度。六結(jié)果計算樣品中山梨酸含量（mg/Kg）=在標準曲線上查得的微g 數(shù)（ g） /2mL。注：我國食品衛(wèi)生標準規(guī)定：山梨酸

9、及其鉀鹽的允許添加量為：果醬1g/Kg ；果汁類：0.6g/Kg；汽水、汽酒類0.2g/Kg；醬油1g/Kg 。七注意事項苯甲酸的測定過程中，應(yīng)根據(jù)樣品中苯甲酸和有機物含量的多少適當(dāng)增減第一次蒸出液體體積和重鉻酸鉀溶液用量。執(zhí)筆人：訾言勤實驗 11（序號待統(tǒng)編）酶促發(fā)酵生產(chǎn) 1,6- 二磷酸果糖表征及含量的測定一、目的要求1、學(xué)會發(fā)酵生產(chǎn)1,6- 二磷酸果糖的原理；2、掌握 1,6- 二磷酸果糖的分離方法；3、掌握紅外光譜法表征1,6- 二磷酸果糖的方法；4、掌握紫外可見分光光度法定量1,6- 二磷酸果糖的方法。二、實驗原理1,6- 二磷酸果糖是人體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，是一種分子水平的代

10、謝調(diào)節(jié)劑，具有激活丙酮酸激酶，加速糖酵解，增加ATP生成； 加速鉀離子內(nèi)流，恢復(fù)細胞極化狀態(tài)等生理功能， 是治療心腦血管疾病的良藥。1,6- 二磷酸果糖一般采用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)，發(fā)酵液中 1,6- 二磷酸果糖的提取方法有鈣、鋇鹽沉淀法；離子交換法；有機溶劑提取法，乙醇沉淀法等。 本實驗應(yīng)用酵母酶系為催化轉(zhuǎn)化介質(zhì)，以葡萄糖糖源、 磷酸鹽為底物， 發(fā)酵生產(chǎn)1，6 一二磷酸果糖，發(fā)酵液中1， 6 一二磷酸果糖采用鈣鹽沉淀和有機溶劑結(jié)合提取法，研究提取 FDP生產(chǎn)新工藝。沉淀法具有提取率高，操作簡單，便于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。鈣鹽沉淀法提取1, 6-二磷酸果糖的工藝流程：發(fā)酵液加熱過濾濾渣濾液棄酵母抽提物

11、加入氯化鈣調(diào)pH離心分離離心分離沉淀濾液FDP酸洗離心分離沉淀濾液調(diào)二鈣pH8.5 干燥過濾水洗沉淀三試劑與儀器試劑：1,6-二磷酸果糖；葡萄糖；磷酸二氫鈉；氯化鎂；活性酵母；乙醇；氯化鈣；氫氧化鈉；鹽酸；間苯二酚；硫脲；醋酸鋇；蒸餾水。儀器： 1000mL試劑瓶； 500mL 試劑瓶 3 只； 500mL容量瓶 1 只； 250mL容量瓶 1 只；攪拌器；抽濾機；干燥機；紅外光譜儀；紫外可見分光光度計。SHZ- 22 型水浴恒溫振蕩器；CS 501 型超級恒溫器；WFX-110 型原子吸收分光光度計。四實驗內(nèi)容和步驟1 提取 1, 6- 二磷酸果糖鈣在 500mL蒸餾水中加入 50g 葡萄糖

12、， 35g 磷酸二氫鈉，10g 氯化鎂，活性酵母 60g ，調(diào)節(jié) pH 為 6.5 ，在 30度下發(fā)酵3 5 個小時。然后將發(fā)酵液加熱沸騰約10min ，過濾，收集濾液，并用蒸餾水將濾渣反復(fù)洗滌兩遍，合并濾液。在上面得到的濾液中加入約-150mL濃度為 1.0 mol ·L 的氯化鈣，調(diào)節(jié) pH 為 8.5, 不斷攪拌約 0.5 小時，過濾，濾渣用50mL的鹽酸洗滌，調(diào)溶液的pH 為 1.5 ，過濾，棄去殘渣，在上層清夜中加入氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH 為 8.5 ，過濾，棄去濾液，干燥，得1,6- 二磷酸果糖鈣。2 1,6- 二磷酸果糖的定性表征為了表征 1,6- 二磷酸果糖二鈣的結(jié)構(gòu)及確

13、定提取產(chǎn)品的純度，取微量提取樣品與 KBr混研磨，用KBr做本底。作紅外譜圖。文獻紅外譜圖如下：1,6- 二磷酸果糖二鈣的紅外光譜圖紅外光譜測定結(jié)果表明，1,6- 二磷酸果糖二鈣在3417nm處有一特征峰，表明分子中存在大量的 O-H 基團 ;1646nm 和 1071nm處為 C-O 鍵的伸縮振動，940nm處為 C-O-P 的伸縮振動峰。樣品紅外譜圖與標準譜圖對照，說明提取樣品性質(zhì)和種類。3. 定量條件的選擇和測定1,6- 二磷酸果糖在濃鹽酸中和間苯二酚反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色的化合物，收峰。取 100 g mL的1,6- 二磷酸果糖溶液1 mL，分別加入濃鹽酸勻后于 80 水浴中加熱 14min；

14、冷卻后于 570nm測定吸收值。在 570 nm處有特征吸7mL，間苯二酚 1.5mg，混標準曲線和樣品測定：1,6-二磷酸果糖標準溶液(100 g/mL )0.2mL，0.4 ， 0.6 ， 0.8，1.0 ， 1.2 mL；分別加入間苯二酚1.5mg，濃鹽酸7mL，混勻后于8O水浴加熱14 min，冷卻后于 570 nm測定光吸收值。繪制標準工作曲線，同樣條件測定樣品，計算1,6- 二磷酸果糖含量。五數(shù)據(jù)處理1 1,6-二磷酸果糖紅外光譜法表征結(jié)果；2 紫外可見分光光度法定量 1,6- 二磷酸果糖的分析結(jié)果；六 注意事項1 調(diào)節(jié) pH 為 6.5 ，在 30度下發(fā)酵 3 5 個小時；2實驗

15、表明酸度對產(chǎn)品得率有很大的影響，酸度控制pH8.5 ；3 加入乙醇可以降低溶解度；七思考題1為什么能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為1,6- 二磷酸果糖？2 如何進行 1,6- 二磷酸果糖的定性和定量分析？執(zhí)筆人：訾言勤出師表兩漢：諸葛亮先帝創(chuàng)業(yè)未半而中道崩殂， 今天下三分， 益州疲弊， 此誠危急存亡之秋也。然侍衛(wèi)之臣不懈于內(nèi)，忠志之士忘身于外者，蓋追先帝之殊遇，欲報之于陛下也。誠宜開張圣聽，以光先帝遺德，恢弘志士之氣，不宜妄自菲薄，引喻失義，以塞忠諫之路也。宮中府中，俱為一體；陟罰臧否，不宜異同。若有作奸犯科及為忠善者，宜付有司論其刑賞，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使內(nèi)外異法也。侍中、侍郎郭攸之、費祎、董允等

16、，此皆良實，志慮忠純，是以先帝簡拔以遺陛下：愚以為宮中之事，事無大小，悉以咨之，然后施行，必能裨補闕漏，有所廣益。將軍向?qū)?，性行淑均，曉暢軍事，試用于昔日，先帝稱之曰愚以為營中之事，悉以咨之，必能使行陣和睦，優(yōu)劣得所?！澳?”，是以眾議舉寵為督：親賢臣， 遠小人， 此先漢所以興隆也； 親小人， 遠賢臣， 此后漢所以傾頹也。 先帝在時，每與臣論此事， 未嘗不嘆息痛恨于桓、 靈也。 侍中、尚書、 長史、 參軍，此悉貞良死節(jié)之臣，愿陛下親之、信之，則漢室之隆，可計日而待也。臣本布衣，躬耕于南陽，茍全性命于亂世，不求聞達于諸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顧臣于草廬之中，咨臣以當(dāng)世之事，由是感激，遂許先帝以驅(qū)馳。后值傾覆，受任于敗軍