無菌直接接種法.1

1、有限公司一次性使用無菌檢查方法適用性試驗(yàn)1、樣品信息樣品名稱一次性使用生產(chǎn)廠家有限公司規(guī)格型號批號2、培養(yǎng)基及試劑名稱生產(chǎn)廠家批號硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司20190120胰酪大豆豚液體培養(yǎng)埴青島高科技H業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司20180326胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)埴北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司201812100.9%無菌氯化鈉溶液廣東科倫藥業(yè)有限公司H17030702沙氏葡錮糖液體培養(yǎng)埴青島高科技H業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司20180619沙氏葡錮糖瓊脂培養(yǎng)埴青島高科技H業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司20181120沖洗液及稀釋液0.9%尢菌氯化鈉溶液H170307023、菌種

2、基本信息:菌種名稱菌種來源困種編菌種代數(shù)金黃色葡穩(wěn)球菌上海魯微科技有限公司CMCC (B) 26003第2代大腸埃希菌上海魯微科技有限公司CMCC (B) 44102第2代生抱梭困上海魯微科技有限公司CMCC (B) 64941第2代枯草芽抱桿菌上海魯微科技有限公司CMCC (B) 63501第2代白色念珠菌上海魯微科技有限公司CMCC (F) 98001第2代黑曲霉上海魯微科技有限公司CMCC (F) 98003第2代4、菌液制備:2.1 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆陳y液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基上，3035c培養(yǎng)1824小時，培養(yǎng)物用0.9%無

3、菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液。2.2 接種生抱梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035c培養(yǎng)1824小時，培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液。2.3 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂斜 面培養(yǎng)基上，2025c培養(yǎng)2448小時，培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液。2.4 接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上， 2025c培養(yǎng) 57天，加入35ml含0.05% ( ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將 抱子洗脫。然后

4、，采用適宜的方法吸出抱子懸液至無菌試管內(nèi)， 用含0.05% (ml/ml) 聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌抱子懸液。5、菌落計數(shù):菌種名稱稀釋級別菌落計數(shù)cfu/ml金黃色葡穩(wěn)球菌6級35大腸埃希菌6級28枯草芽抱桿菌6級22生抱梭困6級60白色念珠菌6級45黑曲霉6級386、無菌檢查直接接種法方法適用性試驗(yàn)6.1 供試品制備：取質(zhì)量濃度為9g/L的無菌氯化鈉溶液為浸提介質(zhì)， 按管內(nèi)表面積 每10cm2 流過內(nèi)腔 1ml,浸提介質(zhì)、流量約為 10mL/min 。6.2 試驗(yàn)組：取裝量為15 ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基3管.各接種1ml供試液、 并分別

5、接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生抱梭菌；取裝量為 10 ml的胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基3管，各接種1ml供試液，并分別接種小于100cfu的 枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉。6.3 對照組：取裝量為15 ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基3管，分別接種小于100cfu 的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生抱梭菌；取裝量為 10 ml的胰酪大豆陳培養(yǎng) 基3管，分別接種小于100cfu的枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉。6.4 上述培養(yǎng)基置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過5天，逐日觀察記錄各管試驗(yàn)菌 生長情況。6.5驗(yàn)證結(jié)果A口加工硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆陳培喬基培養(yǎng)時間（d）123451

6、2345金黃色葡錮球菌試驗(yàn)組+/對照組+/大腸埃希菌試驗(yàn)組+/對照組+/生抱梭困試驗(yàn)組+/對照組+/枯草芽抱桿菌試驗(yàn)組/+對照組/+白色念珠菌試驗(yàn)組/+對照組/+黑曲霉試驗(yàn)組/+對照組/+/”表示不適用； “-”表示試驗(yàn)菌生長微弱、緩慢或不生長；“+”表示試驗(yàn)菌生長良好與對照管相比，含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長良好，表明一次性使用輸液器 帶針產(chǎn)品的檢驗(yàn)量在該檢 驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以 忽略不計，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。6.6 供試品無菌檢查方法的確定:取供試品20個，以無菌操作拆開每個包裝，取質(zhì)量濃度為9g/L的無菌氯化鈉溶液 為浸提介質(zhì)，按管內(nèi)表面積每 10cm2 流過內(nèi)腔 1ml,浸提介質(zhì)，流量約為 10mL/min。10個接種于裝量為15 ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，10個接種于10 ml的胰酪大 豆陳液體培養(yǎng)基中。另取1個供試品以無菌操作拆開包裝，取質(zhì)量濃度為9g/L的無 菌氯化鈉溶液為浸提介質(zhì)，按管內(nèi)表面積每 10cm流過內(nèi)腔1ml,浸提介質(zhì)，流量約 為