(一) 白細(xì)胞計數(shù)分享資料

1、1 臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué) 實驗一實驗一 牛鮑計數(shù)板的使用牛鮑計數(shù)板的使用 和白細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞計數(shù) 南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院 檢驗醫(yī)學(xué)中心檢驗醫(yī)學(xué)中心 陸永輝陸永輝2實驗一、實驗一、 白細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù) n1.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)計數(shù)規(guī)成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)計數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。液中白細(xì)胞數(shù)。n2.試劑器材試劑器材 白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亞甲藍(lán)亞甲藍(lán) 3滴滴 加蒸餾水加蒸餾水 至至10

2、0ml3器材器材 改良牛鮑血細(xì)胞計數(shù)板及改良牛鮑血細(xì)胞計數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、帶孔吸頭、1ML刻度刻度移液管、小試管、潔移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、凈軟紗布、干棉球、光學(xué)顯微鏡。光學(xué)顯微鏡。456毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序 操作步驟：操作步驟：n1 采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜，采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)側(cè)或足跟半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。兩側(cè)采血。n2 輕輕按摩采血部位。輕輕按摩采血部位。n3 用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。74 緊捏刺血

3、部位，使其自然充血。緊捏刺血部位，使其自然充血。5 用無菌刺針穿刺取血，動作應(yīng)迅速，深度用無菌刺針穿刺取血，動作應(yīng)迅速，深度 23mm，稍加擠壓以血液流出為宜。，稍加擠壓以血液流出為宜。6 用干棉球擦去第一滴血。用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。按需要依次采血。8 采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。8 微量吸管的使用微量吸管的使用n1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；n2拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排

4、出適量空氣；中指輕微擠壓排出適量空氣；n3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指；n4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準(zhǔn)確），用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準(zhǔn)確），輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度；輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度；n5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血將微量吸管插入小試管底部，三指輕微

5、用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；次，輕搖試管混勻；n6拔出微量吸管棄入污物桶。拔出微量吸管棄入污物桶。9 3.操作步驟操作步驟（1）加稀釋液加稀釋液 用移液管用移液管向小試管內(nèi)加入向小試管內(nèi)加入0.38ml白細(xì)胞稀釋液。白細(xì)胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量吸管采血）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試，拭去管外余血，釋放于小試 管管底部，用上部底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管輕搖試管混勻，靜置等其混勻，靜置等其溶血。溶血。（3）清潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩）清

6、潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。側(cè)支持堤上。（4）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計數(shù)池內(nèi)。細(xì)胞懸液，充入計數(shù)池內(nèi)。靜置靜置2-3min，使細(xì)胞沉于，使細(xì)胞沉于計計數(shù)池底面數(shù)池底面。（5）調(diào)試顯微鏡）調(diào)試顯微鏡 將計數(shù)板放置載物臺上，將計數(shù)板放置載物臺上，選擇（選擇（4 ）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線，轉(zhuǎn)至光器使光線較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線，轉(zhuǎn)至低倍鏡（低倍鏡（10），），調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)光亮光亮 。（6）計數(shù)計數(shù) 低倍鏡下

7、計數(shù)四角低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞個大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞數(shù)上數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。1011血細(xì)胞計數(shù)板的方格n計數(shù)板上下各一個計數(shù)池n計數(shù)區(qū)域分為9個大方格n四角的大方格各劃分為16個中方格n中央大方格劃分為25個中方格n四角的大方格為白細(xì)胞計數(shù)區(qū)n中央大方格四角和正中5個中方格為紅細(xì)胞計數(shù)區(qū)12 結(jié)果計算結(jié)果計算白細(xì)胞總數(shù)白細(xì)胞總數(shù) =4大格白細(xì)胞數(shù)（大格白細(xì)胞數(shù)（N） /410 20 106 = N 20 109/L用用. 109/L（小數(shù)點后一位）表示（小數(shù)點后一位）表示13 注意事項注意事項n 稀釋液，小試管、計數(shù)板稀釋液，小試管、計數(shù)

8、板n 采血采血n 充池充池 n 計數(shù)原則計數(shù)原則n WBC過多過多n WBC過少過少 n WBC校正校正n 顯微鏡調(diào)試顯微鏡調(diào)試 145.注意事項注意事項(1).稀釋液密封保存，防止污染，小試管、計數(shù)板、蓋片稀釋液密封保存，防止污染，小試管、計數(shù)板、蓋片均須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為細(xì)胞。均須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為細(xì)胞。(2).采血時針刺深度必須適當(dāng)，不能過度擠壓，防止組織采血時針刺深度必須適當(dāng)，不能過度擠壓，防止組織液滲入或采血時間太長引起血液凝固。液滲入或采血時間太長引起血液凝固。(3).稀釋液和采血量要準(zhǔn)確，充分混勻，充液適量，無不稀釋液和采血量要準(zhǔn)確，充分混勻，充液適量，無

9、不足、外溢和氣泡，細(xì)胞分布均勻。足、外溢和氣泡，細(xì)胞分布均勻。(4).白細(xì)胞總數(shù)在參考范圍內(nèi)，大方格間的細(xì)胞數(shù)不得相白細(xì)胞總數(shù)在參考范圍內(nèi)，大方格間的細(xì)胞數(shù)不得相差差10個以上，兩次重復(fù)計數(shù)誤差不得超過個以上，兩次重復(fù)計數(shù)誤差不得超過10。(5).白細(xì)胞數(shù)量過高時，可加大稀釋倍數(shù)，白細(xì)胞數(shù)量過白細(xì)胞數(shù)量過高時，可加大稀釋倍數(shù)，白細(xì)胞數(shù)量過低時，可計數(shù)低時，可計數(shù)8個大方格的白細(xì)胞數(shù)或取雙倍血量。個大方格的白細(xì)胞數(shù)或取雙倍血量。15(6).一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多，會計數(shù)在一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多，會計數(shù)在白細(xì)胞總數(shù)內(nèi)，應(yīng)校正。白細(xì)胞總數(shù)內(nèi)，應(yīng)校正。校正公式：白細(xì)胞校正數(shù)校正公式

10、：白細(xì)胞校正數(shù)/L=M（100/100+N）M為未校正前白細(xì)胞數(shù)，為未校正前白細(xì)胞數(shù)，N為在白細(xì)胞分類時，計數(shù)為在白細(xì)胞分類時，計數(shù)100個白細(xì)胞的同時計數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。個白細(xì)胞的同時計數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。(7).調(diào)試顯微鏡調(diào)試顯微鏡將血細(xì)胞計數(shù)板平放于載物臺，低倍鏡處所充計數(shù)池將血細(xì)胞計數(shù)板平放于載物臺，低倍鏡處所充計數(shù)池正中蓋片略上方，向下微調(diào)載物臺（防止壓碎蓋片）正中蓋片略上方，向下微調(diào)載物臺（防止壓碎蓋片）至看清計數(shù)區(qū)域內(nèi)分隔線條為止。至看清計數(shù)區(qū)域內(nèi)分隔線條為止。166.細(xì)胞計數(shù)原則細(xì)胞計數(shù)原則n大方格四邊壓大方格四邊壓線細(xì)胞數(shù)左不線細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)下，n弓形移動弓形移動177.正常參考值正常參考值成人成人 ： （ 4.0-10.0）109/L新生兒：新生兒： （15.0-20.0）109/L188.考核評價考核評價 a. 常規(guī)考核標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)考核標(biāo)準(zhǔn) （RCS）RCS= 100%評價：評價： 白細(xì)胞白細(xì)胞 4.0109/L者，者， RCS30% 白細(xì)胞在（白細(xì)胞在（4.1-14.9）109/L者者 RCS20% 白細(xì)胞白細(xì)胞15.0 109/L者者 RCS15% 超過上述標(biāo)準(zhǔn)者為不合格超過上述標(biāo)準(zhǔn)者為不合格 b. 其他方法其他方法四大格所見白細(xì)胞最大值四大格所見白細(xì)胞最大值最小值最小值