流感實(shí)驗(yàn)室SOP

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)文件編制： 文件編號(hào)：HZCDC/LG/SOP發(fā)布日期：2009年12月15日有效版本：第1版受控狀態(tài)：受控號(hào)：批準(zhǔn)人：標(biāo)準(zhǔn)操作程序目錄文件編號(hào) 文件名稱 頁(yè)碼HZCDC/LG/SOP/01實(shí)驗(yàn)室管理制度 3HZCDC/LG/SOP/02人員管理與培訓(xùn)制度 5HZCDC/LG/SOP/03 儀器設(shè)備管理制度 6HZCDC/LG/SOP/04檔案管理制度 8HZCDC/LG/SOP/05標(biāo)本的采集、運(yùn)送與保存 10HZCDC/LG/SOP/06 標(biāo)本的接受、登記和處理 14HZCDC/LG/SOP/07實(shí)驗(yàn)室清理與消毒 15HZCDC

2、/LG/SOP/08廢棄物消毒處理 17HZCDC/LG/SOP/09個(gè)體防護(hù)與生物安全 19HZCDC/LG/SOP/10生物安全柜的使用與維護(hù) 22HZCDC/LG/SOP/11 離心機(jī)的使用與維護(hù) 24HZCDC/LG/SOP/12 普通冰箱的使用與維護(hù) 26HZCDC/LG/SOP/13 移液器的使用與維護(hù)程序 28HZCDC/LG/SOP/14 振蕩器的使用與維護(hù) 31HZCDC/LG/SOP/15 低溫冰柜的使用與維護(hù) 32HZCDC/LG/SOP/16 高壓滅菌器的使用與維護(hù) 34HZCDC/LG/SOP/17 ABI SteponePlusTM Real-Time PCR Sy

3、stem的使用與維護(hù) 36HZCDC/LG/SOP/18 ABI RT-PCR儀 9700型的使用與維護(hù) 40HZCDC/LG/SOP/19 凝膠成像系統(tǒng)的使用與維護(hù) 42HZCDC/LG/SOP/20 CO2培養(yǎng)箱的使用與維護(hù) 44HZCDC/LG/SOP/21 顯微鏡的使用與維護(hù) 47HZCDC/LG/SOP/22 核酸提取標(biāo)準(zhǔn)操作程序 49HZCDC/LG/SOP/23 Real Time-PCR操作方法 51HZCDC/LG/SOP/24 MDCK細(xì)胞培養(yǎng) 56HZCDC/LG/SOP/25 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇 59標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/01第 1

4、頁(yè) 共 2 頁(yè)實(shí)驗(yàn)室管理制度第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的日常管理。2.范圍適用于流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室所有工作人員。4.任務(wù)4.1培訓(xùn)縣級(jí)疾控中心送檢標(biāo)本的安全采集和運(yùn)送環(huán)節(jié)。4.2.每年接受?chē)?guó)家流感核酸標(biāo)本考核工作。4.3對(duì)流感散發(fā)、爆發(fā)病例及稍點(diǎn)醫(yī)院送檢流感咽拭子標(biāo)本進(jìn)行PCR檢測(cè)，并在三個(gè)工作日內(nèi)報(bào)告結(jié)果，做好標(biāo)本的登記和送檢工作。4.4開(kāi)展流感病毒毒株細(xì)胞分離培養(yǎng)工作。4.5組織開(kāi)展正常人群流感抗體的免疫水平監(jiān)測(cè)工作。4.6做好流感實(shí)驗(yàn)室內(nèi)儀器的使用記錄，并定期檢查維護(hù)儀器。4.7做好流感實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檔案管理工作。5.內(nèi)容5.1 實(shí)驗(yàn)室人員檔

5、案與設(shè)備檔案分別保存于實(shí)驗(yàn)室及質(zhì)量科檔案柜中，并由專人管理。5.2 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)符合人員管理與培訓(xùn)制度中的要求與規(guī)定。5.3 嚴(yán)格按照設(shè)備管理制度對(duì)所用儀器進(jìn)行管理。5.4 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)本的采集與保存、標(biāo)本的接收、登記和處理的要求與規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。5.5 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)熟知個(gè)體防護(hù)與生物安全措施。5.6 實(shí)驗(yàn)室工作人員在實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)后均應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室的清理與消毒制度對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清理與消毒。5.7 實(shí)驗(yàn)室工作人員對(duì)于流感抗體檢測(cè)的結(jié)果與報(bào)告應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行保密程序。5.8 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)認(rèn)真做好實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所涉及的各項(xiàng)記錄工作。5.9 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)每半年至一年進(jìn)行一

6、次健康狀況記錄。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/02第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)人員管理與培訓(xùn)制度第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的保證實(shí)驗(yàn)室充分的技術(shù)支持，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室人員管理。2.范圍適用于流感實(shí)驗(yàn)室工作人員。3.責(zé)任人科室負(fù)責(zé)人。4.內(nèi)容4.1 實(shí)驗(yàn)室目前由1名高級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱、2名中級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱和2名初級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱的檢驗(yàn)人員，均接受過(guò)省疾病預(yù)防控制中心的技術(shù)培訓(xùn)，并獲得合格證書(shū)。4.2 科室負(fù)責(zé)人應(yīng)了解所有工作人員。在安排工作區(qū)域時(shí)，要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境做安全檢查。4.3 新調(diào)入、外來(lái)合作、進(jìn)修、實(shí)習(xí)的人員在進(jìn)

7、入實(shí)驗(yàn)室之前須經(jīng)過(guò)科室負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)。4.4 對(duì)新上崗人員實(shí)驗(yàn)室工作的潛在危險(xiǎn)，進(jìn)行安全教育。4.5 在崗工作人員須參加本科室的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)每月1-2次。4.6 在崗工作人員每年參加省級(jí)以上繼續(xù)教育學(xué)習(xí)至少1次。4.7 每年舉辦科內(nèi)業(yè)務(wù)講座1-2次。4.8 實(shí)驗(yàn)室每年發(fā)表專業(yè)論文或業(yè)務(wù)總結(jié)至少1篇。4.9 執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室工作人員年度采咽拭子檢測(cè)流感抗體和備案制度，工作人員咽拭子標(biāo)本應(yīng)長(zhǎng)期保留。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/03第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)儀器設(shè)備管理制度第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的妥善管理儀器設(shè)備并保證其良好的運(yùn)轉(zhuǎn)設(shè)備管理制度。2.范圍適

8、用于流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室備案儀器設(shè)備。3.責(zé)任人科室負(fù)責(zé)人。4.內(nèi)容4.1 對(duì)于儀器設(shè)備的一般情況進(jìn)行登記，包括：名稱、制造商、型號(hào)、序號(hào)、接收日期、啟用日期、目前放置地點(diǎn)、接收狀態(tài)(全新、改裝等)，填寫(xiě)儀器設(shè)備一覽表。4.2 儀器設(shè)備的說(shuō)明書(shū)復(fù)印件及校準(zhǔn)資料，存放于設(shè)備檔案文件中，由質(zhì)量管理科保管。4.3 儀器設(shè)備的使用、維修須及時(shí)填寫(xiě)儀器使用記錄和設(shè)備維護(hù)記錄。4.4 有問(wèn)題的儀器設(shè)備加貼明顯的紅色停用標(biāo)識(shí)，標(biāo)識(shí)上應(yīng)有停用日期及原因?？砂釀?dòng)的儀器移至質(zhì)管科報(bào)修，不可移動(dòng)的設(shè)備原地待修，直至修復(fù)校驗(yàn)后重新標(biāo)識(shí)。4.5 儀器設(shè)備的報(bào)廢處理：因使用壽命、損壞、故障導(dǎo)致儀器設(shè)備不能滿足檢測(cè)需要時(shí)，該設(shè)備

9、即行報(bào)廢。由管理人員填寫(xiě)報(bào)廢申請(qǐng)，科室質(zhì)量負(fù)責(zé)人核實(shí)，質(zhì)管科批準(zhǔn)后由質(zhì)量負(fù)責(zé)人在設(shè)備檔案中簽名注銷(xiāo)。4.6 儀器設(shè)備實(shí)行嚴(yán)格的分區(qū)專用。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/04第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)檔案管理制度第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的妥善管理各種資料。2.范圍。凡在流感檢測(cè)業(yè)務(wù)管理、技術(shù)操作等活動(dòng)中形成的檔案和資料，包括檢測(cè)樣品卡、各類檢測(cè)原始記錄、各類檢驗(yàn)報(bào)告、儀器使用記錄、實(shí)驗(yàn)室工作人員健康體檢記錄及質(zhì)量申訴意見(jiàn)的函文等，都屬于本制度的管理范圍。3.責(zé)任人適用于流感實(shí)驗(yàn)室檔案管理員。4.內(nèi)容 4.1 流感抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要有專人負(fù)責(zé)妥善保

10、存各種實(shí)驗(yàn)記錄、感染者檔案，不得擅自修改和銷(xiāo)毀。嚴(yán)格保密制度，未經(jīng)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)許可，不得向無(wú)關(guān)人員和單位提供任何情況。 4.2 實(shí)驗(yàn)室要指定專人負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室檔案的管理工作，實(shí)驗(yàn)室對(duì)工作檔案要按內(nèi)容進(jìn)行編目整理、歸檔保存。 4.3 每位實(shí)驗(yàn)室人員都有責(zé)任認(rèn)真主動(dòng)做好材料的收集和整理工作，并及時(shí)提供給實(shí)驗(yàn)室檔案管理人。4.4 若實(shí)驗(yàn)室撤消或合并，應(yīng)及時(shí)做好工作檔案的移交工作，以保持檔案的完整性和連續(xù)性。5.實(shí)驗(yàn)室工作檔案內(nèi)容5.1 實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃、建設(shè)的各種文件和資料。5.2 實(shí)驗(yàn)室各類工作人員的姓名、性別、年齡、職稱、專業(yè)分工、獎(jiǎng)懲、培訓(xùn)等。5.3 實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)過(guò)程中各種文件和資料,包括:培訓(xùn)的相關(guān)

11、書(shū)籍及光盤(pán)等。5.4 儀器設(shè)備的說(shuō)明書(shū)、維修記錄、技術(shù)檔案和開(kāi)機(jī)使用記錄及大型設(shè)備管理人員名單等。 5.5 實(shí)驗(yàn)室工作的各種統(tǒng)計(jì)報(bào)表。 5.6 上級(jí)主管部門(mén)下發(fā)的實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理文件和本實(shí)驗(yàn)室制定的規(guī)章制度。6.保存6.1要妥善保存檢測(cè)記錄和各種檔案，不得擅自修改和銷(xiāo)毀。記錄保存期不少于10年，國(guó)家法律、法規(guī)另有規(guī)定的，依照有關(guān)規(guī)定執(zhí)行，特殊情況需長(zhǎng)期保存的另立冊(cè)存檔。6.2 超過(guò)保存期的檢測(cè)資料需銷(xiāo)毀時(shí)，要列出銷(xiāo)毀清單，科長(zhǎng)復(fù)核、簽名報(bào)中心質(zhì)量保證負(fù)責(zé)人審批后銷(xiāo)毀。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/05第 1 頁(yè) 共 4 頁(yè)標(biāo)本的采集、運(yùn)送和保存第 1 版 頒布日期

12、： 2009年12月15日1.目的正確使用采集、運(yùn)送與使用的方法，保證采集的標(biāo)本符合檢測(cè)條件。2.范圍適用于流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.程序4.1 生物安全要求 采集疑似人高致病性流感病例和不明原因肺炎病人呼吸道標(biāo)本時(shí)，采集人員需以BSL-3級(jí)防護(hù)；一般流感樣病例，呼吸道標(biāo)本的采集以BSL-2級(jí)防護(hù)。具 體參見(jiàn)“生物安全個(gè)人防護(hù)SOP”。4.2 材料4.2.1 無(wú)菌拭子：聚丙烯纖維頭的拭子4.2.2 15 mL 離心管4.2.3 常用的采樣液配制：常用的上呼吸道采樣液有：pH7.47.6 的Hanks或MEM液400mL。加入慶大霉素(50 mg/mL)0.8mL，多粘菌B(

13、250 g/mL)3.2mL。加入抗菌素以后重新調(diào)節(jié)pH值為7.4，配制好以后，分裝每個(gè)采樣管23mL，-20凍存。 4.2.4 壓舌板4.3 實(shí)驗(yàn)步驟4.3.1 采集呼吸道標(biāo)本 呼吸道標(biāo)本：包括鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液。最佳采集時(shí)間為發(fā)病后的前3天，不超過(guò)7天。（1）鼻拭子：采集者左手扶住患者的下頜部，右手持無(wú)菌拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以另一拭子擦拭另側(cè)鼻孔。將拭子頭浸入采樣液中，在采樣液中擠壓拭子頭部數(shù)次，用力折斷拭子的尾部，將拭子的尾部棄去。（2）咽拭子：左手用壓舌板壓住患者的舌頭。右手持無(wú)菌拭子擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入采樣液中，

14、在采樣液中擠壓拭子頭部數(shù)次，用力折斷拭子的尾部，將拭子的尾部棄去。亦可將鼻、咽拭子收集 于同一采樣管中。（3）漱口液：用10mL生理鹽水漱喉。漱時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉(zhuǎn)動(dòng)。然后，用平皿或燒杯收集洗液。（4）鼻洗液：讓患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5 mL生理鹽水注入一 側(cè)鼻孔，囑患者同時(shí)發(fā)K音以關(guān)閉咽腔。然后讓患者低頭使生理鹽水流 出，用平皿或燒杯收集洗液。重復(fù)此過(guò)程洗兩側(cè)鼻孔。（5）鼻咽抽取物：常用于采集氣管和支氣管分泌物。將真空泵與導(dǎo)尿管相 連。將導(dǎo)尿管插入鼻腔與上腭平行，打開(kāi)真空裝置，緩慢做漩渦運(yùn)動(dòng)，同樣收集另外一個(gè)鼻孔。用采樣液3mL涮洗導(dǎo)尿管。4.3.2

15、將采集好的標(biāo)本注明：編號(hào)，標(biāo)本種類，采集日期。4.3.3 采集好的標(biāo)本24h內(nèi)放置 4保存。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/06第 1 頁(yè) 共 1 頁(yè)標(biāo)本的接收、登記和處理第 1版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的嚴(yán)格標(biāo)本接收的查對(duì)制度，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.范圍適用于流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.內(nèi)容4.1 對(duì)轄區(qū)內(nèi)的送檢標(biāo)本進(jìn)行嚴(yán)格的查對(duì)和驗(yàn)收，編號(hào)前，工作人員應(yīng)認(rèn)真查對(duì)姓名、性別、年齡、家庭住址、身份證號(hào)碼、聯(lián)系方式等并認(rèn)真填寫(xiě)流感標(biāo)本接收記錄一覽表。4.2 對(duì)嚴(yán)重污染標(biāo)本應(yīng)做記錄，需重新采集標(biāo)本者應(yīng)正確及時(shí)地重新采樣，以免延誤病

16、人檢測(cè)的結(jié)果報(bào)告。4.3 對(duì)書(shū)寫(xiě)不清楚的申請(qǐng)單，當(dāng)事者要及時(shí)與檢驗(yàn)人員聯(lián)系(可電話)，明確受檢者姓名、性別、年齡、登記號(hào)碼和檢驗(yàn)項(xiàng)目等。4.4 所需標(biāo)本類型為鼻、咽拭子標(biāo)本放運(yùn)送液。4.5 下級(jí)送檢來(lái)的標(biāo)本要與送檢單分開(kāi)放，送檢單一定要認(rèn)真仔細(xì)地填寫(xiě)完整，樣本要合格并切要達(dá)到所需的量。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/07第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)實(shí)驗(yàn)室清理與消毒第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的避免實(shí)驗(yàn)室污染，確保人員健康與結(jié)果準(zhǔn)確。2.范圍流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.內(nèi)容4.1 根據(jù)衛(wèi)生部消毒技術(shù)規(guī)范的要求和規(guī)定，本實(shí)驗(yàn)室選用消毒

17、液為有效氯溶液，根據(jù)不同的情況使用不同的濃度。4.2 流感檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室消毒液配制。4.2.1 實(shí)驗(yàn)室消毒液應(yīng)即用即配，本實(shí)驗(yàn)室使用含氯消毒劑。4.2.2 物體表面消毒液：濃度為500mgL。4.2.3 地面消毒液：濃度為1000mgL；4.2.4 生物廢棄物消毒液：濃度為10000mgL。4.2.5 物體表面的消毒:桌椅等每天開(kāi)始工作前用濕布抹擦一次,下班時(shí)用500mg/L有效氯溶液抹擦一次。地面用濕拖把拖擦一次，下班時(shí)用1000mgL有效氯溶液拖擦。禁止干抹干掃，抹布和拖把等清潔工具各科室專用，不得混用，用后洗凈晾干。4.2.6 儀器表面和工作臺(tái)面用紫外線消毒照射消毒或75酒精消毒。4.2.7

18、 若被明顯污染，如標(biāo)本外溢、濺潑或器皿打破、灑落于表面，應(yīng)立即用10000mgL有效氯溶液灑于污染表面，并使消毒液浸過(guò)污染物表面，保持3060分鐘再擦。拖把用后浸于l0000mgL有效氯溶液內(nèi)至少1小時(shí)。4.2.8 若己知被陽(yáng)性標(biāo)本污染，應(yīng)用10000mgL有效氯溶液擦拭，消毒至少30分鐘 。4.3 空氣消毒：紫外線照射至少30分鐘或75酒精噴霧消毒。4.4 實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行至少30分鐘的紫外線照射并通風(fēng)。4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后使用500mgL的有效氯溶液對(duì)各區(qū)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、地面和進(jìn)行擦洗。然后打開(kāi)室內(nèi)、移動(dòng)紫外燈照射并打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備通風(fēng)至少30分鐘。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG

19、/SOP/08第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)廢棄物消毒處理第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的防止污染廢物造成的交叉感染及環(huán)境污染。2.范圍流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)后的全部污染廢物及剩余標(biāo)本和試劑盒剩余廢棄物品。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。 4.處理方法4.1 廢棄物處置應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB 19489-2004）和消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）。對(duì)實(shí)驗(yàn)室用過(guò)的全部廢棄物品，包括剩余血樣標(biāo)本，留樣標(biāo)本分離血清后剩余的血凝塊，剩余廢棄的試劑盒陽(yáng)性對(duì)照血清，用過(guò)的酶標(biāo)反應(yīng)板，吸頭，一次性隔離衣，手套等置于一次性醫(yī)源垃圾污物袋中，用HI V專用的全自動(dòng)高壓消毒鍋121高壓消毒30min

20、后，裝袋于焚燒爐中徹底焚燒后填寫(xiě)一次性醫(yī)療廢物銷(xiāo)毀記錄。4.2 對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、臺(tái)面、地面可用2-5過(guò)氧乙酸、次氯酸鈉（含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10-30min，實(shí)驗(yàn)用金屬器械用70%-75%的乙醇浸泡30min。4.3 對(duì)生物安全柜的消毒遵照生物安全柜的使用說(shuō)明處理。4.4 對(duì)實(shí)驗(yàn)廢液的消毒處理：ELISA法檢測(cè)中洗板機(jī)廢液瓶中的廢液，加入含氯消毒劑使次氯酸鈉含量達(dá)到5000mg/L，混勻后放置30min以上，再棄入污水池中。禁止在工作狀態(tài)下于廢液瓶中加入揮發(fā)性消毒劑，以免揮發(fā)性酸、堿氣體吸入機(jī)器內(nèi)腐蝕損壞儀器。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZC

21、DC/LG/SOP/09第 1 頁(yè) 共 3 頁(yè)個(gè)體防護(hù)與生物安全第1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的保證實(shí)驗(yàn)室和工作人員的安全與健康。2.范圍流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.內(nèi)容：4.1 實(shí)驗(yàn)室安全4.1.1 每年至少一次對(duì)實(shí)驗(yàn)室電器設(shè)備的接地和極性、線路完整性進(jìn)行年度檢查并建立檔案記錄。4.1.2 可移動(dòng)設(shè)備應(yīng)接地或采用更先進(jìn)的辦法防止觸電，但全部塑封無(wú)法接地的設(shè)備除外。新設(shè)備在使用前也進(jìn)行同樣檢查。4.1.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有足夠的插座，分面要合理，以減少在插座上接上其它多余的插座和避免拖拉過(guò)多的電線。4.1.4 除校準(zhǔn)儀器外，儀器不得接電維修。實(shí)驗(yàn)室工作人員不得維

22、修實(shí)驗(yàn)室電力系統(tǒng)。以上所有工作由單位電工室工作人員執(zhí)行。4.1.5 按消防部門(mén)規(guī)定在實(shí)驗(yàn)室擺放滅火器并由總務(wù)科負(fù)責(zé)管理，按有效期每5年更換一次。對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行防火安全訓(xùn)練。遇到失火撥打電話119以求得幫助并開(kāi)始從失火區(qū)撤離。4.1.6 下班時(shí)注意關(guān)好水電、門(mén)窗。4.2 生物防護(hù)4.2.1 實(shí)驗(yàn)室工作人員要熟悉實(shí)驗(yàn)室清理和消毒制度與安全與生物防護(hù)制度。4.2.2 采集標(biāo)本時(shí)要注意安全，直接接觸病人血液和體液的操作應(yīng)戴雙層乳膠手套。4.2.3 不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃東西、喝飲料、吸煙、化妝與會(huì)客。4.2.4 實(shí)驗(yàn)室用品不得用于其它用途，不可將私人物品帶入實(shí)驗(yàn)室。4.2.5 工作時(shí)要戴手套、穿工作衣

23、和隔離衣，手套破損應(yīng)立即丟棄、洗手、更換。4.2.6 不能用戴著手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵、頭發(fā)等。 4.2.7 盡量避免使用尖銳物品和器具，宜用不易破碎的材料制品。4.2.8 工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動(dòng)水洗手。4.2.9 按實(shí)驗(yàn)室清潔、消毒制度對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔消毒。4.2.10 生物污染廢棄物臨時(shí)存放地點(diǎn)要有明顯的標(biāo)志。5.應(yīng)急處理5.1 意外：是指發(fā)生了未導(dǎo)致個(gè)人傷害的危險(xiǎn) 。5.1.1 感染性液體濺出或滲漏，首先用紙巾或吸附性材料覆蓋，用消毒液(如0.5-1.0%次氯酸鈉)噴灑在濺出液周?chē)Ｈ缓笙疽簽⒃谖讲牧仙?0分鐘。5.1.2 有潛在傳染性

24、的液體或其他體液，棄手套，洗手，換新手套，禁止戴手套接觸眼，鼻，粘膜和皮膚，禁止戴手套離開(kāi)工作區(qū)；5.1.3 衣物污染，盡快移開(kāi)隔離衣以防止感染物觸及皮膚并防止進(jìn)一步擴(kuò)散。棄保護(hù)手套，洗手，更換隔離衣及手套，將已經(jīng)污染的隔離衣放入高壓滅菌器消毒，清理發(fā)生污染的地方。如果個(gè)人衣物被污染，應(yīng)立即將污染處浸入75的乙醇中，更換干凈的衣物。5.2 事故：是指發(fā)生了人身傷害。5.2.1 因?yàn)楦腥拘砸蜃拥奶匦?，任何一種小的損傷，包括皮膚的破損或刺傷等，都可能與傳染性物質(zhì)接觸，導(dǎo)致嚴(yán)重后果。5.2.2 皮膚被針頭刺傷，切割傷或標(biāo)本濺出污染皮膚，用肥皂和水徹底沖洗傷口，盡量擠出損傷處的血液。5.2.3 樣品或

25、檢測(cè)試劑濺入眼內(nèi)，立即用水連續(xù)沖洗。濺入嘴內(nèi)，先吐出殘留的液體后，用水反復(fù)漱口。5.2.4 患有皮膚疾患，尤其有皮膚潰爛，破損情況要及時(shí)診治。5.2.5 遇有高危的意外事故發(fā)生，除進(jìn)行局部處理外，同時(shí)應(yīng)立即采取預(yù)防措施，包括對(duì)其隨訪，流感檢測(cè)，休息并暫時(shí)離開(kāi)原崗位三個(gè)月，按醫(yī)囑服用抗LG輔物進(jìn)行預(yù)防。5.2.6 遇有意外事故，應(yīng)及時(shí)分別以口頭和書(shū)面形式報(bào)告上級(jí)部門(mén)。5.2.7 遇有意外事故，接觸者應(yīng)在接觸當(dāng)時(shí)，接觸后六周，三個(gè)月，六個(gè)月和十二個(gè)月各采血檢查一次。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/10第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)生物安全柜的使用與維護(hù)第 1 版 頒布日期： 2

26、009年12月15日1.目的正確使用及維護(hù)生物安全柜，保證檢測(cè)工作的正常進(jìn)行。2.范圍ESCO-Class BSC生物安全柜。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.內(nèi)容4.1 先接通電源，打開(kāi)生物安全柜的電源開(kāi)關(guān)。4.2 將所需的實(shí)驗(yàn)用具（如：加液器、盛放吸頭的廢物缸等）放入生物安全柜內(nèi)。4.3 將玻璃移門(mén)完全關(guān)閉后，再按“UVW”鍵開(kāi)啟紫外燈，實(shí)施紫外殺菌操作30分鐘后將自動(dòng)關(guān)閉紫外燈，并顯示“UV END”提示信息。在殺菌過(guò)程中，一旦打開(kāi)移門(mén)或開(kāi)啟熒光燈，系統(tǒng)就會(huì)自動(dòng)關(guān)閉紫外燈。4.4 殺菌操作結(jié)束后，打開(kāi)移門(mén)至“SASH HEIGHT”安全高度，按“送風(fēng)機(jī)”鍵啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)運(yùn)行，為了實(shí)現(xiàn)工作區(qū)域的自

27、凈，保持送風(fēng)十分鐘后再開(kāi)始正式作業(yè)。4.5 按“照明”鍵開(kāi)啟日光燈，將移門(mén)高度始終保持在“SASH HEIGHT”安全高度，開(kāi)始正式作業(yè)。4.6 在作業(yè)時(shí)，若使用插座，務(wù)必在“切斷備用插座電源”的狀態(tài)下，將輔助設(shè)備的電源插頭插入“備用插座”，再按“插座”鍵接通備用插座電源；使用結(jié)束時(shí)，必須再次按“插座”鍵，切斷插座電源。所用輔助設(shè)備的功耗不允許超過(guò)插座的最大負(fù)荷（見(jiàn)插座上的標(biāo)示）。4.7 作業(yè)結(jié)束時(shí)，保持風(fēng)機(jī)運(yùn)行十分鐘后再關(guān)閉。按住“送風(fēng)機(jī)”鍵持續(xù)3秒鐘以上，可關(guān)閉風(fēng)機(jī)。5.注意事項(xiàng)5.1 在殺菌時(shí)作業(yè)人員必須遠(yuǎn)離生物安全柜，以免紫外線對(duì)人身體造成傷害。5.2 移門(mén)高度不要超過(guò)“SASH HE

28、IGHT”安全線高度，否則將有氣流不能平衡的危險(xiǎn)，可能會(huì)引起不潔氣溶膠外溢，而危害作業(yè)者健康。若超出將會(huì)自動(dòng)報(bào)警，按“靜音”鍵取消報(bào)警聲音。5.3 操作結(jié)束時(shí)，務(wù)必先關(guān)閉送風(fēng)機(jī)，等待風(fēng)機(jī)停止運(yùn)轉(zhuǎn)后，再切斷生物安全柜的電源。以免造成變頻器等器件損壞。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/11第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)離心機(jī)的使用與維護(hù)第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的正確使用及維護(hù)，保證檢測(cè)工作的正常進(jìn)行2.范圍Thermo.Heraeus高速低溫離心機(jī)3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員4.內(nèi)容4.1 開(kāi)箱后，將離心機(jī)放置于桌或平面臺(tái)板上，使離心機(jī)底面四只橡膠機(jī)腳與桌

29、面接觸，均勻受力。4.2 插上電源插座，按下電源開(kāi)頭（開(kāi)頭在離心機(jī)背面），接通電源。4.3 按打開(kāi)鍵，打開(kāi)門(mén)蓋（未接通電源時(shí)，右側(cè)面的小孔處用隨機(jī)工具往里頂，打開(kāi)門(mén)蓋）。將離心室泡沫盒內(nèi)的掛架插入轉(zhuǎn)子體槽內(nèi)（注意：門(mén)未打開(kāi)，離心室泡沫盒未出離心室前切勿開(kāi)機(jī)，否則將使電機(jī)損壞）。離心管加液放入不銹鋼管套（離心管試液目測(cè)均勻）。離心管必須成偶數(shù)對(duì)稱放置，否則會(huì)產(chǎn)生振動(dòng)和噪聲。4.5轉(zhuǎn)速、時(shí)間、溫度4.5.1 設(shè)置轉(zhuǎn)速：按轉(zhuǎn)速鍵及/鍵，選擇離心機(jī)本次工作的轉(zhuǎn)速；根據(jù)需要轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)速單位：r/min或g/min。4.5.2 設(shè)置時(shí)間：按時(shí)間鍵及/，選擇離心機(jī)本次工作的時(shí)間（最長(zhǎng)時(shí)間為99分鐘）。時(shí)間為倒計(jì)

30、時(shí)。4.5.3 設(shè)置溫度：按溫度鍵及/，選擇離心機(jī)本次工作的溫度。4.5.4 當(dāng)上述三個(gè)步驟完成后，關(guān)上離心機(jī)蓋，按START鍵，離心機(jī)開(kāi)始運(yùn)行。4.5.5 在運(yùn)行中，離心機(jī)轉(zhuǎn)速逐漸上升至工作轉(zhuǎn)速；時(shí)間顯示為倒計(jì)時(shí)。4.5.6 離心時(shí)間倒計(jì)時(shí)到0或運(yùn)行途中按STOP鍵，離心機(jī)停止運(yùn)轉(zhuǎn)。4.5.7 按打開(kāi)鍵，打開(kāi)門(mén)蓋，取出離心管。4.5.8 關(guān)斷電源開(kāi)頭，離心機(jī)斷電。5.注意事項(xiàng)5.1 離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開(kāi)蓋。5.2 安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。5.3 離心管加液應(yīng)稱量平衡，若加液差異過(guò)大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查

31、，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入。5.4 若運(yùn)行時(shí)有異常響聲或有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。5.5 電源必須有接地線。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/12第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)普通冰箱的使用與維護(hù)第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的正確使用及維護(hù)，保證檢測(cè)工作的正常進(jìn)行。2.范圍BCD-216T XZ型海爾普通冰箱。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員4.內(nèi)容4.1 接通電源（220伏），先不要立即放入物品，通常讓冰箱空載運(yùn)行一段時(shí)間，待冰箱內(nèi)部充分冷卻下來(lái)后，再放入需冷凍或冷藏的物品，正式啟用冰箱。4.2 選擇冰箱的工作方式：4.

32、2.1 人工智慧方式：如無(wú)特殊需求，建議使用此方式。按一下人工智慧按鍵，人工智慧指示燈亮起，此時(shí)冰箱自動(dòng)工作。4.2.2 人為調(diào)節(jié)方式：可以根據(jù)存儲(chǔ)物品的需要進(jìn)行速凍，軟冷凍保鮮室及冷藏室溫度的設(shè)定與調(diào)節(jié)。4.2.3取放物品時(shí)動(dòng)作要快，不要長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)著門(mén)，開(kāi)關(guān)門(mén)時(shí)的動(dòng)作要輕。5.注意事項(xiàng)5.1 溫度值設(shè)定改變時(shí)，箱內(nèi)溫度需經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后才能達(dá)到平衡。且這段時(shí)間的長(zhǎng)短，取決于溫度設(shè)定值改變的大小、周?chē)h(huán)境溫度的高低、開(kāi)門(mén)頻次及箱內(nèi)存放物品的多少等。5.2 不要將過(guò)熱的物口放入冰箱內(nèi)，等冷卻至室溫后，再放入冰箱。5.3 一定要保持出水口暢通，使化霜水通暢地經(jīng)此處流出，堵塞時(shí)，請(qǐng)使用附件中的透孔銷(xiāo)進(jìn)行

33、疏通。5.4 定時(shí)除霜，每年至少兩次。除霜時(shí)，切斷電源，切記不可使用機(jī)械工具或其它方式進(jìn)行除霜，以免損壞冰霜。5.5 冰霜啟用后，一般情況下不要停用冰箱，以免影響冰箱使用壽命。如要停機(jī)，拔下電源后，至少保持間隔五分鐘，才能再次插電。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/13第 1 頁(yè) 共 3 頁(yè)移液器的使用與維護(hù)第 1版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的正確使用及維護(hù)移液器，保證檢測(cè)工作的正常進(jìn)行。2.范圍各種型號(hào)的移液器。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.內(nèi)容4.1 根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器，可調(diào)式移液器應(yīng)在允許容量范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。4.2 首先選擇一支合適的吸頭

34、安放在移液器套筒上。使用大體積移液器(如5000l以上)時(shí)必須在套筒上加插一過(guò)濾芯，稍加扭轉(zhuǎn)地壓緊吸頭使之與套筒間無(wú)空氣間隙。未裝吸頭的移液器絕不可用來(lái)吸取任何液體。4.3 把按鈕壓至第一停點(diǎn)。垂直握持移液器，使吸頭浸入液樣中，浸入液體深度視型號(hào)而定。4.4 緩慢、平穩(wěn)地松開(kāi)按鈕，吸液樣。等一秒鐘，然后將吸頭提離液面。用一次性吸水紙抹去吸頭外面可能附著的液滴。小心勿觸及吸頭口。4.5 將吸頭貼到容器內(nèi)壁并保持lO-40度傾斜。4.6 放液4.6.1 平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn)。等一秒鐘后把按鈕壓到第二停點(diǎn)以排出剩余液體。4.6.2 壓住按鈕，同時(shí)提起移液器，使吸頭貼容器壁擦過(guò)。4.6.3 按吸頭

35、彈射器除去吸頭。4.6.4 松開(kāi)按鈕。4.7 當(dāng)裝上一個(gè)新吸頭(或改變吸取的容量值)時(shí)應(yīng)預(yù)洗吸頭，先吸入一次液樣并將之排回原容器中。預(yù)洗新吸頭能有效提高移液的精確度和重現(xiàn)性。這是因?yàn)榈谝淮挝〉囊后w會(huì)在吸頭內(nèi)壁形成液膜，導(dǎo)致計(jì)量誤差。而周一吸頭在連續(xù)操作時(shí)液膜相對(duì)保持不變，故第二次吸液時(shí)誤差即可消除。4.8 排放致密或粘稠液體時(shí)，宜在第一停點(diǎn)多等一兩秒鐘再壓到第二停點(diǎn)。5.注意事項(xiàng)5.1 在取液前所取液體應(yīng)在室溫（15-25）平衡：若吸液溫度與室溫有異時(shí)將吸頭預(yù)洗多次再用。注意移液溫度不得超過(guò)70。5.2 吸頭浸入液體深度要合適，吸液過(guò)程盡量保持不變。5.3 在吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液

36、體濺到移液器頭上。打出液體后不應(yīng)松開(kāi)按鈕，將吸頭壓掉后再將拇指松開(kāi)，避免液體回吸。5.4 在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過(guò)猛，并注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過(guò)其可調(diào)范圍。5.5 連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣移液過(guò)程中應(yīng)注意吸頭不能觸及其它物品，以免被污染。吸頭盒(架子)、廢液瓶、所取試劑及移液的標(biāo)本管應(yīng)擺放合理，以方便操作過(guò)程、避免污染為原則。5.6 改吸不同液體、標(biāo)本或試劑前要換新吸頭；發(fā)現(xiàn)吸頭內(nèi)有殘液時(shí)要換新吸頭。5.7 新吸頭使用前要預(yù)洗。5.8 吸頭內(nèi)有液體時(shí)不可將移液器平放、倒轉(zhuǎn)，以防液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)。5.9 連續(xù)可調(diào)式移液器在使用完畢后應(yīng)置于移液器架上，遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。標(biāo) 準(zhǔn) 操

37、 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/15第 1 頁(yè) 共 1 頁(yè)振蕩器的使用與維護(hù)第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的正確使用及維護(hù)振蕩器，保證檢測(cè)工作的正常進(jìn)行2.范圍其林貝爾VDRTEX-5微量振蕩器3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員4.內(nèi)容4.1 微量振蕩器應(yīng)置于堅(jiān)固的水平臺(tái)上。4.2 打開(kāi)電源。4.3 將標(biāo)本管垂直或略為傾斜地放置在振蕩盤(pán)上，開(kāi)機(jī)振蕩數(shù)秒或數(shù)分鐘直至標(biāo)本完全混勻后，關(guān)機(jī)。4.4 切忌將標(biāo)本管平躺或倒轉(zhuǎn)振蕩，以免管內(nèi)液體滲出。4.5 保持振蕩器清潔、干燥。4.6 使用完畢后，關(guān)上電源。5.注意事項(xiàng)5.1 儀器備有熔絲保險(xiǎn)裝置，在超載時(shí)能自動(dòng)斷路，只需要

38、更換熔絲管，即可正常運(yùn)轉(zhuǎn)。5.2 儀器可在8小時(shí)內(nèi)連續(xù)工作。5.3 儀器必須防潮，妥善保管。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/15第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)低溫冰箱的使用與維護(hù)第 2 版 第 1 次修改頒布日期： 2007年11月15日1.目的正確使用及維護(hù)DW-40L262海爾低溫保存箱，保證檢測(cè)工作的正常進(jìn)行。2.范圍DW-40L262海爾低溫保存箱。3.責(zé)任人實(shí)驗(yàn)室工作人員。4.內(nèi)容4.1 將低溫冰柜放平后，接通電源（220伏），先不要立即放入物品，按速凍鍵，讓保存箱空載運(yùn)行一段時(shí)間，待冰柜內(nèi)部充分冷卻下來(lái)后，正式啟用保存箱。4.2 按/，設(shè)置溫度，一般置于40。4

39、.3 取放物品時(shí)動(dòng)作要快，不要長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)著門(mén)，開(kāi)關(guān)門(mén)時(shí)的動(dòng)作要輕。5.注意事項(xiàng)5.1 不要放入易燃物品。5.2 不要將過(guò)熱的物品放入保存向內(nèi)、內(nèi)，等冷卻至室溫后，再放入冰柜。5.3 定時(shí)除霜，每年至少兩次。除霜時(shí)，切斷電源，切記不可使用機(jī)械工具或其它方式進(jìn)行除霜，以免損壞冰柜。5.4 保存箱啟用后，一般情況下不要停用冰柜，以免影響保存箱使用壽命。如要停機(jī)，拔下電源后，至少保持間隔五分鐘，才能再次插電。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/16第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè)高壓滅菌器的使用與維護(hù)第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的杜絕醫(yī)源性污染 2.范圍流感篩查實(shí)驗(yàn)

40、室3.責(zé)任人流感篩查實(shí)驗(yàn)室工作人員4.內(nèi)4.1 消毒準(zhǔn)備：先將容器內(nèi)的消毒桶取出，把待消毒物品放置于桶中有孔隔板上，在容器內(nèi)加入67厘米深清水，(約45升，為避免電熱器產(chǎn)生水垢，最好使用蒸餾水)，將桶放入器內(nèi)準(zhǔn)備消毒。消毒物品在放置時(shí)，應(yīng)使其之間留有一定間隙，不可堆壓過(guò)緊，以免妨礙蒸汽穿透。4.2 器蓋開(kāi)閉：器蓋合上時(shí)，必須先將器蓋背面之放汽軟管插入消毒桶內(nèi)之管架中，然后將器身周?chē)鶄€(gè)鎖緊螺栓扳起旋緊于器蓋上，在旋緊螺旋栓時(shí)，必須對(duì)面平均旋轉(zhuǎn)，方能使器蓋與器身密閉而不漏汽，開(kāi)啟時(shí)，須將鎖緊螺栓全部松開(kāi)，即可將蓋提起。4.3 加熱方法：準(zhǔn)備工作完畢后，將電源插頭插入消毒器底座內(nèi)并接通電源，加熱開(kāi)

41、始后，使放汽閥手柄直立放置，以便將器內(nèi)冷空氣排出，待放汽閥因水沸而冒出一定量蒸汽時(shí)，即可將手柄扳平，器內(nèi)壓力隨即逐漸升高，當(dāng)壓力達(dá)到消毒物所需壓力時(shí)，為消毒開(kāi)始時(shí)間。5.注意事項(xiàng)如壓力超過(guò)1.65公斤力厘米時(shí)，必須立即切斷電源，(如不用電加熱時(shí)，應(yīng)將消毒器撤離熱源。并將放汽閥手柄豎起放汽，使壓力降到消毒物所需壓力為止)。6.消毒時(shí)間6.1 普通敷料，如果不堆壓過(guò)緊，維持在1.4公斤力厘米2以上壓力，一般消毒時(shí)間采用20分鐘。金屬器械約12分鐘即可。6.2 干燥處理：消毒完畢后，應(yīng)立即切斷電源，將放汽閥手柄直立豎起，待器內(nèi)蒸汽放盡，壓力表指針降至“0位后，立即開(kāi)啟器蓋，將消毒物品全部取出，并將其

42、攤開(kāi)，從增進(jìn)消毒后之干燥程度，切不可將其悶置于器內(nèi)，否則消毒物品必將回潮。標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序文件編號(hào)： HZCDC/LG/SOP/17第 1 頁(yè) 共 4 頁(yè)ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System的使用與維護(hù) 第 1 版 頒布日期： 2009年12月15日1.目的 確保ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System正常運(yùn)轉(zhuǎn)，提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率。2.范圍ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System3.責(zé)任人流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室工作人員4.內(nèi)容4.1 操作步驟1.開(kāi)機(jī)：先打開(kāi)計(jì)算機(jī)；再打開(kāi)Stepone

43、PlusTM Real-Time PCR System儀器；再打開(kāi)計(jì)算機(jī)上Stepone軟件；2.打開(kāi)軟件后，點(diǎn)擊“Advanced Setup”;3.進(jìn)入界面后，在“Experiment Name”下命名本次實(shí)驗(yàn)名1)“Which instrument are you using to run the experiment?”選項(xiàng)下，選“SteponePlusTM Instrument(96 wells)”;2)“What type of experiment do you want to set up?”選項(xiàng)下，選“Quantitation-Standard Curve”；3)“Which

44、 reagents do you want to use to detect the target sequence?”選項(xiàng)下，選“TaqMan Reagents”；4)“What ramp speed do you want to use in the instrument run?”選項(xiàng)下，選“Standard(2 hours to complete a run)”.4.回到左邊“Setup”選項(xiàng)下，點(diǎn)擊“Plate Setup”；5.在“Define Targets and samples”界面下：1) 在“Define Targets”選項(xiàng)中，點(diǎn)擊“Add New Target”添加新

45、Target，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要編輯靶基因名稱；（如，甲型H1N1流感病毒核酸檢測(cè)：Target 1swflua1; Target 2flua; Target 3swh1; Target 4rfp）2)“Reporter”選項(xiàng)下：均選“FAM”；3)“Quencher”選項(xiàng)下：均選“None”；4) 在“Define samples”選項(xiàng)下，點(diǎn)擊“Add New Sample”，根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)的樣本數(shù)添加，根據(jù)贗本名稱編輯名稱;（如，本次實(shí)驗(yàn)2個(gè)樣本，Sample 11, Sample 22）6.再點(diǎn)擊“Assign Targets and Samples”；在此界面下，設(shè)置“View Plate L

46、ayout”, “View Plate Layout”下的各反應(yīng)孔與SteponePlusTM Real-Time PCR System儀器中的96孔反應(yīng)板是對(duì)應(yīng)的。如，B3孔（縱向 B，橫向 3）設(shè)置：先點(diǎn)擊B3孔：再1) 在“Assign Target to the selected wells”中選擇靶基因（根據(jù)個(gè)人設(shè)計(jì)的八連管中的靶基因的反應(yīng)體系設(shè)置，如B3孔設(shè)置的是“swflua1”基因，則點(diǎn)擊“swflua1”前的“”選定；若為陽(yáng)性對(duì)照孔，再點(diǎn)擊swflua1后的“S”，陰性對(duì)照，點(diǎn)擊“N”）；其他基因設(shè)置依次類推；2) 在“Assign Sample(s) to the sele

47、cted wells”選項(xiàng)下：選擇樣品。（如：B3孔中樣品編號(hào)為“1”，點(diǎn)擊編號(hào)為1的樣品前的“”選定，其他的樣本設(shè)置依次類推）3) 在“Select the dge to use as the passive reference”選項(xiàng)中，選擇“None”。7.回到左邊“Setup”下，點(diǎn)擊“Run Method”；1) 在“Reaction Volume Per well” 中，選擇反應(yīng)體系的量。如，甲型H1N1流感核酸檢測(cè)體系為25L。2) 設(shè)置反應(yīng)溫度。按照界面所示，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，設(shè)置反應(yīng)溫度與時(shí)間。單擊上方溫度設(shè)置可直接修改溫度；下方為時(shí)間，如02：00為2Min，00：10為10

48、s。3) 界面中“Holding Stage”為2個(gè)反應(yīng)溫度，該階段如需更多溫度：先點(diǎn)擊“Holding Stage”下，任意“Step”，再點(diǎn)擊“Add Step”即可增加一個(gè)“Step”。以后的個(gè)階段如需增加溫度與此相同。4) 如需增加一個(gè)“Stage”，點(diǎn)擊“Add Stage”選項(xiàng)下，“Cycling”即可。5) 根據(jù)試劑盒說(shuō)明，修改各階段循環(huán)數(shù)，在“Number of Cycles”下修改循環(huán)數(shù)。6) 根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，選擇開(kāi)始采集熒光的“Step”，“Data Collection On”為開(kāi)始；“Data Collection Off”為關(guān)閉。8.所有項(xiàng)目設(shè)置完畢后，點(diǎn)擊右上角“START RUN”,根據(jù)提示將該次反應(yīng)結(jié)果保存到指定文件夾即可。9.運(yùn)行開(kāi)始后，自動(dòng)計(jì)算擴(kuò)增所需時(shí)間。10.全程擴(kuò)增約需2h；擴(kuò)增結(jié)束后，電腦上的Stepone軟件自動(dòng)分析結(jié)果；可直接看到擴(kuò)增曲線。在分析結(jié)果時(shí)，Ct值結(jié)合擴(kuò)增曲線分析。如，甲型H1N1流感病毒核酸檢測(cè)（北京金豪試劑盒）陽(yáng)性對(duì)照Ct30有意義；待測(cè)樣品CtCt37則重新檢測(cè)。甲型H1N1陽(yáng)性結(jié)果的判斷結(jié)合試劑盒說(shuō)明書(shū)判斷。11.分析結(jié)果完畢后，先關(guān)閉Stepo