肌肉特殊染色

1、精選文檔肌肉冰凍切片常用組織學(xué)及酶組織化學(xué)染色技術(shù) （）蘇木精和伊紅染色（Hematoxylin and Eosin, HE） 1 蘇木精溶液染色10分鐘 2流水沖洗10分鐘  2 伊紅溶液染色3分鐘 4流水沖洗1分鐘    5梯度酒精脫水，透亮樹膠封固   骨骼肌HE染色（肌膜核藍(lán)色，肌纖維粉紅色，結(jié)締組織淡紅色） （二）改良Gomori三色染色方法（Modified Gomori Trichrome, MGT） 1 Harris蘇木精10分鐘 2 水沖洗 10分鐘 3 Gomori氏溶液30分鐘 60分鐘 402%醋酸浸洗1分鐘

2、5酒精脫水，二甲苯透亮，樹膠封固。 骨骼肌MGT染色（核紫紅,肌纖維暗綠色,膠原亮綠色 ,線粒體紅色） （三）PAS反應(yīng)法(Periodic  Acid   Schiffs  reaction,  PAS) 1 固定于Carnoiy氏固定液10分鐘 2流水沖洗2分鐘 305%過碘酸5分鐘 4蒸溜水洗12分鐘 5Schiff氏溶液1530分鐘 6流水洗510分鐘 7Harris蘇木精溶液2分鐘 8流水洗5分鐘 9脫水、透亮、封固（合成樹膠）  骨骼肌PAS染色結(jié)果：糖原紅色，肌內(nèi)肌原纖維用清楚可見A纖維染色反應(yīng)強(qiáng)，B、C、型纖維呈中間型

3、。 （四）蘇丹黑B染色 1.蘇丹黑溶液20分鐘（加蓋防氣化） 2  流水洗 1 過濾的蘇木精染1分鐘 4  流水洗2分鐘 5  甘油明膠封固 結(jié)果：脂類物質(zhì)染成黑色，。（五）四氮唑還原酶(NADHtetrarolium redutase,  NADHTR ) 1. 孵育于下列基質(zhì)內(nèi)30分鐘，37  0.05M（或0.2M）Tric緩沖液（PH7.4）  30ml  硝基四氮唑（BNT）30mgNADH 24mg 2. 蒸餾水洗。 3. 甘油明膠封固。   骨骼肌NADHTR染色(型肌纖維紫蘭色，型肌纖維淡

4、灰色)。（六）琥鉑酸脫氫酶（Succinate dehydrogenase，SDH） 染色步驟 1孵育于下列基質(zhì)30分鐘,37  （琥泊酸鈉100 mg  硝基四氮唑蘭 10 mg  吩嗪二甲脂硫酸鹽0.3 mg  0.1M Tris緩沖液30ml  調(diào)PH7.2 ）2挨次在60%、90%、60%丙酮挨次脫水及蒸餾水清洗 3甘油明膠封固。   骨骼肌SDH染色（型纖維色深，A、C中間型，B染色淺）（七） 細(xì)胞色素氧化酶染色（COX）1  下述基質(zhì)內(nèi)孵育14小時(shí) 37 DAB（3， -3，-二氨基聯(lián)苯二氨鹽酸鹽）&#

5、160;30mg 01M醋酸緩沖液                     14.0ml 1%氯化錳                         

6、    1.5ml 01%新穎過氧化氫                    0.15ml 2  蒸餾水沖洗 3  1%硫酸銅沖洗5分鐘 4  蒸餾水沖洗 5  甘油封固 肌纖維呈褐紅色，代表線粒體反應(yīng)，細(xì)胞色素氧化酶缺陷時(shí)則無(wú)色。（八）腺苷三磷酸酶(Adenosine  Triphosphatase, ATPase) 

7、0;1.制備下述溶液：A）堿性溶液： 0.1M 巴比妥鈉 1份體積               0.18M CaCl2 1份體積              蒸餾水 3份體積               調(diào)PH

8、9.7-11.0 B）主要孵育液及上清液：               0.1M 巴比妥鈉 2份體積               0.18M CaCl2 1份體積               蒸餾水 7份體積

9、  上述溶液分成二份即B（-）與B（+），B（-）為上清液，B（+）液為孵育液，即將B液20ml+ATP-Na:50mg調(diào)PH9.7。 C）酸性反應(yīng)液：               0.2M-巴比妥醋酸緩沖液               0.2M-巴比妥醋酸鹽溶液 5份體積     

10、60;         0.1M HCL 10份體積               蒸餾水 8份體積               調(diào)PH 4.2-4.62堿性PH染色片置于A液15分鐘 310分鐘后將酸性PH染色片置C液內(nèi)5分鐘 4取出 5全部切片置于B（+）溶

11、液內(nèi)45分鐘 6制備下述溶液    1%  CaCl2 2g/200ml    2%CoCl2  1g/50ml    0.01M- 巴比妥鈉溶液 1000ml 7 1%  Cacl2溶液內(nèi)洗三次10分鐘. 8 2% Cocl2 溶液內(nèi)3分鐘 9流水洗2分鐘  100.01M-巴比妥鈉溶液內(nèi)洗8次  111%黃色硫化銨30秒 12流水洗15分鐘 013脫水、50%100%酒精  14二甲苯透亮兩次 15封固  （九）AMP染色(單磷酸腺苷脫氫酶)adenosine monophosphate deaminase1） 反應(yīng)液 蒸餾水 14ml AMP 6mgNBT 15mg 3MKCl 1ml(攪拌同時(shí)漸漸加入)0.1N NaOH 調(diào)整PH6.1DTT 8mg2)室溫1小時(shí)反應(yīng)3）150mKCl-1.5mM citrate(PH6.0) 2次洗凈4）自然干燥5）甘油膠封片固定（十）Acid Phosphataso染色（酸性磷酸酶）1）反應(yīng)液 萘酚AS-BI（naphtol AS-BI） 1ml巴比妥醋酸鈉緩沖液(vero