液相常見問題

1、1.如何排除流動(dòng)相中的氣泡？如何排出流動(dòng)池中的氣泡？避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氨氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測(cè)器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動(dòng)池中的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池的最大壓力，否則會(huì)造成流動(dòng)池漏液或流動(dòng)池?fù)p壞。如果流動(dòng)池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動(dòng)相接入檢測(cè)器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動(dòng)池。直到基線上看不到毛刺為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了。2如何減少基線噪音？無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請(qǐng)沖洗色譜柱，對(duì)樣品做合適的前處理以避免污染，并使用HPLC級(jí)別的溶劑。連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成

2、。要確定問題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵，請(qǐng)先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測(cè)基線。如果此時(shí)基線平穩(wěn)，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用ChemStation在線診斷或LC手持控制器檢查泵方面的故障。如果停泵后噪音繼續(xù)存在，則說明噪音與檢測(cè)器有關(guān)。首先，請(qǐng)嘗試更換燈。如果問題依然存在，則請(qǐng)與安捷倫科技公司聯(lián)系。在中國，請(qǐng)撥打8008203278o3什么原因?qū)е禄€毛刺？這很有可能是流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。請(qǐng)先停泵來進(jìn)行確認(rèn)，如果毛剌消失，則很有可能是由于流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動(dòng)池。如果毛剌仍然存在，則需檢查檢測(cè)器本身的電噪音有關(guān)。如果需要更多幫助，則請(qǐng)致電安捷倫科技公司。在中國，請(qǐng)撥打8008203278。4色譜圖上出現(xiàn)鬼

3、峰。如何消除？可能的原因：1 .上次進(jìn)樣遺留組分產(chǎn)生2 .有污染3 .有氣泡4 .色譜柱問題5 .保護(hù)柱失效建議用戶:1 .做樣品后應(yīng)保證有足夠時(shí)間沖洗色譜柱，有必要的話在運(yùn)行結(jié)束后使用更強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。2 .洗脫原色譜柱中的原有污染。3 .為確保系統(tǒng)中沒有氣泡，只使用徹底脫氣后的溶劑。4 .更換色譜柱。5 .更換保護(hù)柱。6 .檢查流動(dòng)相純度。7 .檢查樣品中的其他成分5如何決定何時(shí)更換保護(hù)柱?許多色譜人員在測(cè)試一定數(shù)量的樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣后更換保護(hù)柱。樣品數(shù)量通常由實(shí)驗(yàn)決定，在長(zhǎng)時(shí)間未更換保護(hù)柱而造成分析柱破損時(shí)或樣品分析數(shù)量增加，而保護(hù)柱需要更換。保護(hù)柱的更換頻率通常根據(jù)經(jīng)驗(yàn)而定，按照每個(gè)方法

4、/樣品類型綜合考慮，但是許多分析人員會(huì)在完成一定數(shù)量的樣品分析或測(cè)試一些柱的性能指標(biāo)（例如增加10%峰展寬或拖尾因子，或降低10%的柱效（塔板數(shù)）后更換保護(hù)柱。6什么原因?qū)е乱合嗌V儀壓力過高？可能的原因：1 .吹掃閥的PTFE慮芯堵塞2 .壓力上限設(shè)置太低。3 .壓力傳感器堵塞。建議的措施:1 .打開排氣閥。如果壓力依然很高，則更換排氣閥的PTFE慮芯2 .查看軟件的壓力上限設(shè)置并確保設(shè)置值適于分析。3 .檢查系統(tǒng)內(nèi)的堵塞部位。（如下所述）要檢查是否堵塞，請(qǐng)采用隔離系統(tǒng)的方法來排除故障：將安裝的色譜柱、預(yù)色譜柱和預(yù)色譜柱過濾器摘開。1 .如果壓力恢復(fù)到正常值，則在色譜柱的位置安裝ZDV接頭如

5、果壓力正常，則色譜柱、預(yù)色譜柱或過濾器是產(chǎn)生問題的原因。請(qǐng)進(jìn)行更換。如果壓力仍然很高，則在色譜柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入檢測(cè)器或從其通出的管路）。2 .如果取出色譜柱后壓力依然很高，則檢查從排氣閥到自動(dòng)進(jìn)樣器的管路。如果壓力正常，則使用進(jìn)樣步驟命令將自動(dòng)進(jìn)樣器的進(jìn)樣閥切換到路模式。1 .如果壓力正常，則說明自動(dòng)進(jìn)樣器堵塞。請(qǐng)檢查針、針座、針座毛細(xì)管和轉(zhuǎn)子密封墊2 .如果壓力依然很高，則檢查從進(jìn)樣六通閥到色譜柱人之間口的管線。7何時(shí)應(yīng)更換泵密封圈？泵密封圈應(yīng)定期更換。建議每個(gè)液相色譜儀用戶建立一個(gè)泵密封圈更換的定期檢修計(jì)劃。這應(yīng)根據(jù)泵的使用和流動(dòng)相組成情況而定。由于它們易磨損的特點(diǎn)，鹽緩

6、沖大大加速密封圈和活塞的磨損。在活塞下面的泵頭上檢測(cè)到泄漏時(shí)，保留時(shí)間不穩(wěn)定時(shí)，或系統(tǒng)壓力不穩(wěn)定時(shí)，都應(yīng)更換密封圈。請(qǐng)按照以下程序更換所維護(hù)的泵的密封圈。8當(dāng)LC檢測(cè)器燈強(qiáng)度測(cè)試沒有通過時(shí)我該如何辦？強(qiáng)度測(cè)試是內(nèi)置的UV/Vis檢測(cè)器診斷測(cè)試功能.是用于測(cè)試光學(xué)單元在全波長(zhǎng)范圍內(nèi)的性能。安捷倫化學(xué)工作站在多個(gè)波長(zhǎng)范圍測(cè)量檢測(cè)器的光譜強(qiáng)度，針對(duì)每個(gè)范圍的極限值報(bào)告Pass（通過）/Fail（失?。顟B(tài)。這一測(cè)試的失敗是由于1 .燈老化了2 .流通池中有吸光的溶劑/空氣泡3 .流通池臟了/污染了4 .光學(xué)窗口/透鏡等被污染了要糾正這些問題，需要在流通池充滿水/并用足夠的時(shí)間讓檢測(cè)器穩(wěn)定。檢查開燈的

7、運(yùn)行時(shí)間，并當(dāng)其壽命到期時(shí)更換之。用甲醇/無棉布清洗光學(xué)窗口。9標(biāo)準(zhǔn)HPLC柱和RRLC柱有何區(qū)別？一般來說，RRLC（快速分離液相色譜）柱有較小的填料粒度-1.8微米，而傳統(tǒng)的柱為2到10微米。由于填料粒度小，故比普通柱的操作壓力（400Bar）高（600Bar）。10我什么時(shí)候應(yīng)當(dāng)更換自動(dòng)進(jìn)樣器閥的轉(zhuǎn)子密封件？最經(jīng)常的進(jìn)樣閥維護(hù)之一就是更換轉(zhuǎn)子密封件。需要更換的標(biāo)志包括：1 .轉(zhuǎn)子密封件堵塞。2 .轉(zhuǎn)子密封件中接頭點(diǎn)之間泄漏。通過觀察注射針從樣品瓶抽取樣品后抬起時(shí)，針頭有流動(dòng)相液滴滲出，就可判斷接頭點(diǎn)之間有泄漏。注意：接頭點(diǎn)之間泄漏也可通過壓力測(cè)試來判斷。當(dāng)您發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣體積精度變差時(shí)，您可能

8、首先要考慮接頭點(diǎn)之間有泄漏。11在我的二極管陣列檢測(cè)器上，為什么在我更換了新的燈和流通池以后仍然有基線噪聲和漂移？該問題應(yīng)該與流速有關(guān)。拆下流通池檢查基線。如果問題消除了，說明流通池被污染了（更換/清洗檢測(cè)窗口），或者泵/進(jìn)樣器有問題?；蛘咴搯栴}在光學(xué)系統(tǒng)或光學(xué)系統(tǒng)的部件?；蛘吒鼡Q整個(gè)光源透鏡組件（部件號(hào)G1315-65201）（或者組件的單個(gè)部件，如光譜窗口，部件號(hào)79880-28111以及單色器透鏡，部件號(hào)1000-0486）,或者更換檢測(cè)池支持窗口G1315-65202。如果問題仍然存在，請(qǐng)聯(lián)系您最近的安捷倫技術(shù)代表。12什么時(shí)候需要更換溶劑輸送模塊（泵）的沖洗閥中的過濾芯？確定沖洗閥濾

9、芯是否需要更換的常見方法是打開沖洗閥，設(shè)定甲醇流速為1ml/min。如果壓力大于7BAR,就應(yīng)該更換濾芯。13在進(jìn)樣過程中HPLC的自動(dòng)進(jìn)樣器為什么有壓力的突變?自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣閥中的轉(zhuǎn)子密封墊可能部分堵塞了。請(qǐng)清洗轉(zhuǎn)子密封墊或者更換之。14怎樣知道UV檢測(cè)器的流動(dòng)池被污染了？用工作站診斷功能作池體測(cè)試，是比較流動(dòng)池二極管的樣品邊與參考邊所測(cè)到的笊燈強(qiáng)度。強(qiáng)度比值的結(jié)果（樣品:參考）是測(cè)試流動(dòng)池吸收的光的量。測(cè)試可用來檢驗(yàn)流動(dòng)池窗口是臟了或者被污染了。用水通過流動(dòng)池作測(cè)試。工作站自動(dòng)計(jì)算強(qiáng)度比值。強(qiáng)度比取決于流動(dòng)池窗口污染的程度。以及所用的流動(dòng)池的類型。理想的比值是1,比值為7或更大也可以接受。

10、比值較低，說明流動(dòng)池窗口有一些涂層或者流動(dòng)池里有氣泡。更多的光被流動(dòng)池吸收。用水沖洗流動(dòng)池以去除污染物。這樣可以來代替溶劑，用水來沖洗。這時(shí)樣品溶解在水。15什么是1100/1200自動(dòng)進(jìn)樣器馬達(dá)溫度錯(cuò)誤？傳動(dòng)部分的馬達(dá)運(yùn)行時(shí)所需電流過大，引起過熱。處理器將馬達(dá)關(guān)掉，以免損壞它?？赡艿脑颍? .機(jī)械故障。2 .傳動(dòng)部分摩擦力過大。3 .馬達(dá)皮帶張力過高。4 .馬達(dá)損壞。5 .傳動(dòng)部分彎板損壞。建議：1 .關(guān)掉自動(dòng)進(jìn)樣器電源開關(guān)。等至少10分鐘之后再開開關(guān)2 .確認(rèn)傳動(dòng)部分的運(yùn)動(dòng)不受阻礙。3 .更換傳動(dòng)部分。16為什么我的燈點(diǎn)不著？最大的可能是它已經(jīng)超過使用期限了或者壞了。根據(jù)檢測(cè)器類型作診斷

11、測(cè)試。如果需要，更換燈。如果問題依然存在,請(qǐng)聯(lián)系A(chǔ)gilent公司。17用什么溶劑沖洗LC管線，以去除污染？已發(fā)現(xiàn)各含50%的IPA和水的混合溶液，能有效地除去HPLC系統(tǒng)的溶液管線里，毛細(xì)管里，以及流動(dòng)池里的污染物。水能清除鹽類和其他的污染物，IPA能清除極性和非極性的污染物。準(zhǔn)備一并各含50%的IPA和水的混合溶劑，并對(duì)溶劑脫氣。將所有的溶劑管線連到這個(gè)瓶子里如連四元泵的A,B,C和D溶劑管線，連二元泵的A和B溶劑管線，連單元泵的溶劑管線）?？梢躁P(guān)掉所有檢測(cè)器的燈，如果不希望IPA和水的混合液通過柱子時(shí)，可以在柱子的位置安裝一個(gè)兩通接頭替換它。18易彎折的不銹鋼毛細(xì)管線外表面上的顏色標(biāo)記是

12、什么意思?Agilent易彎折的不銹鋼毛細(xì)管線外表面上的顏色標(biāo)記，指示管子的內(nèi)徑（ID）紅色指示內(nèi)徑為0.12mm或者0.005英寸。綠色指示內(nèi)徑為0.17mm.或者0.007英寸。藍(lán)色指示內(nèi)徑為0.25mm或者0.010英寸。桔色指示內(nèi)徑為0.50mm或者0.020英寸。19蒸發(fā)光散射檢測(cè)法的好處是什么?實(shí)質(zhì)上可以檢測(cè)到所有的化合物。檢測(cè)基于所有分析物的通用屬性，不需要存在發(fā)色基團(tuán)和電活化基團(tuán)等。檢測(cè)器的響應(yīng)直接與洗提過的化合物質(zhì)量相關(guān)?？梢垣@得無法識(shí)別化合物的精確定量分析數(shù)據(jù)。20什么是蒸發(fā)光散射檢測(cè)器或ELSD?對(duì)于揮發(fā)性低于流動(dòng)相的化合物，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）能夠有效地執(zhí)行敏感

13、檢測(cè)。它提供了一種在等度和梯度條件下實(shí)質(zhì)上通用的測(cè)量法，獨(dú)立于化合物的吸收、熒光性或電活性。低溫蒸發(fā)技術(shù)能夠檢測(cè)半揮發(fā)性性和低水平感熱性化合物。21H3PO4清洗HPLC色譜柱有什么目的？經(jīng)證明，磷酸洗滌劑能有效減少由于樣品與HPLC系統(tǒng)中的金屬絡(luò)合而導(dǎo)致的拖尾。一般建議用1%磷酸來清洗系統(tǒng)和色譜柱，以此消除這種脫尾現(xiàn)象，這很有效。在安捷倫ZORBAXStableBond反相HPLC產(chǎn)品上使用這些推薦的清洗條件會(huì)取得非常理想的效果。StableBondHPLC色譜柱在低PH條件下性能非常穩(wěn)定-SB-C18色譜柱在0.8PH值和90座條件下可保持穩(wěn)定。如何肯定峰拖尾是由于金屬絡(luò)合而引起的？只要辨

14、別N或O原子上的孤對(duì)電子能否與金屬螯合并形成5或者6元環(huán)。金屬絡(luò)合物是一個(gè)普遍被忽視的峰拖尾成因，每個(gè)HPLC系統(tǒng)中都存在金屬。22如何處理HPLC中的鹽帶來的問題？現(xiàn)在有很多問題是由于用戶的流動(dòng)相含有鹽成分造成的。建議用戶在清洗時(shí)將水加熱后再?zèng)_洗，這樣既可以將鹽溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物質(zhì)，會(huì)減少很多問題的發(fā)生，包括管路堵塞，鹽析出，基線噪音23HPLC出鬼峰"，如何排除HPLC出嵬峰”大部分發(fā)生在反相體系（甲醇，乙睛，水），是溶劑被污染造成的。還有一種原因是進(jìn)樣系統(tǒng)有殘留。正相色譜：固定相極性大于流動(dòng)相極性反相色譜：固定相極性小于流動(dòng)相極性 讓用戶運(yùn)行一個(gè)空白梯度洗脫的方

15、法，從100%水過渡到100%有機(jī)溶劑，如果嵬峰”出現(xiàn)，可以判斷是水被污染了（水中有藻類Algae的污染）。如果用戶是使用純水機(jī)制作的水，這種現(xiàn)象是最常見的。建議用戶更換娃哈哈”純凈水。 進(jìn)樣系統(tǒng)有殘留很容易判斷，建議用戶加強(qiáng)或改善洗針程序，延長(zhǎng)沖洗Loop的時(shí)間。24峰面積或峰高重現(xiàn)性不好，偏差大？如果HPLC系統(tǒng)配有自動(dòng)進(jìn)樣器，這種情況主要是自動(dòng)進(jìn)樣器的問題。 首先確認(rèn)柱前壓是穩(wěn)定的，保留時(shí)間的重現(xiàn)性好（參見第1,2條） 將自動(dòng)進(jìn)樣器的抽樣速度降低到50ul/min以下（默認(rèn)彳！是200ul/min）.您的樣品有可能粘度較大，降低抽樣速度可以極大地改善粘度較大的樣品的進(jìn)樣精度。 如果進(jìn)樣針

16、或針座有輕微的堵塞，對(duì)進(jìn)樣精度的影響也非常大。請(qǐng)參考第5條的處理辦法。 如果是手動(dòng)進(jìn)樣器，請(qǐng)確認(rèn)一定要使用Agilent配的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣針，且進(jìn)樣器的廢液出口要與進(jìn)樣口水平，避免虹吸的影響。如果是滿Loop進(jìn)樣，建議注射5倍Loop的進(jìn)樣體積。25柱前壓不穩(wěn)定，壓力上下波動(dòng)引起這種故障最常見的原因是泵里有氣泡，建議用以下的方法排除。 如果您的系統(tǒng)沒有配置脫氣機(jī)（二元泵），溶劑一定要經(jīng)常超聲脫氣。 脫氣機(jī)的效率不夠，特別是用甲醇/水的系統(tǒng)最容易發(fā)生。可以將A,B通道串聯(lián)；C,D通道串聯(lián)用來延長(zhǎng)脫氣的時(shí)間，效果非常明顯。主動(dòng)閥閥芯污染?？梢詫㈤y芯取下，用甲醇超聲清洗。26排氣閥里的過濾經(jīng)常芯堵塞？如果

17、是排氣閥里的過濾芯堵塞引起的壓力升高，請(qǐng)仔細(xì)檢查一下?lián)Q下來的過濾芯。正常情況下，一個(gè)過濾芯可以使用6個(gè)月左右，如果經(jīng)常更換就有問題。 如果過濾芯的顏色發(fā)黑，說明是被柱塞密封墊磨損下來的碎屑堵塞的，請(qǐng)確認(rèn)流動(dòng)相使用的緩沖鹽的濃度是否太高了，是否使用了柱塞清洗裝置。緩沖液在泵頭內(nèi)部析出的鹽的結(jié)晶會(huì)加速密封墊的磨損。 如果過濾芯的顏色是乳白色的，非常干凈。說明過濾芯很有可能是被流動(dòng)相污染了。請(qǐng)檢查一下您是否使用了過期的溶劑（水，有機(jī)溶劑），或質(zhì)量不好的溶劑。請(qǐng)馬上更換別的品牌的溶劑或使用純凈水（推薦：娃哈哈純凈水）。如果流動(dòng)相經(jīng)過了濾膜過濾，請(qǐng)確認(rèn)是否使用了正確的，優(yōu)質(zhì)的濾膜。建議您先不要使用濾膜過濾流動(dòng)相，看看是否可以解決過濾芯堵塞的問題。 如果存放緩沖液或水的溶劑瓶不經(jīng)常清洗，該通路會(huì)生長(zhǎng)藻類，藻類會(huì)污染整個(gè)流路系統(tǒng)和脫氣機(jī)的腔體，藻類及其代謝產(chǎn)物也會(huì)堵塞過濾芯。如果發(fā)生了這種情況，建議用60度的熱水清洗溶劑瓶，并用異丙醇清洗整個(gè)管路和脫氣機(jī)。建議以后一定要用棕色瓶存放緩沖溶液，避光，并且定期清洗溶劑瓶