免疫學(xué)檢測培訓(xùn)1期

1、楊子乾免疫學(xué)檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測的一種手段，由于其可以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號進(jìn)行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。 我國免疫學(xué)檢測的發(fā)展主要分為以下幾個階段 化學(xué)發(fā)光免疫檢測（CLIA） 酶聯(lián)免疫學(xué)檢測（ELISA） 放射免疫學(xué)檢測（RIA） 70年代 80年代 90年代 21世紀(jì)興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院產(chǎn)品處于衰退期廠商試劑與儀器共同開發(fā),試劑基本系列化興起于20世紀(jì)60年代，現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用產(chǎn)品生命周期已終結(jié)廠商試劑與儀器共同開發(fā),試劑基本系列化興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)仍普遍使用于各級臨床機(jī)構(gòu)，為我

2、國臨床免疫診斷的基本方法產(chǎn)品處于成熟期廠商試劑與儀器共同開發(fā),試劑尚未系列化興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用產(chǎn)品處于衰退期廠商試劑與儀器共同開發(fā),試劑基本系列化進(jìn)入于20世紀(jì)90年代，現(xiàn)個別較大醫(yī)院開展個別項目產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長期無廠商開發(fā)生產(chǎn)，基本依賴進(jìn)口興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用為臨床免疫診斷的支柱方法產(chǎn)品處于成熟期廠商試劑與儀器共同開發(fā),儀器自動化程度高，試劑系列化狀態(tài)好化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫放射免疫放射免疫測量精度定量定性/半定量定量靈敏度10-1910-910-12測量范圍大于104小于104小于104測量時間短長很長試劑穩(wěn)定性好好差對環(huán)境影響無無有

3、放射性酶聯(lián)免疫吸附劑測定法（ELISA），是以免疫學(xué)為基礎(chǔ)，將抗原抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過顯色來檢測根據(jù)檢測樣本與檢測目的的不同可以設(shè)計出不同類型的ELISA方法1、雙抗體夾心法2、雙位點一步法3、競爭法4、間接法 應(yīng)用于臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中化學(xué)發(fā)光免疫測定（CLIA）亦稱化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測定，是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體（化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物），與待測標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原、磁顆粒性的抗原或抗體反應(yīng)，通過磁場把結(jié)合狀態(tài)（沉淀部分）和游離狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物分離開來，然后加入

4、發(fā)光促進(jìn)劑進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，通過對發(fā)光強(qiáng)度的檢測進(jìn)行定量或定性檢測 ?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法的優(yōu)點1、靈敏度高2、光信號持續(xù)時間長3、分析方法簡便快速4、結(jié)果穩(wěn)定、誤差小5、安全性好及使用期長降鈣素原（PCT）是血清降鈣素（CT）的前肽物質(zhì)，是由116個氨基酸組成的糖蛋白質(zhì)，在正常生理情況下，由甲狀腺C細(xì)胞分泌產(chǎn)生。健康人血液中的PCT濃度非常低，小于0.05ng/ml。在炎癥刺激特別是細(xì)菌感染或膿毒血癥狀態(tài)下，機(jī)體各個組織、多種細(xì)胞類型均可產(chǎn)生PCT并釋放進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。CRP是一種能和肺炎鏈球菌的莢膜C多糖結(jié)合，由5個相同的亞單位（23KD）以非共價鍵聚集形成的環(huán)狀五聚體蛋白，分子量為115 K

5、D，半衰期為19h，多由白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎性分子刺激肝臟細(xì)胞合成。正常人血清中CRP含量極微。細(xì)菌感染與病毒感染的鑒別診斷。幫助膿毒癥的早期診斷,評估疾病的嚴(yán)重程度及預(yù)后。抗生素治療效果的評估,指導(dǎo)臨床抗生素使用。手術(shù)和嚴(yán)重創(chuàng)傷患者細(xì)菌感染并發(fā)癥監(jiān)測。胰腺炎鑒別診斷。鑒別細(xì)菌感染與病毒感染監(jiān)控感病情變化及術(shù)后感染預(yù)測心血管病危險用于疾病的隨訪和監(jiān)控療效健康人的血漿PCT質(zhì)量、濃度低于0.05ng/ml。老年人、慢性疾病患者、以及不足10的健康人血漿PCT質(zhì)量濃度高于0.05ng/ml，最高可達(dá)0.1ng/ml，但一般不超過0.3ng/ml。膿毒癥患者PCT的診斷界值為超過0.5ng

6、/ml，嚴(yán)重膿毒癥和膿毒性休克患者PCT質(zhì)量濃度波動在5500ng/ml之間。極少數(shù)嚴(yán)重感染患者血漿PCT水平超過1000ng/ml。感染性疾?。?兒童和成年人90%3mg/L，99%10mg/L，10-99 mg/L提示局灶性或淺表性感染，100mg/L提示敗血癥或侵襲性感染等嚴(yán)重感染。敏感性達(dá)100%。新生兒細(xì)菌性感染：一般新生兒血清CRP水平2mg/L，大于此值即與細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度有關(guān)。用于心血管疾病危險性評估時： 一般認(rèn)為，hs-CRP1.0mg/L為低危險性；1.03.0mg/L為中度危險性；P3 mg/L為高度危險性。據(jù)研究，PCT與CRP臨床符合性比較結(jié)果顯示：PCT靈敏度=8

7、5；特異度= 86.7；總符合率=85.7。CRP靈敏度=9O；特異度=67；總符合率=8O。數(shù)據(jù)顯示PCT和CRP在疾病靈敏度上差異不明顯，但在特異性上PCT的特異性明顯高于CRP。CRP是一種急性反應(yīng)蛋白，多種因素均可引起其升高，包括在心血管疾病中也會導(dǎo)致其升高，所以臨床單憑CRP一項標(biāo)志物，大大限制了輔助診斷作用。臨床也需要更敏感、更特異的標(biāo)志物來提高對重癥感染和敗血癥的診治。PCT作為新的感染標(biāo)志物，水平不受非感染因素影響。因此PCT對細(xì)菌感染的診斷價值明顯高于WBC計數(shù)及CRP，是一項靈敏度好，特異性高的具有鑒別診斷意義的新指標(biāo)。鑒別細(xì)菌性感染和非細(xì)菌性感染的能力明顯的優(yōu)于CRP，而且PCT還可以輔助臨床診斷重癥感染和敗血癥