第八章儀器分析法多圖

1、1第八章第八章 儀器分析法儀器分析法 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 利用利用精密儀器精密儀器，檢測，檢測物理性質(zhì)物理性質(zhì)或或物理化學(xué)物理化學(xué)性質(zhì)性質(zhì)進(jìn)，根據(jù)所產(chǎn)生的測試信號(hào)定性分析和定進(jìn)，根據(jù)所產(chǎn)生的測試信號(hào)定性分析和定量分析。量分析。 儀器分析的特點(diǎn)儀器分析的特點(diǎn) ： 1靈敏度高靈敏度高 2選擇性強(qiáng)選擇性強(qiáng) 3價(jià)格昂貴，普及困難價(jià)格昂貴，普及困難 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463842儀器分析法在藥典中的使用情況儀器分析法在藥典中的使用情況 模塊四模塊四 藥物含

2、量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463843目標(biāo)：目標(biāo)：1掌握掌握紫外可見紫外可見分光光度法、分光光度法、氣相色譜法氣相色譜法和和高效液高效液相色譜相色譜法的原理、方法及在藥物含量測定中的應(yīng)用法的原理、方法及在藥物含量測定中的應(yīng)用。2了解了解熒光熒光分析法、分析法、原子吸收原子吸收分光光度法在藥品含分光光度法在藥品含量測定中的應(yīng)用。量測定中的應(yīng)用。3掌握常用儀器分析法的掌握常用儀器分析法的含量計(jì)算含量計(jì)算。4熟悉常用儀器的熟悉常用儀器的基本結(jié)構(gòu)及使用方法基本結(jié)構(gòu)及使用方法。 模塊四模

3、塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463844第二節(jié)第二節(jié) 光譜分析法光譜分析法一、紫外一、紫外-可見分光光度法可見分光光度法基本原理基本原理：分子光譜，電子躍遷：分子光譜，電子躍遷 max min sh AElC摩爾吸收系數(shù)百分吸收系數(shù)1%1cmE） 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463845儀器儀器:光源、單色器、吸收池、檢測器及測量系統(tǒng)

4、。光源、單色器、吸收池、檢測器及測量系統(tǒng)。 儀器校正儀器校正:1. 波長準(zhǔn)確度校正波長準(zhǔn)確度校正2吸光度準(zhǔn)確度校正吸光度準(zhǔn)確度校正 對(duì)溶劑的要求對(duì)溶劑的要求 :模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463846測定方法測定方法 :（一）對(duì)照品比較法（一）對(duì)照品比較法 分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液應(yīng)為供試品溶液的溶液應(yīng)為供試品溶液的10010，溶劑一致，溶劑一致，測定吸光度，測定吸光度 .RXRxAAcc %100%XR

5、RAcDVAW原料模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463847實(shí)例：貝諾酯的含量測定實(shí)例：貝諾酯的含量測定 精密稱取貝諾酯精密稱取貝諾酯0.07495g，用無水乙醇定量，用無水乙醇定量配成配成100ml溶液，再定量稀釋溶液，再定量稀釋100倍后，照分光光倍后，照分光光度法在度法在240nm波長處測定吸光度為波長處測定吸光度為0.473。另取。另取經(jīng)經(jīng)105干燥干燥2小時(shí)的貝諾酯對(duì)照品小時(shí)的貝諾酯對(duì)照品0.03667g，用，用無水乙醇定量配成無水乙醇定量配成100m

6、l溶液，再定量稀釋溶液，再定量稀釋50倍倍后，同法測定吸光度為后，同法測定吸光度為0.462，求貝諾酯的百分含，求貝諾酯的百分含量。量。 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463848%100%0.03667 10.473100100100 500.4621*100%0.07495100.2%XRRsACDVAW貝諾酯模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU

7、020-228463849（二）吸收系數(shù)法（二）吸收系數(shù)法 配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，按吸收系數(shù)計(jì)算含量。注意儀器的校正和檢定。，按吸收系數(shù)計(jì)算含量。注意儀器的校正和檢定。 1%11%100%cmADVELW原料RXRxAAcc 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638410實(shí)例：卡比馬唑的含量測定實(shí)例：卡比馬唑的含量測定 精密稱取本品精密稱取本品0.05012g，配成，配成500ml溶液，溶液，再定量稀

8、釋再定量稀釋10倍后，照分光光度法在倍后，照分光光度法在292nm波長波長處測定吸光度為處測定吸光度為0.555。按。按C7H10N2O2S的百分的百分吸收系數(shù)為吸收系數(shù)為557，求卡比馬唑的百分含量。，求卡比馬唑的百分含量。 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-22846384111%11%100%11000.55550010010100%99.4%557 0.05012cmADVELW卡比馬唑模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析

9、法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638412制劑的含量計(jì)算制劑的含量計(jì)算 %100%XRRACDVAW平均片重標(biāo)示量標(biāo)示量對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法 %100%XRRACDAc標(biāo)示標(biāo)示量片劑：注射劑：模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638413實(shí)例：硫酸阿托品注射液（規(guī)格：實(shí)例：硫酸阿托品注射液（規(guī)格：5mg/1ml5mg/1ml）含量測定）含量測定 精密量取本品精密量取本品0.5ml（約相當(dāng)于硫酸阿托品（約

10、相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg），置），置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另取硫酸阿托品對(duì)照品另取硫酸阿托品對(duì)照品25.47mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml量瓶量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液的分

11、液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液2.0ml，振搖提取，振搖提取2分鐘后，靜置使分層，分取澄清的三氯甲烷液分鐘后，靜置使分層，分取澄清的三氯甲烷液，照紫外，照紫外-可見分光光度法，在可見分光光度法，在420nm的波長處分別測定吸的波長處分別測定吸光度，對(duì)照與供試品的吸光度為光度，對(duì)照與供試品的吸光度為0.450和和0.432，依法計(jì)算（，依法計(jì)算（分子量分子量694.8）的標(biāo)示百分含量。）的標(biāo)示百分含量。 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638414100%25.475

12、0.43250251000.4500.5100597.8%XRRACDA硫酸阿托品標(biāo)示量標(biāo)示量模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638415制劑的含量計(jì)算制劑的含量計(jì)算 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 片劑：注射劑：1%11%100%cmADVELW平均片重標(biāo)示量標(biāo)示量1%11%100%cmADELc標(biāo)示標(biāo)示量模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284

13、638416實(shí)例：鹽酸氯丙嗪片的含量測定實(shí)例：鹽酸氯丙嗪片的含量測定 取標(biāo)示量為取標(biāo)示量為25mg的鹽酸氯丙嗪片的鹽酸氯丙嗪片20片，除片，除去糖衣后精密稱定，總重量為去糖衣后精密稱定，總重量為2.4215g，研細(xì)，研細(xì)，精密稱量片粉精密稱量片粉0.2290g，置，置500ml量瓶中，加鹽酸量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在搖勻，在254nm波長處測得吸光度為波長處測得吸光度為0.440，按，按為為915計(jì)算，求其含量占標(biāo)示量的百分率？計(jì)算

14、，求其含量占標(biāo)示量的百分率？模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-22846384171%11%100%1% 0.44020 5002.42159150.229020100%0.025101.7%cmADVELW平均片重鹽酸氯丙嗪標(biāo)示量標(biāo)示量模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638418注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。取吸收池

15、時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。含量測定至少配制含量測定至少配制2份，平均值的偏差應(yīng)在份，平均值的偏差應(yīng)在0.5%以內(nèi)以內(nèi) 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638419二、二、 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法基本原理基本原理 由待測元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過供試品蒸由待測元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過供試品蒸氣時(shí)，被蒸氣中待測元素的基態(tài)原子所吸收氣時(shí)，被蒸氣中待測元素的基態(tài)原子所吸收 。 通過測定輻射光強(qiáng)度減弱的程度可求出供試通過測定輻射光強(qiáng)度減弱的程度可求出供試品中待

16、測元素的含量。品中待測元素的含量。 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638420原子吸收分光光度計(jì)原子吸收分光光度計(jì)光源：心陰極燈，銳線光源光源：心陰極燈，銳線光源原子化系統(tǒng)：火焰原子化和無火焰原子化。原子化系統(tǒng)：火焰原子化和無火焰原子化。 分光系統(tǒng)：衍射光柵分光系統(tǒng)：衍射光柵 檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng) ：檢測器、放大器、對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器和顯示：檢測器、放大器、對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器和顯示裝置裝置 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教

17、研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638421測定方法測定方法 1標(biāo)準(zhǔn)曲線法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-22846384222標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638423三、熒光分析法三、熒光分析法基本原理：基本原理： 某些物質(zhì)（分子結(jié)構(gòu)常常具有長共軛結(jié)構(gòu)、剛某些物質(zhì)（分子

18、結(jié)構(gòu)常常具有長共軛結(jié)構(gòu)、剛性和共平面性）受紫外光或可見光照射激發(fā)后，性和共平面性）受紫外光或可見光照射激發(fā)后，它會(huì)在極短的時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射光波長為長的它會(huì)在極短的時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射光波長為長的光，這種光稱為熒光。光，這種光稱為熒光。 光致發(fā)光光致發(fā)光 激發(fā)光譜和發(fā)射光譜激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638424熒光分析儀熒光分析儀 1光源：現(xiàn)在大多數(shù)儀器采用高壓氙燈光源：現(xiàn)在大多數(shù)儀器采用高壓氙燈 2單色器：由光柵和狹縫組成。單色器：由光

19、柵和狹縫組成。 3樣品池：常用石英池，質(zhì)地應(yīng)較純樣品池：常用石英池，質(zhì)地應(yīng)較純 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638425測定方法測定方法選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對(duì)照品選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對(duì)照品溶液和供試品溶液，測定跑光強(qiáng)度。溶液和供試品溶液，測定跑光強(qiáng)度。 XXBXrrrbRRccRR模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 0

20、20-2284638426第三節(jié)第三節(jié) 色譜分析法色譜分析法 色譜的種類：按流動(dòng)相所處的物理狀態(tài)分類色譜的種類：按流動(dòng)相所處的物理狀態(tài)分類，可以將色譜法分為氣相色譜（，可以將色譜法分為氣相色譜（GC）、液相色譜）、液相色譜（LC）和超臨界流體色譜（）和超臨界流體色譜（SFC）。）。 氣相色譜又可以分為氣氣相色譜又可以分為氣-固、氣固、氣-液色譜，液液色譜，液相色譜可分為液相色譜可分為液-固和液固和液-液色譜。液色譜。 氣相色譜法是一種很重要的，以氣體為流動(dòng)氣相色譜法是一種很重要的，以氣體為流動(dòng)相，以液體或固體為固定相的色譜方法相，以液體或固體為固定相的色譜方法 分離效能、靈敏度、選擇性、分析速

21、度分離效能、靈敏度、選擇性、分析速度模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法硅膠柱上加上中藥提取物模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法 色譜法原理：一、吸附色譜法原理：一、吸附混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同。模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法 色譜法原理一、吸附色

22、譜法原理一、吸附當(dāng)流動(dòng)相流過時(shí)，各組分以不同的速度隨流動(dòng)相流出色譜柱。模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法 色譜法原理：二、分配色譜法原理：二、分配混合成分混合成分在固定相在固定相與流動(dòng)相與流動(dòng)相之間分配之間分配模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法 色譜法原理：三、分子篩色譜法原理：三、分子篩因混合物中因混合物中各種分子體各種分子體積大小不一積大小不一樣而分離樣而分離模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法色譜法分類色譜法分類模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定

23、技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法從粗顆粒到細(xì)顆粒從粗顆粒到細(xì)顆粒色譜所用色譜所用硅膠顆粒硅膠顆粒變細(xì)之后變細(xì)之后分離效能分離效能大為提高大為提高，同時(shí)阻，同時(shí)阻力也增大力也增大。模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法各種加壓泵各種加壓泵為提高分離效果，出現(xiàn)了為提高分離效果，出現(xiàn)了從中壓到高壓的各種加壓從中壓到高壓的各種加壓泵泵模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法從玻璃柱到不銹鋼柱從玻璃柱到不銹鋼柱模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法二、高效液相色譜法high

24、performance liquid chromatographHPLC模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法HPLCHPLC基本組成示意圖基本組成示意圖模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法色譜柱色譜柱模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法輸液泵輸液泵模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法檢測器檢測器對(duì)沒有紫外吸收的對(duì)沒有紫外吸收的物質(zhì)的檢測，以蒸

25、物質(zhì)的檢測，以蒸發(fā)光散射檢測器用發(fā)光散射檢測器用得較多得較多檢測器種類很多，現(xiàn)在最常用的是紫外檢測器模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法進(jìn)樣器進(jìn)樣器 手動(dòng)進(jìn)樣器Rheodyne 7725i幾乎成了所有液幾乎成了所有液相色譜儀的手動(dòng)相色譜儀的手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣器模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法進(jìn)樣器進(jìn)樣器 手動(dòng)進(jìn)樣器六通閥模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法進(jìn)樣器進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器可由自動(dòng)進(jìn)樣器可由軟件完全控制軟件完全控制模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)

26、第八章第八章 儀器分析法儀器分析法色譜工作站色譜工作站色譜工作站色譜工作站就是就是HPLC的軟件控制的軟件控制系統(tǒng)系統(tǒng)模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法色譜工作站色譜工作站工作站的兩工作站的兩大功能大功能1.控制儀器控制儀器2.處理數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法液相色譜儀器常見種類 high performance liquid chromatograph模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法液相色譜儀（2）模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量

27、測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法液相色譜儀（3）模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法液相色譜儀（4）模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法液相色譜儀（5）模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法液相色譜儀（6）模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法高效液相色譜法在藥典中的使用高效液相色譜法在藥典中的使用模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法高效液相圖譜高效液相圖譜各成分各成分依

28、次流依次流出色譜出色譜柱，從柱，從進(jìn)樣到進(jìn)樣到出峰的出峰的時(shí)間稱時(shí)間稱為保留為保留時(shí)間時(shí)間模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法三、定性方法三、定性方法定性定性: 確定確定成分歸屬，成分歸屬，依據(jù)與對(duì)照依據(jù)與對(duì)照品相比較時(shí)品相比較時(shí)，相同的保，相同的保留時(shí)間留時(shí)間模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法定量方法定量方法外標(biāo)法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法定量方法定量方法外標(biāo)法外標(biāo)法對(duì)照品濃度對(duì)照品峰面積樣品峰面積樣品濃度模塊四模塊四 藥物含量測定

29、技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法供試液（樣品供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）內(nèi)標(biāo)）內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)物對(duì)照液（對(duì)照對(duì)照液（對(duì)照+內(nèi)標(biāo)）內(nèi)標(biāo)）是樣品中不存在的物質(zhì)是樣品中不存在的物質(zhì)與被測組分峰靠近與被測組分峰靠近能與各組分完全分離能與各組分完全分離與被測組分的量接近與被測組分的量接近模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法對(duì)對(duì)樣樣內(nèi)內(nèi)對(duì)對(duì)內(nèi)內(nèi)樣樣樣樣樣樣內(nèi)內(nèi)內(nèi)內(nèi)對(duì)對(duì)對(duì)對(duì)內(nèi)內(nèi)內(nèi)內(nèi)相對(duì)相對(duì)WWAAAAWAWAWAWAf 校正因子：校正因子：模塊四模塊四 藥物含量測定

30、技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法1KAA 內(nèi)內(nèi)對(duì)對(duì)2KAA 內(nèi)內(nèi)樣樣%100%樣品取樣量12WWKK對(duì)樣品模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法例例內(nèi)標(biāo)液內(nèi)標(biāo)液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成釋成1.0mg/ml溶液溶液對(duì)照液對(duì)照液 精密稱取精密稱取VitE對(duì)照品對(duì)照品0.2011g置棕置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取密塞，振搖使溶解，取 13ul注入注入GC儀，儀，測定，計(jì)算測定，計(jì)算供試液供試液 精密稱取供試品精密稱取供試品0.1998

31、g置棕置棕 色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液 10ml，密塞，振搖使溶解，取，密塞，振搖使溶解，取13ul 注注入入GC儀，測定，計(jì)算儀，測定，計(jì)算模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法對(duì)照液對(duì)照液 內(nèi)內(nèi)對(duì)對(duì)AA供試液供試液805741296513 內(nèi)內(nèi)樣樣AA模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法HPLCHPLC操作注意事項(xiàng)操作注意事項(xiàng)流動(dòng)相嚴(yán)格過濾（流動(dòng)相嚴(yán)格過濾（0.45m微孔濾膜）微孔濾膜），不要相信任何商，不要相信任何商家宣傳的流動(dòng)相已過濾的保證。家宣傳的流動(dòng)相已過濾的保證

32、。樣品嚴(yán)格過濾。樣品嚴(yán)格過濾。流動(dòng)相需經(jīng)脫氣處理。流動(dòng)相需經(jīng)脫氣處理。模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638467基本原理基本原理 ： 色譜分離體系包括兩個(gè)相，其中的一相固定色譜分離體系包括兩個(gè)相，其中的一相固定不動(dòng)，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流不動(dòng)，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的氣體或液體，稱為流動(dòng)相。當(dāng)兩相過此固定相的氣體或液體，稱為流動(dòng)相。當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，反復(fù)多次地利用混合物中所有組作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，反復(fù)多次地利用混合物中所有組分

33、性質(zhì)的差異使彼此得到分離。兩相及兩相的相分性質(zhì)的差異使彼此得到分離。兩相及兩相的相對(duì)運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ)。對(duì)運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ)。 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638468氣相色譜系統(tǒng)氣相色譜系統(tǒng) ：主要由分離系統(tǒng)、檢測系：主要由分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和溫度控制系統(tǒng)統(tǒng)和溫度控制系統(tǒng) 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638469

34、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-22846384701.1.基線和色譜峰基線和色譜峰 無試樣通過檢測器時(shí)，檢測到的信號(hào)即為基線。2.2.保留值保留值 （1）時(shí)間表示的保留值）時(shí)間表示的保留值 保留時(shí)間（保留時(shí)間（tR）：）：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間 死時(shí)間（死時(shí)間（tM）：）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保留時(shí)間。 調(diào)整保留時(shí)間（調(diào)整保留時(shí)間（tR ）：）：tR= tRtM 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技

35、術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638471用來衡量色譜峰寬度的參數(shù)， 有三種表示方法：有三種表示方法：（1）標(biāo)準(zhǔn)偏差）標(biāo)準(zhǔn)偏差( )： 即0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半。（2）半峰寬）半峰寬(Y1/2)： 色譜峰高一半處的寬度 Y1/2 =2.354 （3）峰底寬）峰底寬(Wb)： Wb=4 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638472塔板理論-柱分離效能指標(biāo)色譜柱長

36、：色譜柱長：L，虛擬的塔板間距離：虛擬的塔板間距離：H，色譜柱的理論塔板數(shù)：色譜柱的理論塔板數(shù)：n，則三者的關(guān)系為：則三者的關(guān)系為： n = L / H理論塔板數(shù)與色譜參數(shù)之間的關(guān)系為：理論塔板數(shù)與色譜參數(shù)之間的關(guān)系為：222116545)()(./bRRWtYtn模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638473分離度的表達(dá)式：R =0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；R =1.0：分離程度98%；R =1.5：達(dá)99.7%（相鄰兩峰完全分離的標(biāo)準(zhǔn)）。(2)(1)(2

37、)(1)2()RRbbttRWW模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638474測定方法測定方法內(nèi)標(biāo)法加校正因子法（內(nèi)標(biāo)法加校正因子法（R：對(duì)照品：對(duì)照品S：內(nèi)標(biāo)：內(nèi)標(biāo)X：待測樣品）：待測樣品） 校正因子：校正因子： sSRRA cfAc%100%XssXAfcAc原料含量計(jì)算： 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638475 按按中國

38、藥典中國藥典2010版（二部）的規(guī)定測定維生素版（二部）的規(guī)定測定維生素E，做系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)時(shí)的數(shù)據(jù)如上表。做系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)時(shí)的數(shù)據(jù)如上表。 取維生素取維生素E對(duì)照品對(duì)照品20.80mg(98.0%)，精密加入濃度為，精密加入濃度為1.044mg/ml的內(nèi)標(biāo)物（正三十二烷）溶液的內(nèi)標(biāo)物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取溶解，取1l 注入氣相色譜儀，對(duì)照品峰面積為注入氣相色譜儀，對(duì)照品峰面積為481736，內(nèi)標(biāo)物峰面，內(nèi)標(biāo)物峰面積為積為238787，求維生素，求維生素E的理論塔板數(shù)、維生素的理論塔板數(shù)、維生素E與內(nèi)標(biāo)物的與內(nèi)標(biāo)物的分離度和校正因子各為多少？再精密稱取維生素分離度和校正因子各

39、為多少？再精密稱取維生素E供試品供試品22.68mg，內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物28.00mg，用氣相色譜法測得供試品峰面，用氣相色譜法測得供試品峰面積為積為529887，內(nèi)標(biāo)物峰面積為，內(nèi)標(biāo)物峰面積為644911，計(jì)算供試品中維生素，計(jì)算供試品中維生素E的含量。的含量。 w物質(zhì)Rt/minW(1/2h)/minW/min對(duì)照品8.880.250.6內(nèi)標(biāo)物5.740.61.2實(shí)例實(shí)例 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-228463847622/28.885.54 ()5.54*699

40、00.25Rhtnw21122 8.885.742()3.490.6 1.2RRttRww2387871.0440.967848176320.80*98.0%10.0sSRRAcfAc模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638477%100%*100%5298870.9678*28.00644911*100%98.2%22.68XXssssXxAAfcfmAAEcm維生素模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638478高效液相色譜法高效液相色譜法液相：固定相為液相液相：固定相為液相高效、高壓、高速高效、高壓、高速高柱效、高選擇性、分析速度快、靈敏度高、重高柱效、高選擇性、分析速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、應(yīng)用范圍廣復(fù)性好、應(yīng)用范圍廣 模塊四模塊四 藥物含量測定技術(shù)藥物含量測定技術(shù)第八章第八章 儀器分析法儀器分析法藥物分析教研室藥物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020-2284638479高效液相色譜儀高效液