第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)課件

1、第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)花藥花藥( (花粉花粉(hufn)(hufn) )培養(yǎng)培養(yǎng)第一頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)花藥培養(yǎng)花藥培養(yǎng)是是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥將花粉發(fā)育至一定階段的花藥(huyo)接接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉花藥和花粉(hufn)培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)第二頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)l花粉培養(yǎng)：花粉培養(yǎng)：是將花粉從花藥中分離出來是將花粉從花藥中分

2、離出來, ,接種到人工培接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而(jn r)(jn r)分化成植株的過程。分化成植株的過程。油菜成熟花藥油菜成熟花藥(huyo)的的結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉花藥和花粉(hufn)培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)第三頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)一、花藥和花粉一、花藥和花粉(hufn)的培養(yǎng)方法：的培養(yǎng)方法：（一）花粉發(fā)育時(shí)期：（一）花粉發(fā)育時(shí)期：1、適宜、適宜(shy)時(shí)期時(shí)期：?jiǎn)魏似冢簡(jiǎn)魏似?尤其是單核中、晚期尤其是單核中、晚期(單核靠邊期單核靠邊期)雄配子體的發(fā)育 營養(yǎng)細(xì)胞營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞生殖

3、細(xì)胞精子精子第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第四頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)2、花粉發(fā)育時(shí)期、花粉發(fā)育時(shí)期(shq)的檢測(cè)：的檢測(cè)：外部形態(tài)觀察外部形態(tài)觀察：( (單核靠邊期的花粉單核靠邊期的花粉) ) 小麥旗葉和旗葉下一葉之葉耳距離約是小麥旗葉和旗葉下一葉之葉耳距離約是5 515cm15cm。 煙草中，花蕾的花冠大約與萼片等長。煙草中，花蕾的花冠大約與萼片等長。壓片染色法壓片染色法：是檢測(cè)花粉發(fā)育時(shí)期的簡(jiǎn)便有效：是檢測(cè)花粉發(fā)育時(shí)期的簡(jiǎn)便有效方法方法(fngf)(fngf)，常用染色劑為，常用染色劑為醋酸洋紅醋酸洋紅。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉

4、花藥和花粉(hufn)培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)第五頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)（二）培養(yǎng)(piyng)過過程程 1 花藥培養(yǎng)過程花藥培養(yǎng)過程 1）預(yù)處理）預(yù)處理:低溫冷藏低溫冷藏是最常用是最常用(chn yn)的方法的方法煙草煙草79 ，714d黑麥黑麥13 ，714d第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉花藥和花粉(hufn)培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)第六頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)（二）培養(yǎng)(piyng)過過程程 2）表面消毒）表面消毒 用用70%酒精酒精(jijng)噴灑或擦拭花器或包被著麥噴灑或擦拭花器或包被著麥穗的葉鞘表面，即可以達(dá)到滅菌的要求。穗的葉鞘表

5、面，即可以達(dá)到滅菌的要求。第一節(jié)第一節(jié) 花藥花藥(huyo)和花粉培養(yǎng)技術(shù)和花粉培養(yǎng)技術(shù)第七頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)（二）培養(yǎng)(piyng)過過程程 3）接種）接種 在無菌的條件在無菌的條件(tiojin)下把雄蕊上的花藥從下把雄蕊上的花藥從花絲上摘下，水平地放在培養(yǎng)基上進(jìn)行培花絲上摘下，水平地放在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。養(yǎng)。 不要使花藥受到損傷，否則會(huì)刺激花藥壁形不要使花藥受到損傷，否則會(huì)刺激花藥壁形成二倍體愈傷組織。成二倍體愈傷組織。 接種的接種的“密度效應(yīng)密度效應(yīng)”，要有一個(gè)合理的群，要有一個(gè)合理的群體數(shù)量。體數(shù)量。 第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)

6、(piyng)技術(shù)技術(shù)第八頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)（二）培養(yǎng)(piyng)過過程程4）培養(yǎng)形成花粉）培養(yǎng)形成花粉(hufn)植株。植株。 花粉花粉-愈傷組織愈傷組織-苗苗 花粉花粉-胚狀體胚狀體-苗苗選幼年選幼年(yunin)樹樹花蕾花蕾第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)第九頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)（二）培養(yǎng)(piyng)過過程程4）培養(yǎng)形成花粉植株）培養(yǎng)形成花粉植株(zhzh)。 培養(yǎng)方式：培養(yǎng)方式： 瓊脂固化培養(yǎng)基表面培養(yǎng)瓊脂固化培養(yǎng)基表面培養(yǎng) 30%Ficoll的液體培養(yǎng)基表面漂浮培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基表面漂浮

7、培養(yǎng) 固固-液雙層培養(yǎng)液雙層培養(yǎng) 第一節(jié)第一節(jié) 花藥花藥(huyo)和花粉培養(yǎng)技術(shù)和花粉培養(yǎng)技術(shù)第十頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)水稻水稻(shudo)(shudo)花藥培養(yǎng)過程：花藥培養(yǎng)過程：旗葉鞘旗葉鞘(yqio)(yqio)用用7070酒精擦洗一遍酒精擦洗一遍剝?nèi)テ烊~鞘剝?nèi)テ烊~鞘(yqio)(yqio)，取出稻，取出稻穗穗10漂白粉漂白粉10 min無菌水洗無菌水洗3 3次次培養(yǎng)培養(yǎng)5 5天，花藥變褐，天，花藥變褐，2020天后花藥裂開，天后花藥裂開，長出淡黃色的花粉愈傷組織，先長芽，長出淡黃色的花粉愈傷組織，先長芽，后長根，形成幼苗。后長根，形成幼苗。用接種環(huán)接種到用

8、接種環(huán)接種到培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上左手持穗，右手左手持穗，右手用鑷子取花藥，用鑷子取花藥，放無菌培養(yǎng)皿中放無菌培養(yǎng)皿中第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)第十一頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)脫毒技術(shù)花藥培養(yǎng)脫毒技術(shù)(jsh)l1974年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒；年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒；l花藥采取時(shí)期花藥采取時(shí)期單核期：花蕾單核期：花蕾(huli)(huli)4-64-6mmmm，花藥花藥1 1mmmml花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT

9、2mg/L+蔗糖蔗糖3030g+g+瓊脂瓊脂7 7g/Lg/Ll增殖分化培養(yǎng)基增殖分化培養(yǎng)基MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖蔗糖3030g+g+瓊脂瓊脂7 7g/Lg/Ll生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基1/21/2MS+IBA0.2mg/L+MS+IBA0.2mg/L+活性炭活性炭3 3g/L+g/L+蔗糖蔗糖2020g+g+瓊脂瓊脂7 7g/Lg/L第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第十二頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)草莓花藥愈傷組織草莓花藥愈傷組織(zzh),花

10、藥植株花藥植株第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第十三頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)2、花粉、花粉(hufn)培養(yǎng)培養(yǎng)l花粉培養(yǎng)花粉培養(yǎng)(piyng)成苗途徑與花藥培養(yǎng)成苗途徑與花藥培養(yǎng)(piyng)比較比較: 相同點(diǎn)相同點(diǎn)：l胚狀體成苗途徑、愈傷組織再分化成苗途徑胚狀體成苗途徑、愈傷組織再分化成苗途徑 不同點(diǎn)不同點(diǎn)：l花粉培養(yǎng)：花粉培養(yǎng)： 需進(jìn)行花粉的分離需進(jìn)行花粉的分離 特殊的花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)特殊的花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第十四頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)花粉培養(yǎng)花粉培養(yǎng)(p

11、iyng)過程過程取花蕾（鏡檢）取花蕾（鏡檢）預(yù)培養(yǎng)數(shù)天預(yù)培養(yǎng)數(shù)天取花藥取花藥消毒消毒分離花粉分離花粉接種接種培養(yǎng)培養(yǎng)愈傷組織發(fā)生愈傷組織發(fā)生第一節(jié)第一節(jié) 花藥花藥(huyo)和花粉培養(yǎng)技術(shù)和花粉培養(yǎng)技術(shù)第十五頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基基本基本(jbn)培培養(yǎng)基養(yǎng)基激素激素(j s)種種類和濃度類和濃度蔗糖蔗糖(zhtng)濃度濃度第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)第十六頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)（一）基本（一）基本(jbn)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基： lB5B5培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：適合適合(shh)(shh)豆科和十字花科花藥

12、培養(yǎng)；豆科和十字花科花藥培養(yǎng)；lN6N6培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第十七頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 花藥花藥(huyo)和花粉培養(yǎng)技術(shù)和花粉培養(yǎng)技術(shù)u 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素可促進(jìn)胚狀體形成；可促進(jìn)胚狀體形成； 生長素生長素可誘導(dǎo)可誘導(dǎo)(yudo)(yudo)愈傷組織形成。愈傷組織形成。u 細(xì)胞分裂素與生長素比值高細(xì)胞分裂素與生長素比值高時(shí)可誘導(dǎo)時(shí)可誘導(dǎo)愈傷組織分化苗愈傷組織分化苗（二）激素（二）激素(j s)種類和濃度種類和濃度第十八頁，共二十五頁。第六講

13、(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)p較高較高濃度濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉蔗糖可誘導(dǎo)花粉(hufn)(hufn)形成形成愈傷組織愈傷組織；p較低較低濃度濃度蔗糖可使愈傷組織分化成蔗糖可使愈傷組織分化成苗苗。第一節(jié)第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)（三）蔗糖（三）蔗糖(zhtng)濃度濃度第十九頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)三、單倍體植株三、單倍體植株(zhzh)染色體加倍的方法染色體加倍的方法第一節(jié)第一節(jié) 花藥花藥(huyo)和花粉培養(yǎng)技術(shù)和花粉培養(yǎng)技術(shù)1、自然加倍：自然加倍：花粉花粉(hufn)細(xì)胞核有絲分裂或核融合，染色體可自然細(xì)胞核有絲分裂或核融合，染色體可自然

14、加倍，獲得純合二倍體。加倍，獲得純合二倍體。2、人工加倍人工加倍：用秋水仙素處理單倍體植物，可使染色體加倍用秋水仙素處理單倍體植物，可使染色體加倍（溶液浸苗、處理愈傷組織和用含（溶液浸苗、處理愈傷組織和用含0.4%0.4%秋水仙素的羊毛脂涂秋水仙素的羊毛脂涂抹單倍體植株的頂芽、腋芽，可得到能結(jié)實(shí)的二倍體植株）抹單倍體植株的頂芽、腋芽，可得到能結(jié)實(shí)的二倍體植株）3、將單倍體植株誘導(dǎo)的、將單倍體植株誘導(dǎo)的愈傷組織反復(fù)繼代培養(yǎng)愈傷組織反復(fù)繼代培養(yǎng)，再分化可得到，再分化可得到二倍體植株。二倍體植株。第二十頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù) 花藥花藥(huyo)和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用和花粉培養(yǎng)的

15、應(yīng)用 -單倍體植株育種單倍體植株育種1 1、克服后代分離，縮短育種周期；、克服后代分離，縮短育種周期；2 2、有利于篩選隱性突變體，選擇、有利于篩選隱性突變體，選擇(xunz)(xunz)效效率高率高; ;3 3、有利于隱性基因控制性狀的選擇、有利于隱性基因控制性狀的選擇4 4、快速獲得自交系的超雄株、快速獲得自交系的超雄株第二節(jié)第二節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)(piyng)的應(yīng)用的應(yīng)用第二十一頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)大大縮短育種大大縮短育種(y zhng)周期周期第二節(jié)第二節(jié) 花藥和花粉花藥和花粉(hufn)培養(yǎng)的應(yīng)用培養(yǎng)的應(yīng)用第二十二頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)技術(shù)l(1)花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)?；ㄋ幣囵B(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)。l(2)花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)行接種。花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)行接種。l(3)花藥培養(yǎng)包括：選擇材料花藥培養(yǎng)包括：選擇材料(cilio)-消毒消毒-接種培養(yǎng)接種培養(yǎng)-愈合組織愈合組織生成生成-分化出單倍體植株。分化出單倍體植株。l(4)花粉培養(yǎng)包括花粉的分離花粉培養(yǎng)包括花粉的分離-預(yù)處理預(yù)處理-培養(yǎng)過程。培養(yǎng)過程。本章本章(bn zhn)小結(jié)：小結(jié)：第二十三頁，共二十五頁。第六講(3)花藥(花粉)培養(yǎng)